Einfluss von Prostaglandin D2 auf die osteogene Differenzierung von humanen mesenchymalen Stammzellen:
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1
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 3
2. WISSENSCHAFTLICHER HINTERGRUND 5
2.1. TISSUE ENGINEERING 5
2.2. ADULTE STAMMZELLEN 7
2.2.1. MESENCHYMALE STAMMZELLEN 8
2.2.2. OSTEOGENE DIFFERENZIERUNG 10
2.3. PROSTAGLANDINE 12
2.3.1. PROSTAGLANDIN D2 15
2.4. DAS LN-VITRO-MODE 16
3. ZIELSETZUNG DER STUDIE 18
4. MATERIAL UND METHODEN 19
4.1. ZELLKULTUR 19
4.1.1. ZELLEN 19
4.1.2. KULTIVIERUNGSBEDINGUNGEN UND KULTURMEDIEN 19
4.1.3. ZELLZAHLBESTIMMUNG MIT DER NEUBAUER ZAEHLKAMMER 20
4.1.4. BESTIMMUNG DER POPULATIONSVERDOPPLUNG 21
4.2. NACHWEIS DES DP1 REZEPTORS.., 23
4.2.1. IMMUNFLUORESZENZ NACHWEIS 23
4.2.2. NACHWEIS MITTELS POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) 25
4.3. RNA ISOLIERUNG 27
4.4. CDNA-SYNTHESE 28
4.5. NACHWEISMETHODEN FUER DEN EINFLUSS AUF DIE OSTEOGENE DIFFERENZIERUNG
30
4.5.1. VON-KOSSA-FAERBUNG 30
4.5.2. BESTIMMUNG DER KALZIUM ABLAGERUNG 31
4.5.3. QUANTITATIVE REAL-TIME-PCR 32
5. STATISTISCHE AUSWERTUNG 35
6. ERGEBNISSE 36
6.1. EINFLUSS VON PGD 2 AUF DIE POPULATIONSVERDOPPLUNG 36
6.2. IMMUNFLUORESZENZ NACHWEIS DES DP1-REZEPTORS 37
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2
6.3. NACHWEIS DES DP1-REZEPTORS MITTELS PCR 38
6.4. VISUALISIERUNG DES EINFLUSSES VON PGD 2 DURCH VON-KOSSA-FAERBUNG 39
6.5. EINFLUSS VON PGD 2 AUF DIE KALZIUMABLAGERUNG 40
6.6. DER EINFLUSS VON PGD2 AUF MARKER DER OSTEOGENEN DIFFERENZIERUNG 41
6.6.1. KOLLAGEN 1 41
6.6.2. OSTEOCALCIN 42
6.6.3. BONE SIALOPROTEIN 43
6.6.4. ALKALISCHE PHOSPHATASE 44
7. DISKUSSION 46
7.1. RELEVANZ DER FRAGESTELLUNG 46
7.2. STUDIENDESIGN UND METHODIK 47
7.2.1. DAS LN-VITRO-MODE 47
7.2.2. ZELLEN 48
7.2.3. DP1 REZEPTORNACHWEIS 48
7.2.4. EINFLUSS VON PASSAGIERUNG UND KRYOKONSERVIERUNG 49
7.2.5. OSTEOGENE DIFFERENZIERUNG 49
7.2.6. RELEVANZ DER OSTEOGENEN MARKER 51
7.2.7. METHODEN ZUM NACHWEIS DER OSTEOGEN DIFFERENZIERUNG 52
7.3. BEWERTUNG DER ERGEBNISSE 53
7.3.1. NACHWEIS DES DP1 REZEPTORS 53
7.3.2. POPULATIONSVERDOPPLUNG 53
7.3.3. KALZIUMABLAGERUNG UND VON-KOSSA-FAERBUNG 54
7.3.4. OSTEOGENE MARKER 55
7.4. SCHLUSSFOLGERUNG 56
8. ZUSAMMENFASSUNG 58
9. LITERATURVERZEICHNIS 59
10. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 73
11. ABBILDUNGSVERZEICHNIS 75
12. DANKSAGUNG 76
13. LEBENSLAUF 77
14. PUBLIKATIONEN 79
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