Untersuchungen zu Expressionsregulation und molekularem Wirkmechanismus des Transkriptionsfaktors Sox10 in Gliazellen der Maus:
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ABBILDUNGSVERZEICHNIS V
ABBILDUNGEN V
ZUSAMMENFASSUNG 1
SUMMARY 2
1 EINLEITUNG 3
1.1 ENTWICKLUNG DES NERVENSYSTEMS IN VERTEBRATEN 3
1.1.1 NEURULATION 3
1.1.2 DIE NEURALLEISTE UND IHRE DERIVATE 3
1.2 GLIAZELLEN DES NERVENSYSTEMS 5
1.2.1 GLIAZELLEN DES ZENTRALEN NERVENSYSTEMS 6
1.2.1.1 GLIALE ZELLTYPEN DES ZNS 6
1.2.1.2 OLIGODENDROZYTEN-ENTWICKLUNG 7
1.2.1.3 MYELINISIERUNG VON OLIGODENDROZYTEN 12
1.2.2 GLIAZELLEN DES PERIPHEREN NERVENSYSTEMS 14
1.2.2.1 GLIALE ZELLTYPEN DES PNS 14
1.2.2.2 SCHWANN-ZELL-ENTWICKLUNG 15
1.2.2.3 MYELINISIERUNG VON SCHWANN-ZELLEN 18
1.3 SOX-PROTEINE 20
1.3.1 SOXE-PROTEINE 22
1.3.2 SOX10 25
1.3.3 EVOLUTIONAER KONSERVIERTE, NICHT KODIERENDE REGIONEN DES SOX10-
GENS 26
1.3.4 ANALYSE DER U2- EKR IN U2-LACZ- TRANSGENEN MAEUSEN 29
2 PROBLEMSTELLUNG 33
3 ERGEBNISSE 35
3.1 ANALYSE DER NICHT-KODIERENDEN, EVOLUTIONAER KONSERVIERTEN REGION U2
35
3.1.1 KOEXPRESSION DES U2-LACZ- TRANSGENS MIT ZELLTYPSPEZIFISCHEN
MARKERN 35
3.1.2 REGULATION DER U2-AKTIVITAET IN OLIGODENDROZYTEN 39
3.1.2.1 REGULATION DER U2-AKTIVITAET IN 33B-ZELLEN DURCH OLIG2 UND NKX6.2
39
3.1.2.2 ANALYSE POTENTIELLER TRANSKRIPTIONSFAKTOR-BINDESTELLEN IN DER
U2-REGION ...42
3.1.2.3 INTERAKTIONSSTUDIE DER TRANSKRIPTIONSFAKTOREN OLIG2 UND NKX6.2
49
3.1.2.4 ABHAENGIGKEIT DER U2-AKTIVITAET VON OLIG2-BINDUNG IN VIVO 51
3.2 ANALYSE DER EVOLUTIONAER KONSERVIERTEN REGION E4 IM INTRON I DES DHH-
GENS 55
3.2.1 IDENTIFIZIERUNG POTENTIELLER GENREGULATORISCHER ELEMENTE IM
D/IH-LOCUS 55
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.1.1 DAS INTRON I DES DHH- GENS BESITZT ENHANCER- AKTIVITAET IN DER
S16 SCHWANNOM-ZELLLINIE 56
3.2.1.2 ANALYSE DER EN/IANCER-AKTIVITAET EINES EVOLUTIONAER KONSERVIERTEN
BEREICHS IM HINTEREN TEIL DES INTRONS I DES DHH- GENS 59
3.2.2 IN V/ FRO-UNTERSUCHUNGEN ZUM EINFLUSS VON SOX10 AUF DIE
ENHANCER-AKTIVITAET ....61
3.2.2.1 DER INTRONISCHE DHH-ENHANCER IST IN VITRO ABHAENGIG VON SOX10 62
3.2.2.2 DAS INTRON I DES DHH- GENS ENTHAELT POTENTIELLE BINDESTELLEN FUER
SOX10 64
3.2.2.3 MUTATION POTENTIELLER SOX10-BINDESTELLEN RESULTIERT IM VERLUST
DER
SOX10-VERMITTELTEN AKTIVIERUNG 66
3.2.2.4 SOX10 ZEIGT DIREKTE BINDUNG AN DEN DHH-ENHANCER 69
3.2.3 IN VIVO UNTERSUCHUNGEN ZUM EINFLUSS VON SOX10 AUF DIE AKTIVITAET
DES DHHENHANCERS 70
3.3 ANALYSE DER SOX10-ABHAENGIGEN REKRUTIERUNG DES CHROMALIN-REMODELING-
ENZYMS BRG1 AN SCHWANN-ZELL-SPEZIFISCHE ENHANCER 73
3.3.1 BRG1 BINDET SOX10-ABHAENGIG AN GENREGULATORISCHE ELEMENTE DES
KROX20 UND OCF6-GENS IN S16-ZELLEN 75
3.3.2 BRG1 BINDET SOX10-ABHAENGIG AN GENREGULATORISCHE ELEMENTE DES
KROX20 UND OCT6- GENS IM PERIPHEREN NERV DER MAUS 78
4 DISKUSSION 80
4.1 REGULATION DER SOX10-EXPRESSION IN OLVZ DURCH DEN U2-ENHANCER. 80
4.2 AKTIVIERENDE WIRKUNG VON OLIG2 AM U2-ENHANCER. 82
4.3 SYNERGISMUS VON OLIG2 UND E47 AM U2-ENHANCER 83
4.4 DIFFERENTIELLE BINDUNG UND AKTIVIERUNG DES U2-ENHANCERS DURCH OLIGL
UND
OLIG2 84
4.5 INTERAKTION VON OLIG2 UND NKX6.2 ZUR ZEITLICHEN REGULATION DER
L/2-AKTIVITAET 85
4.6 WEITERE ANALYSE DER REGULATION DES U2-ENHANCERS 86
4.7 IDENTIFIZIERUNG EINES DHH-ENHANCERS IN EINER KONSERVIERTEN REGION
DES
INTRONS I DES DHH- GENS 88
4.8 IDENTIFIZIERUNG KONSERVIERTER, FUNKTIONELLER SOX10-BINDESTELLEN 89
4.9 WEITERE ANALYSEN DER REGULATION DES DHH-ENHANCERS E4 90
4.10 SOX10-ABHAENGIGE REKRUTIERUNG DES BAF-KOMPLEXES AN SCHWANN-ZELL
SPEZIFISCHE ENHANCER 93
4.11 WEITERE ANALYSE DER INTERAKTION DES BAF-KOMPLEXES MIT SOX10 95
5 MATERIAL 9 7
5.1 BAKTERIENSTAEMME 9 7
5.2 ZELLLINIEN 9 7
5.3 MAUSSTAEMME 9 7
II
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
5.4 HUEHNERSTAEMME 98
5.5 CHEMIKALIEN UND ALLGEMEINE REAGENZIEN 98
5.6 PUFFER UND LOESUNGEN 98
5.7 BAKTERIENMEDIEN 100
5.8 ENZYME 100
5.9 OLIGONUKLEOTIDE 100
5.9.1 GENOTYPISIERUNGS-OLIGONUKLEOTIDE 101
5.9.2 OLIGONUKLEOTIDE FUER KLONIERUNGEN 101
5.9.3 GELRETARDIERUNGS-OLIGONUKLEOTIDE 102
5.9.4 CHLP-OLIGONUKLEOTIDE 104
5.9.5 MUTAGENESE-OLIGONUKLEOTIDE 105
5.9.6 RT-PCR-OLIGONUKLEOTIDE 106
5.10 ANTIKOERPER 106
5.10.1 PRIMAERANTIKOERPER 106
5.10.2 SEKUNDAERANTIKOERPER 107
6 METHODEN 109
6.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 109
6.1.1 STANDARD-METHODEN 109
6.1.2 ISOLIERUNG GENOMISCHER DNA ZUR GENOTYPISIERUNG 109
6.1.3 POLYMERASE-KETTEN-REAKTION (PCR) 109
6.1.3.1 GENOTYPISIERUNGS-PCR 109
6.1.3.2 PCR ZUR SUBKLONIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN 110
6.1.3.3 ZIELGERICHTETE MUTAGENESE 111
6.1.3.4 REVERSE TRANSKRIPTION UND RT PCR 112
6.1.3.5 QUANTITATIVE REA/-F/ME-PCR (QTPCR) 112
6.1.4 GELRETARDIERUNGSEXPERIMENTE 113
6.1.5 IMMUNPRAEZIPITATION 115
6.1.5.1 PROTEIN-KOIMMUNPRAEZIPITATION 115
6.1.5.2 CHROMATIN-IMMUNPRAEZIPITATION 115
6.1.6 SDS-GELELEKTROPHORESE 118
6.1.7 WESTERN BLOT 119
6.2 ZELLKULTURMETHODEN 119
6.2.1 KULTIVIERUNG EUKARYONTISCHER ZELLLINIEN 119
6.2.2 TRANSFEKTION VON HEK293-ZELLEN 119
6.2.3 PRAEPARATION VON GESAMTZELLEXTRAKTEN 120
6.2.4 TRANSFEKTION VON 33B- UND S16-ZELLEN 120
6.2.5 LUZIFERASE-AKTIVITAETSTEST 121
III
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
6.2.6 AUTOFLUORESZENZ-REPORTERGENEXPERIMENTE 121
6.3 GENERIERUNG TRANSGENER MAEUSE 121
6.4 IN OVO ELEKTROPORATION VON HUEHNCHENEMBRYONEN 122
6.5 HISTOLOGISCHE METHODEN 122
6.5.1 PRAEPARATION VON EMBRYONEN UND ORGANENTNAHME 122
6.5.2 IMMUNHISTOCHEMIE 123
6.5.3 X-GAL-FAERBUNGEN 124
6.6 BILDBEARBEITUNG UND STATISTISCHE ANALYSE 124
6.6.1 BILDBEARBEITUNG UND AUSWERTUNG VON MIKROSKOPISCHEN AUFNAHMEN 124
6.6.2 STATISTISCHE ANALYSE VON LUZIFERASE-AKTIVITAETEN UND QUANTITATIVEN
PCRDATEN 125
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 126
LITERATURVERZEICHNIS 131
PUBLIKATIONEN UND PRAESENTATIONEN 151
IV
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| spelling | Küspert, Melanie Verfasser (DE-588)1026928338 aut Untersuchungen zu Expressionsregulation und molekularem Wirkmechanismus des Transkriptionsfaktors Sox10 in Gliazellen der Maus von Melanie Küspert 2012 VII, 151 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Erlangen-Nürnberg, Univ., Diss., 2012 Genregulation (DE-588)4122166-7 gnd rswk-swf Schwann-Zelle (DE-588)4231189-5 gnd rswk-swf Oligodendrocyt (DE-588)4309981-6 gnd rswk-swf Glia (DE-588)4136720-0 gnd rswk-swf Maus (DE-588)4169148-9 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Maus (DE-588)4169148-9 s Glia (DE-588)4136720-0 s Schwann-Zelle (DE-588)4231189-5 s Oligodendrocyt (DE-588)4309981-6 s Genregulation (DE-588)4122166-7 s DE-604 Erscheint auch als Online-Ausgabe urn:nbn:de:bvb:29-opus-35438 https://open.fau.de/handle/openfau/2389 Verlag kostenfrei Volltext https://nbn-resolving.org/urn:nbn:de:bvb:29-opus-35438 Resolving-System http://d-nb.info/1026526981/34 Langzeitarchivierung Nationalbibliothek DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=025383117&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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