Die Rolle der Perizyten bei steriler Inflammation:
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München
Dr. Hut
2012
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LNHALTSVERZEICHNNIS 4
I EINLEITUNG 8
II LITERATURUEBERSICHT 9
1 MORPHOLOGIE U N D FUNKTION VON PERIZYTEN 9
2 EINFLUSS VON ENTZUENDUNGSMEDIATOREN A U F PERIZYTEN 10
3 PHYSIOLOGIE D E R STERILEN INFLAMMATION 11
4 A B L A U F D E R E N T Z UE N D U N G S K A S K A D E 13
5 ROLLE D E R NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN U N D M O N O Z Y T E N BEI
STERILER INFLAMMATION. 15
5.1 MORPHOLOGIE U N D FUNKTION MYELOIDER ZELLEN 15
5.2 FAKTOREN D E R REKRUTIERUNG MYELOIDER ZELLEN IN ENTZUENDETES G E W E
B E 18
5.3 INTERSTITIELLE MIGRATION I 21
6 MODELLE D E R STERILEN INFLAMMATION 2 3
III ZIELSETZUNG D E R A R B E I T 2 4
I V MATERIAL U N D M E T H O D E N 2 7
1 TIERE 2 7
1.1 H A L T U N G U N D Z U C H T 2 7
1.2 TIERSTAEMME 2 8
1.2.1 N G 2 D S R E D 2 8
1.2.2 L Y S M - E G F P 2 9
1.2.3 C X 3 C R L - E G F P 2 9
1.3 ERSTELLUNG VON CHIMAEREN 3 0
1.3.1 BESTRAHLUNG 3 0
1.3.2 PRAEPARATION VON K N O C H E N M A R K 3 0
1.3.3 SCHWANZVENENINJEKTION 3 1
2 ZELLKULTUR 3 2
2.1 H U M A N E PLAZENTARE PERIZYTEN 3 2
2.2 IMMUNFLUORESZENZ-FAERBUNG 3 2
2.2.1 D U R C H F UE H R U N G D E R I M M U N F L U O R E S Z E N Z - F
AE R B U N G 3 2
2.2.2 KONFOKALE M I K R O S K O P I E 3 4
2.2.2.1 A U F B A U DES KONFOKALEN M I K R O S K O P E S 3 4
2.2.2.2 F AE R B U N G F UE R DIE KONFOKALE MIKROSKOPIE 3 4
2.2.2.3 A U S W E R T U N G MITTELS DES KONFOKALEN M I K R O P S K O P E
S 3 5
2.3 STIMULATION VON PERIZYTEN 3 5
2.3.1 PELLETIERUNG STIMULIERTER PERIZYTEN 3 5
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNNIS
5
2.3.2 HERSTELLUNG KONDITIONIERTER M E D I E N UND G E W I N N U N G VON
M E D I U M UE B E R S T A N D
F UE R E L I S A 3 6
2.3.3 G E W I N N U N G V O N NEKROTISCHEM ZELLLYSAT 3 7
2.4 A N A L Y S E MITTELS REAL-TIME P C R 3 7
2.4.1 ISOLATION VON R N A AUS ZELLPELLETS 3 7
2.4.2 C D N A SYNTHESE 3 8
2.4.3 REAL-TIME P C R 3 9
2.5 CHEMOTAXIS A S S A Y 4 0
2.5.1 ISOLATION VON NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN 4 0
2.5.2 ISOLATION V O N M O N O Z Y T E N 4 1
2.5.3 I N VITRO CHEMOTAXIS ASSAYS 4 2
2.5.3.1 NEUTROPHILE GRANULOZYTEN 4 2
2.5.3.2 M O N O Z Y T E N 4 2
2.5.4 INHIBITORISCHER CHEMOTAXIS A S S A Y 4 3
2.6. A P O P T O S E A S S A Y UND AKTIVIERUNGS A S S A Y 4 3
2.6.1 PRINZIP D E R DURCHFLUSSZYTOMETRIE 4 3
2.6.2 D U R C H F UE H R U N G DES A P O P T O S E ASSAYS 4 4
2.6.3 D U R C H F UE H R U N G DES AKTIVIERUNGS ASSAYS 4 5
2.7 E L I S A 4 6
2.7.1 PRINZIP DES E L I S A 4 6
2.7.2 D U R C H F UE H R U N G DES E L I S A 4 6
3 HISTOLOGISCHE VERFAHREN 4 7
3.1 IMMUNHISTOLOGIE 4 7
3.1.1 GEFRIERSCHNITTE 4 7
3.1.1.1 O R G A N - E N T N A H M E F UE R IMMUNHISTOLOGIE 4 7
3.1.1.2 A N F E R T I G U N G D E R GEFRIERSCHNITTE 4 7
3.1.2 I M M U N F L U O R E S Z E N Z 4 7
3.1.2.1 PRINZIP D E R IMMUNHISTOLOGISCHEN FAERBUNGEN 4 7
3.1.2.2 D U R C H F UE H R U N G D E R IMMUNHISTOLOGIE 4 8
3.2 A U S W E R T U N G MITTELS FLUORESZENZMIKROSKOPIE 4 9
4 I N VIVO 2-PHOTONEN MIKROSKOPIE 4 9
4.1 A U F B A U DES 2-PHOTONEN M I K R O S K O P S 4 9
4.2 A U S W E R T U N G MITTELS DES 2-PHOTONEN M I K R O S K O P E S 51
4.3 ANAESTHESIE 5 3
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNNIS 6
4.3.1 D U R C H F UE H R U N G D E R N A R K O S E 5 3
4.3.2 N A R K O S E M A N A G E M E N T U N D - UE B E R W A C H U N G 5
4
4.4 FEMORALISKATHETER U N D APPLIKATION VON FLUORESZENZFARBSTOFFEN 5 4
4.5 O H R M O D E L L 5 7
4.5.1 INJEKTION CHEMOTAKTISCH W I R K E N D E R SUBSTANZEN 5 8
4.5.2 LASER VERLETZUNG 5 9
5 W H O L E M O U N T STAINING 5 9
5.1 D U R C H F UE H R U N G DES W H O L E M O U N T STAININGS 6 0
5.2 A U S W E R T U N G MITTELS 2-PHOTONEN MIKROSKOPIE 6 0
6 VERSUCHSPLANUNG U N D D U R C H F UE H R U N G 61
7 STATISTISCHE V E R S U C H S A U S W E R T U N G 6 2
V ERGEBNISSE 6 3
1 CHARAKTERISIERUNG D E R H U M A N E N PERIZYTEN 6 3
2 EXPRESSION VON RZEPTOREN D U R C H PERIZYTEN 6 4
3 EXPRESSION V O N C H E M O K I N E N U N D ADHAESIONSMOLEKUELEN D U R C
H PERIZYTEN 6 5
4 CHEMOTAKTISCHE W I R K U N G V O N PERIZYTEN A U F MYELOIDE ZELLEN 7 4
5 ANTI-APOPTOTISCHE UND AKTIVIERENDE W I R K U N G V O N PERIZYTEN A U F
NEUTROPHILE
GRANULOZYTEN IN VITRO 7 8
6 DIE STERILE INFLAMMATION IM M A U S M O D E L L 81
7 INTERAKTION VON PERIZYTEN MIT MYELOIDEN ZELLEN IN VIVO 8 4
7.1 UNGERICHTETE MIGRATION BEI INJEKTION V O N ( M L P BZW. T N F - A 8
4
7.2 GERICHTETE MIGRATION BEI LASER-VERLETZUNG 8 8
V I DISKUSSION 91
1 W A H L D E R MAUSLINIEN 91
2 W A H L DES OHRMODELLS F UE R DIE 2-PHOTONEN M I K R O S K O P I E 9 1
3 W A H L D E R H U M A N E N PERIZYTEN FUER DIE IN VITRO VERSUCHE 9 2
4 DISKUSSION D E R ERGEBNISSE 9 2
4.1 PERIZYTEN DETEKTIEREN REIZE STERILER INFLAMMATION 9 3
4.2 PERIZYTEN REAGIEREN A U F INFLAMMATORISCHE REIZE MIT EXPRESSION V O
N
ADHAESIONSMOLEKUELEN U N D C H E M O K I N E N 9 4
4.3 PERIZYTEN SEZERNIEREN FAKTOREN, DIE CHEMOTAKTISCH U N D
ANTI-APOPTOTISCH A U F
MYELOIDE ZELLEN W I R K E N 9 6
4.4 PERIZYTEN INTERAGIEREN IN VIVO MIT MYELOIDEN ZELLEN 1 0 0
5 A U S B L I C K 102
IMAGE 4
INHALTS VERZEICHNNIS 7
VII Z U S A M M E N F A S S U N G 1 0 3
VIII S U M M A R Y 104
IX ABKUERZUNGSVERZEICHNNIS 105
X ABBILDUNGSVERZEICHNIS 108
X I TABELLEN VERZEICHNIS 110
XII LITERATURVERZEICHNIS 111
XIII D A N K S A G U N G 119 |
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