Zur Infektion mit RSV und hMPV im Mausmodell - molekularbiologische und morphologische Befunde:
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3
I N H A L T S V E R Z E I C H N I S
1 EINLEITUNG 8
1.1 ATEMWEGSINFEKTIONEN 8
1.2 PARAMYXOVIREN 9
1.2.1 HSV 12
1.2.2 H.YIL Y 17
1.2.3 RSV- U N D HMPV-KOINFEKTIONEN 18
1.2.4 TIERMODELLE FUER RSV- U N D HMPV-INFEKTIONEN 19
1.2.5 DIE MURINE LUNGE 19
1.2.6 VIRUS-INDUZIERTE PATHOLOGIE DER MURINEN LUNGE 20
1.3 ZIEL DER ARBEIT 22
2 MATERIAL UND M E T H O D E N 2 3
2.1 MATERIAL 23
2.1.1 GERAETE 23
2.1.2 REAGENZIEN 24
2.1.3 REAGENZIENSYSTEME 24
2.1.4 PRIMER 25
2.1.5 ANTIKOERPER (AK) 25
2.1.6 SOFTWARE 25
2.1.7 VIRUSSTAEMME 26
2.1.8 VERSUCHSTIERE 26
2.1.8.1 HALTUNG 26
2.2 METHODEN 26
2.2.1 INFEKTION DER VERSUCHSTIERE 26
2.2.2 VIRUSLASTBESTIMMUNG 27
2.2.2.1 RNA ISOLIERUNG 27
2.2.2.2 POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) 28
2.2.2.3 REVERSE TRANSKRIPTION (RT) 29
2.2.2.4 REALTIME QUANTITATIVE POLYMERASEKETTENREAKTION (RTQP C R ) 30
2.2.2.5 NEGATIVKONTROLLEN 31
2.2.3 BESTIMMUNG DES VIRUS-SUBTYPS 32
2.2.3.1 AMPLIFIKATION DER RSV-RNA 32
2.2.3.2 NESTECL P C R 32
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IMAGE 2
4
2.2.3.3 DNA-REINIGUNG 34
2.2.3.4 DNA-SEQUENZIERUNG 34
2.2.3.5 ALIGNMENT 35
2.2.4 AUFARBEITUNG DER GEWEBEPROBEN 36
2.2.4.1 FIXIERUNG UND EINBETTUNG DES GEWEBES 36
2.2.4.2 HAEMATOXYLIN- UND EOSINFAERBUNG (HE-FAERBUNG) . . . . 36
2.2.4.3 ELASTICA-VAN-GIESSONFAERBUNG (EVG-FAERBUNG) 36
2.2.4.4 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBEMETHODEN 36
2.2.5 KONVENTIONELLE U N D IMMUNHISTOCHEMISCHE AUSWERTUNG DER
LUNGENGEWEBSPROBEN 38
3 ERGEBNISSE 4 0
3.1 VIRUSLAST 40
3.1.1 NEGATIVKONTROLLEN 40
3.1.2 HMPV-SPEZIFISCHE RTQ-PCR-ANALYSE 40
3.1.3 R,SV-SPEZIFISCHE RTQ-PCR-ANALYSE 42
3.2 BESTIMMUNG DES VIRUS-SUBTYPS 43
3.3 HISTOPATHOLOGIE DES LUNGENGEWEBES 44
3.3.1 BREITE DER ALVEOLARSEPTEN 44
3.3.2 EMPHYSEMATOESER GEWEBEUMBAU 45
3.3.3 DYSTELEKTATISCHE GEWEBEVERAENDERUNGEN 47
3.3.4 VERAENDERUNGEN DER BRONCHIEN UND BRONCHIOLEN 48
3.4 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNGEN 49
3.4.1 ANTIKOERPER GEGEN LCA 49
3.4.2 ANTIKOERPER GEGEN CD8 50
3.4.3 ANTIKOERPER GEGEN CD4 51
3.4.4 ANTIKOERPER GEGEN CD68 52
3.4.5 ANTIKOERPER GEGEN FIBRINOGEN 54
3.4.6 ANTIKOERPER GEGEN H M P V 54
3.4.7 ANTIKOERPER GEGEN RSV 55
4 DISKUSSION 5 8
4.1 VIROLOGISCHE BEFUNDE 58
4.1.1 VIRUS-SUBTYP 58
4.1.2 VIRUSLAST -58
4.2 PATHOMORPHOLOGISCHE BEFUNDE 59
4.3 IMMUNHISTOCHEMISCHE BEFUNDE 63
4.3.1 MONOZYTENREAKTION 63
IMAGE 3
5
4.3.2 LYMPHOZYTENREAKTION 65
4.3.3 FIBRINOGEN 66
4.3.4 H M P V 67
4.3.5 RSV 68
4.4 DAS MAUSMODELL 71
4.4.1 VORZUEGE DES MAUSMODELLS 71
4.4.2 ALTER DER VERSUCHSTIERE 73
4.4.3 ROLLE DES GESCHLECHTS 74
4.4.4 HETEROGENE AUSPRAEGUNG DER INFEKTION 75
4.4.5 INFEKTIONSMODUS 76
5 Z U S A M M E N F A S S U N G 7 8
6 LITERATURVERZEICHNIS 8 0
7 D A N K S A G U N G 9 6
8 L E B E N S L A U F 9 7
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