Auswirkung von Hypoxie und Einfluss des Hypoxie-induzierbaren Transkriptionsfaktors HIF-1alpha auf die antibakterielle Kapazität von dendritischen Zellen und Makrophagen:
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG - 1 -
1.1 HYPOXIE ALS KENNZEICHEN INFIZIERTER GEWEBE - 1 -
1.2 MAKROPHAGEN UND DENDRITISCHE ZELLEN- ZELLEN D E R I M M U N A N T W
O R T - 2 -
1.3 DER HYPOXIE-INDUZIERBARE TRANSKRIPTIONSFAKTOR HIF VERMITTELT DIE
ANPASSUNG AN
HYPOXISCHE BEDINGUNGEN - 4 -
1.3.1 STRUKTUR DES HIF-PROTEINS - 4 -
1.3.2 SAUERSTOFFABHAENGIGE REGULATION D E R AKTIVITAET DES
HYPOXIE-INDUZIERBAREN
TRANSKRIPTIONSFAKTORS - 5 -
1.3.3 PARALOGE DES TRANSKRIPTIONSFAKTORS HIF UND DEREN ZIELGENE - 8 -
1.4 DIE BEDEUTUNG VON H I F - L A INNERHALB DER I M M U N A N T W O R T
- 1 0 -
1.4.1 SAUERSTOFFUNABHAENGIGE STABILISIERUNG VON H I F - L A IN ZELLEN DES
IMMUNSYSTEMS
- 1 0 -
1.4.2 H I F - L A REGULIERT DIE FUNKTIONEN PHAGOZYTIERENDER ZELLEN - 1 1
-
1.5 HYPOXIE BEEINFLUSST ANTIMIKROBIELLE MECHANISMEN VON LEUKOZYTEN - 1 6
-
1.5.1 PRODUKTION VON REAKTIVEN SAUERSTOFFSPEZIES - 1 6 -
1.5.2 PRODUKTION VON REAKTIVEN STICKSTOFFSPEZIES - 1 8 -
1.5.3 ROLLE D E R NOS2 UND PHOX IN D E R PATHOGENESE VON INFEKTIONEN - 1
9 -
1.6 OFFENE FRAGEN - 2 2 -
1.7 ZIELSETZUNG DER ARBEIT - 2 3 -
2 ERGEBNISSE - 2 5 -
2.1 ROLLE DES HYPOXIE-INDUZIERBAREN TRANSKRIPTIONSFAKTORS H I F - L A F
UE R DIE ANTIBAKTERIELLE
KAPAZITAET VON DENDRITISCHEN ZELLEN UND MAKROPHAGEN - 25 -
2.1.1 ETABLIERUNG EINER METHODE ZUR TRANSFEKTION VON. MAKROPHAGEN M I T
SIRNA
MOLEKUELEN - 27 -
2.1.2 AUSWIRKUNG EINER SIRNA-VERMITTELTEN UNTERDRUECKUNG DER AKTIVITAET
VON H I F - L A
A U F DIE ANTIBAKTERIELLE KAPAZITAET VON DENDRITISCHEN ZELLEN UND
MAKROPHAGEN .
- 3 5 -
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IMAGE 2
2.2 AUSWIRKUNG VON HYPOXIE AUF DIE ANTIBAKTERIELLE KAPAZITAET VON
DENDRITISCHEN ZELLEN
UND MAKROPHAGEN - 39 -
2.2.1 UNTERSUCHUNG DES BAKTERIELLEN WACHSTUMS UNTER HYPOXISCHEN
BEDINGUNGEN .
- 4 0 -
2.3 EINFLUSS VON HYPOXIE A U F DIE PRODUKTION REAKTIVER STICKSTOFF- UND
SAUERSTOFFSPEZIES.
- 4 9 -
2.4 BETEILIGUNG D E R INDUZIERBAREN NO-SYNTHASE (NOS2) AN DER
SAUERSTOFFABHAENGIGEN
REGULATION DER ANTIBAKTERIELLEN KAPAZITAET MONONUKLEAERER MYELOISCHER
ZELLEN . . . - 5 2 -
2.5 AUSWIRKUNG EINES VERLUSTES DER AKTIVITAET DER PHOX UND NOS2 AUF DIE
ANTIBAKTERIELLE
KAPAZITAET MYELOISCHER MONONUKLEAERER ZELLEN - 5 4 -
2.6 AUSWIRKUNG DER HEMMUNG D E R MITOCHONDRIALEN AKTIVITAET AUF DIE
ELIMINIERUNG
PHAGOZYTIERTER BAKTERIEN - 58 -
3 DISKUSSION * - 6 7 -
3.1 DIE ANTIBAKTERIELLE KAPAZITAET MYELOISCHER MONONUKLEAERER ZELLEN
GEGENUEBER E.COLI
UND S.AUREUS IST NICHT VON DER AKTIVITAET DES HYPOXIE-INDUZIERBAREN
TRANSKRIPTIONSFAKTORS H I F - L A ABHAENGIG - 6 7 -
3.2 HYPOXIE UND DIE STABILISIERUNG VON H I F - L A - " Z U C K E R B R O
T UND PEITSCHE" - 6 8 -
3.3 HIF-2A INNERHALB D E R ANGEBORENEN I M M U N A N T W O R T - 69 -
3.4 HYPOXIE BEEINTRAECHTIGT DIE ANTIBAKTERIELLE KAPAZITAET VON
DENDRITISCHEN ZELLEN U N D
MAKROPHAGEN-DER EINFLUSS DES SAUERSTOFFPARTIALDRUCKES AUF DIE A B W E H
R INFEKTIOESER
MIKROORGANISMEN - 71 -
3.5 DIE VERMINDERTE PRODUKTION REAKTIVER SAUERSTOFF- UND
STICKSTOFFSPEZIES IST NICHT
(VOLLSTAENDIG) F UE R DIE BEEINTRAECHTIGUNG DER ANTIMIKROBIELLEN KAPAZITAET
MYELOISCHER
MONONUKLEAERER ZELLEN UNTER HYPOXISCHEN BEDINGUNGEN VERANTWORTLICH - 73 -
3.6 DIE ROLLE D E R MITOCHONDRIALEN AKTIVITAET INNERHALB D E R
ANGEBORENEN IMMUNABWEHR.
- 7 5 -
3.6.1 DIE HEMMUNG D E R MITOCHONDRIALEN AKTIVITAET SCHEINT F UE R DIE
EINGESCHRAENKTE
ANTIBAKTERIELLE KAPAZITAET HYPOXISCHER MYELOISCHER ZELLEN VERANTWORTLICH
ZU
SEIN - 75 -
IMAGE 3
3.6.2 MITOCHONDRIALE ROS-EFFEKTORMOLEKUELE BEI DER ABWEHR PHAGOZYTIERTER
PATHOGENE UND SCHLUESSEL ZUR AUFKLAERUNG DER SOUERSTOFFABHAENGIGEN
REGULATION DER ANTIBAKTERIELLEN KAPAZITAET MYELOISCHER MONONUKLEAERER
ZELLEN?
- 7 7 -
3.6.3 MITOPHAGIE UND PHAGOSOMALE DEGRADIERUNG - STAU I M VESIKELVERKEHR
79 -
3.6.4 DIE AENDERUNG DES ZELLULAEREN REDOX-POTENTIALS KOENNTE DIE AKTIVITAET
ANTIMIKROBIELLER PROTEINE BEEINFLUSSEN - 8 0 -
3.6.5 " F R O M BENCH T O BEDSIDE"- KLINISCHE RELEVANZ DER BEFUNDE ZUR
MITOCHONDRIALEN AKTIVITAET BEI D E R A B W E H R INFEKTIOESER
MIKROORGANISMEN. . - 82 -
4 ZUSAMMENFASSUNG - 8 5 -
5 MATERIAL UND METHODEN - 8 7 -
5.1 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN - 87 -
5.2 ANTIKOERPER - 9 0 -
5.3 PRIMER/SONDEN F UE R QUANTITATIVE ECHTZEIT-PCR (QRT-PCR) - 92 -
5.4 SIRNA MOLEKUELE - 9 3 -
5.5 ZELLKULTURMEDIEN UND ZUSAETZE - 94 -
5.6 VERWENDETE ZELLLINIEN/ PRIMAERE ZELLEN - 95 -
5.7 VERWENDETE BAKTERIENSTAEMME - 9 6 -
5.8 VERSUCHSTIERE - 9 6 -
5.9 AUSWERTUNG UND DARSTELLUNG D E R DATEN (SOFTWARE) - 9 7 -
5.10 LABORGERAETE - 98 -
5.11 PUFFER UND LOESUNGEN - 99 -
5.12 METHODEN - 1 0 0 -
5.12.1 ANZUCHT VON BAKTERIEN - 1 0 0 -
5.12.2 HERSTELLUNG ELEKTROKOMPETENTER BAKTERIEN - 1 0 0 -
5.12.3 TRANSFORMATION VON BAKTERIEN M I T PLASMIDEN - 1 0 1 -
5.12.4 ANALYSE DES WACHSTUMS VON BAKTERIEN - 1 0 1 -
5.12.5 GEWINNUNG MURINER MYELOISCHER MONONUKLEAERER ZELLEN - 1 0 2 -
IMAGE 4
5.12.6 GEWINNUNG VON GM-CSF-HALTIGEM MEDIUMZUSATZ - 1 0 3 -
5.12.7 GEWINNUNG VON M-C5F-HOLTIGEM MEDIUMZUSATZ - 1 0 4 -
5.12.8 NACHWEIS VON ZELLULAEREN OBERFLOECHENMOLEKUELEN MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
- 1 0 4 -
5.12.9 HYPOXISCHE INKUBATION VON ZELLEN - 1 0 5 -
5.12.10 INFEKTION VON DENDRITISCHEN ZELLEN UND MAKROPHAGEN M I T
BAKTERIEN - 1 0 5 -
5.12.11 ISOLIERUNG VON PROTEIN AUS ZELLEN - 1 0 6 -
5.12.12 BESTIMMUNG D E R PROTEINKONZENTRATION - 1 0 6 -
5.12.13 SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE - 1 0 7 -
5.12.14 WESTERNBLOT (WET-BLOT VERFAHREN) - 1 0 7 -
5.12.15 NACHWEIS VON PROTEINEN A U F PVDF-MEMBRANEN - 1 0 7 -
5.12.16 RNA ISOLIERUNG AUS ZELLKULTUREN - 1 0 8 -
5. 12.17 CDNA SYNTHESE - 1 0 9 -
5.12.18 QUANTITATIVE REAL-TIME PCR - 1 0 9 -
5.12.19 UNTERSUCHUNG D E R ANTIBAKTERIELLEN KAPAZITAET MYELOISCHER
MONONUKLEAERER ZELLEN
- 1 1 0 -
5.12.20 ANALYSE DES INTRAZELLULAEREN BAKTERIENWACHSTUMS - 1 1 1 -
5.12.21 NACHWEIS DER AKTIVITAET DER NOS2 (GRIESS ASSAY) - 1 1 4 -
5.12.22 NACHWEIS REAKTIVER SAUERSTOFFSPEZIES MITTELS CM-H 2DCFDA - 1 1 4
-
5.12.23 TRANSFEKTION VON ZELLEN M I T SIRNA MITTELS ELEKTROPORATION - 1
1 5 -
5.12.24 UNTERSUCHUNG DER VIABILITAET VON ZELLEN - 1 1 6 -
6 LITERATURVERZEICHNIS - H8 -
7 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS -135 -
8 PUBLIKATIONEN - 1 4 0 -
9 DANKSAGUNG - 1 4 2 -
10 ANHANG -143 |
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