Charakterisierung von Sphingosin-1-Phosphat in der Rattenleber:
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| Format: | Thesis Book |
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2011
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INHALTVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
2. GRUNDLAGEN 2
2.1 DIE LEBER 2
2.1.1 PHYSIOLOGIE 2
2.1.2 HISTOLOGIE 2
2.1.3 PATHOPHYSIOLOGIE 5
2.2 APOPTOSE 6
2.2.1 PHYSIOLOGIE 6
2.2.2 DER CD95-SIGNALWEG 7
2.3 ELEMENTE DER SIGNALTRANSDUKTION 8
2.3.1 PARP 8
2.3.2 PROTEINKINASEN 8
2.4 SPHINGOSIN-1 -PHOSPHAT (S1P) 12
2.4.1 S1P UND CERAMID: SYNTHESE UND EIGENSCHAFT 12
2.4.2 SPHINGOSINKINASEN 14
2.4.3 WIRKUNG 15
3. MATERIAL UND METHODEN 19
3.1 ZELLPRAEPERATION 19
3.1.1 ISOLATION UND KULTIVIERUNG VON LEBERPARENCHYMZELLEN 19
3.1.2 ISOLATION UND KULTIVIERUNG HEPATISCHER STERNZELLEN 19
3.1.3 ISOLATION UND KULTIVIERUNG VON KUPFFER-ZELLEN UND
HEPATISCHEN SINUSENDOTHELZELLEN 20
3.1.4 MEDIEN UND LOESUNGEN 20
3.2 LEBERPERFUSION 21
3.3 PROTEINANALYTISCHE METHODEN 21
3.3.1 AUFARBEITUNG DER ZELLEN 21
I
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IMAGE 2
INHALTVERZEICHNIS
3.3.2 PROTEINMENGENBESTIMMUNG 21
3.3.3 POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 22
3.3.4 PROTEIN-TRANSFER 22
3.3.5 WESTERN BLOT 22
3.3.6 ANTIKOERPER UND LOESUNGEN ZUR PROTEINANALYTIK 23
3.4 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 25
3.4.1 NACHWEIS DER MRNA-EXPRESSION MITTELS PCR 25
3.4.2 PRIMER UND LOESUNGEN FUER DIE MOLEKULARBIOLOGISCHE ANALYSE 26
3.5 IMMUNZYTO- UND -HISTOCHEMISCHE METHODEN 27
3.5.1 FAERBEPROTOKOLLE FUER ZELLKULTUR UND KRYOSCHNITTE 27
3.5.2 ANTIKOERPER UND LOESUNGEN FUER DIE IMMUNZYTO- UND HISTOCHEMIE 28
3.6 PROLIFERATIONSMESSUNG MITTELS BRDU-ASSAY 29
3.7 APOPTOSEQUANTIFIZIERUNG MITTELS TUNEL-MARKIERUNG 30
3.8 STATISTISCHE METHODE 30
4. ERGEBNISSE 31
4.1 S1 P-REZEPTOREN IN DER LEBER 31
4.1.1 EXPRESSION VON S1 P-REZEPTOREN IN PARENCHYM- UND
NICHTPARENCHYMZELLEN DER RATTENLEBER AUF MRNA- UND
PROTEIN-EBENE 31
4.1.2 IMMUNZYTO- UND -HISTOCHEMISCHE FAERBUNGEN VON S1 P-REZEPTOREN
IN PARENCHYM- UND NICHTPARENCHYMZELLEN DER RATTENLEBER 33
4.1.3 TABELLE: HEPATISCHE EXPRESSION VON S1 P-REZEPTOREN 42
4.2 S1 P-VERMITTELTE SIGNALTRANSDUKTION 43
4.2.1 SIP-INDUZIERTE SIGNALTRANSDUKTION IN PRIMAEREN
RATTENHEPATOZYTEN 43
4.2.2 S LP-INDUZIERTE SIGNALTRANSDUKTION IN DER PERFUNDIERTEN
RATTENLEBER 44
II
IMAGE 3
INHALTVERZEICHNIS
4.3 PROLIFERATIVER EFFEKT VON S1P AUF PRIMAERE RATTENHEPATOZYTEN 46
4.3.1 ANALYSE DES MOEGLICHEN PROLIFERATIVEN EFFEKTES VON S1P AUF
PRIMAERE RATTENHEPATOZYTEN MITTELS BRDU-ASSAY 46
4.3.2 ANALYSE DES MOEGLICHEN PROLIFERATIVEN EFFEKTES VON S1P AUF
PRIMAERE RATTENHEPATOZYTEN MITTELS ZELLZAEHLUNG 47
4.4 ANALYSE DES MOEGLICHEN ANTI-APOPTOTISCHEN EFFEKTES VON S1P AUF
PRIMAERE
RATTENHEPATOZYTEN IM MODEL DER CD95-LIGANDEN VERMITTELTEN
APOPTOSE 48
4.4.1 APOPTOSEQUANTIFIZIERUNG MITTELS TUNEL-MARKIERUNG 48
4.4.2 ANALYSE DER PARP-SPALTUNG (WESTERN BLOT) 48
5. DISKUSSION 50
5.1 S1 P-REZEPTOREN IN DER LEBER 50
5.2 DIE SIP-VERMITTELTE SIGNALTRANSDUKTION 54
5.3 PROLIFERATIVER EFFEKT VON S1P AUF PRIMAERE RATTENHEPATOZYTEN 57
5.4 ANTI-APOPTOTISCHER EFFEKT VON S1P AUF PRIMAERE RATTEN
HEPATOZYTEN IM MODEL DER CD95-LIGAND VERMITTELTEN APOPTOSE 62
6. ANHANG 71
6.1 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNGEN IN DER ZIRRHOTISCHEN LEBER 71
7. ZUSAMMENFASSUNG 79
8. LITERATURVERZEICHNIS 80
9. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 92
LEBENSLAUF 95
DANKSAGUNG 97
III
|
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