Analysen zur subzellulären Verteilung von Zucker- und Zuckeralkoholtransportern in Arabidopsis thaliana:
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 DAS SEKRETORISCHE SYSTEM 1
1.1.1 SEKRETION 1
1.1.2 ENDOZYTOSE 4
1.2 SORTIERUNGSSIGNALE 4
1.2.1 TYROSINBASIERTE MOTIVE 5
1.2.2 DILEUCINMOTIVE 6
1.2.3 SAURE CLUSTER 7
1.2.4 UBIQUITIN ALS SORTIERUNGSSIGNAL 7
1.3 ADAPTORPROTEINE 8
1.3.1 AP-KOMPLEXE 8
1.4 PFLANZLICHE VAKUOLEN 14
1.5 ZIELSETZUNG 15
2 ERGEBNISSE 17
2.1 ANALYSE DER SUBZELLULAEREN SORTIERUNGSSIGNALE VON ATLNTL UND ATLNT4
17
2.1.1 HERSTELLUNG VON CHIMAERENPROTEINEN AUS ATLNTL UND ATLNT4 17
2.1.2 SUBZELLULAERE LOKALISATION VON ATLNTL-CHIMAEREN 18
2.1.3 SUBZELLULAERE LOKALISATION VON ATLNT4-CHIMAEREN 2 1
2.1.4 ANALYSE DER SORTIERUNGSSIGNALE VON ATLNTL UND ATLNT4 MITTELS
DELETIONS- UND
AS-MUTANTEN 22
2.2 VERSUCHE ZUR RELOKALISATION VON TRANSPORTPROTEINEN AUS ER,
GOLGI-APPARAT ODER
PLASMAMEMBRAN IN ANDERE ZIELMEMBRANEN 28
2.2.1 RELOKALISATIONSSTUDIEN MIT ZU ATLNT-VERWANDTEN TRANSPORTERN 28
2.2.2 HERSTELLUNG DER EXPRESSIONSVEKTOREN PSWUO UND P S W L L L 3 1
2.2.3 RELOKALISATIONSSTUDIEN MIT NICHT ZU ATLNT-VERWANDTEN TRANSPORTERN
32
2.2.4 FUNKTIONELLE ANALYSE VON ATSUC2A14/CL IM HETEROLOGEN SYSTEM 37
2.2.5 HERSTELLUNG VON ATSUC2A14/CL- UND ATSWEETLA33/CL-KONSTRUKTEN ZUR
STABILEN TRANSFORMATION VON A. THALIANA 39
2.3 SUCHE NACH PROTEINKOMPONENTEN DER VAKUOLAEREN SORTIERUNGSMASCHINERIE
39
2.3.1 FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG EINER AP-3SS T-DNA-INSERTIONSLINIE 4
0
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IMAGE 2
2.3.2 SUBZELLULAERE LOKALISATION VAKUOLAERER MEMBRANPROTEINE IM AP-3
Y?-HINTERGRUND
42
2.3.3 VERIFIZIERUNG DER GOLGI-LOKALISATION VON ATSUC4 IN AP-3
/S-PROTOPLASTEN 44
2.3.4 ANALYSE DER UNTERSCHIEDLICHEN TRANSPORTWEGE VON ATLNTL UND ATSUC4
ZUM
TONOPLAST 47
2.3.5 ALTERNATIVE TRANSPORTWEGE FUER ATSUC4 4 8
2.4 SUCHE NACH POTENTIELLEN INTERAKTIONSPARTNERN VON ATLNTL MITTELS
Y2H-SCREEN....50
2.4.1 GAL4-BD-CL-VERMITTELTE HINTERGRUNDEXPRESSION DER REPORTERGENE 50
2.4.2 Y2H-SCREENING 5 1
2.5 FUNKTIONELLE ANALYSE DER IX/X-LOOPS VON ATLNT2 UND HHMIT 52
2.5.1 UNTERSUCHUNGEN ZUM WACHSTUMSVERHALTEN VERSCHIEDENER
AHNT2CYSTEINMUTANTEN IN ANWESENHEIT VON NI** UND CO** 52
2.5.2 HERSTELLUNG EINER ATINT4-LOOPLESS-MUTANTE 54
2.5.3 HERSTELLUNG EINER CHIMAERE AUS UMHXTL UND DEM IX/X-LOOP VON ATLNT2
55
2.5.4 FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG VON HHMIT 56
2.5.5 HERSTELLUNG EINER HHMIT-LOOPLESS-MUTANTE 5 8
2.5.6 EINFLUSS VON NI** UND CO** AUF DIE INOSITAUFNAHME BEI ATLNT2- UND
HHMIT EXPRIMIERENDEN HEFEN 59
2.5.7 EINFLUSS VON VALPROINSAEURE, CARBAMAZEPIN UND LITHIUM AUF DIE
INOSITAUFNAHME
BEI AINT2- UND HH/W/7 -EXPRIMIERENDEN HEFEN 60
3 DISKUSSION 63
3.1 DIE SUBZELLULAERE LOKALISATION EINER ATLNTL/ATLNT4-CHIMAERE WIRD VOM
C-TERMINUS BESTIMMT 63
3.2 EIN C-TERMINALES DILEUCINMOTIV VERMITTELT DIE SORTIERUNG VON ATLNTL
IN DIE
VAKUOLENMEMBRAN 64
3.3 ANDERE TRANSPORTER LASSEN SICH MITHILFE DES ATLNTL-C-TERMINUS IN DIE
VAKUOLENMEMBRAN UMLENKEN 65
3.4 PROTEINE OHNE FUNKTIONELLES SORTIERUNGSSIGNAL WERDEN AN DIE
PLASMAMEMBRAN
SORTIERT 69
3.5 INT1 UND SUC4 NUTZEN UNTERSCHIEDLICHE WEGE ZUR VAKUOLE 7 1
3.6 AN DER SUBZELLULAERE VERTEILUNG VON TONOPLASTIDAEREN PROTEINEN SIND
WEITERE
ADAPTORPROTEINE BETEILIGT 74
3.7 DER IX/X-LOOP VON ATLNT2 VERMITTELT NICKELSENSITIVITAET 77
3.8 HHMIT IST EIN FUNKTIONELLER H*/LNOSITSYMPORTER 78
IMAGE 3
3.9 DIE IX/X-LOOPS PLASMAMEMBRANSTAENDIGER INOSITTRANSPORTER STELLEN
PSI-DOMAENEN
DAR, DEREN FALTUNG DURCH NI +T INHIBIERT WIRD 80
3.10 PUTATIVE FUNKTIONEN VON PSI-DOMAENEN IN PLASMAMEMBRANSTAENDIGEN
HVLNOSITTRANSPORTERN 82
4 MATERIAL UND METHODEN 85
4.1 MATERIAL 85
4.1.1 OLIGONUKLEOTIDE 85
4.1.2 VEKTOREN 87
4.1.3 KLONIERUNGSSTRATEGIEN 90
4.1.4 ORGANISMEN 99
4.1.5 ANZUCHTMEDIEN 101
4.1.6 LOESUNGEN UND PUFFER 103
4.1.7 CHEMIKALIEN UND ENZYME 105
4.1.8 VERBRAUCHSMATERIALIEN 106
4.1.9 GERAETE UND SOFTWARE 107
4.2 METHODEN 108
4.2.1 ANZUCHT DER VERWENDETEN ORGANISMEN 108
4.2.2 ALLGEMEINE MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 108
4.2.3 METHODEN ZUR ARBEIT MIT BAKTERIEN 109
4.2.4 METHODEN ZUR ARBEIT MIT HEFEN 110
4.2.5 METHODEN ZUR ARBEIT MIT PFLANZEN 112
5 ZUSAMMENFASSUNG 114
6 LITERATURVERZEICHNIS 116
7 ANHANG 133
SEQUENZEN 133
VEKTORKARTEN 137
CHIMAEREN 143
LEBENSLAUF 146
PUBLIKATIONSLISTE 147
DANKSAGUNG 148
ERKLAERUNG 149
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