Untersuchungen zur Toxoplasma-gondii-Infektion beim Huhn: Entwicklung eines Testsystems für Monitoring und Surveillance
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| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Gießen
DVG Service
2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 13
1.1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 15
2 LITERATURUEBERSICHT 19
2.1 ALLGEMEINES 19
2.2 LEBENSZYKLUS UND WIRTSSPEKTRUM VON T. GONDII 24
2.2.1 ENTWICKLUNG IM ENDWIRT 26
2.2.2 ENTWICKLUNG IM ZWISCHENWIRT 28
2.3 T. GONDII ALS ZOONOSEERREGER 31
2.4 BEDEUTUNG VON 7 .-GOND//-LNFEKTIONEN BEIM GEFLUEGEL 44
2.4.1 INFEKTIONSQUELLEN 44
2.4.2 VORKOMMEN VON 7 .-GOND/7-LNFEKTIONEN BEIM GEFLUEGEL 44
2.4.3 VERLAUF VON T.-GONDII-LNFEKTIONEN BEIM GEFLUEGEL 53
2.4.3.1 KLINISCHE TOXOPLASMOSEN NACH EXPERIMENTELLER INFEKTION 53
2.4.3.2 KLINISCHE TOXOPLASMOSEN NACH NATUERLICHER INFEKTION 59
2.5 TYPISIERUNG VON T. GONDII 61
2.6 SEROLOGISCHE DIAGNOSTIK VON 7 .-GOND/ /-LNFEKTIONEN BEIM GEFLUEGEL 72
2.6.1 SABIN-FELDMAN-TEST 72
2.6.2 KOMPLEMENTBINDUNGSREAKTION 74
2.6.3 INDIREKTER FLUORESZENZANTIKOERPERTEST 75
2.6.4 AGGLUTINATIONSTESTS 76
2.6.4.1 DIREKTER AGGLUTINATIONSTEST 76
2.6.4.2 MODIFIZIERTER AGGLUTINATIONSTEST 77
2.6.4.3 LATEXAGGLUTINATIONSTEST 78
2.6.5 INDIREKTER HAEMAGGLUTINATIONSTEST 79
2.6.6 ENZYME-IINKED IMMUNOSORBENT ASSAY 79
2.6.7 EINSATZ REKOMBINANTER ANTIGENE 82
3 MATERIAL UND METHODEN 87
3.1 MATERIAL 87
3.1.1 CHEMIKALIEN, ANDERE REAGENZIEN UND LOESUNGEN 87
3.1.2 MEDIKAMENTE 87
3.1.3 VERBRAUCHSMATERIALIEN UND GERAETE 87
3.1.4 ZELLLINIEN 87
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IMAGE 2
3.1.5 REKOMBINANTE ANTIGENE 88
3.1.6 DIAGNOSTISCHE REAGENZIEN UND TESTSYSTEME 91
3.1.7 PARASITENSTAEMME 92
3.1.8 VERSUCHSTIERE 93
3.1.8.1 MAEUSE 93
3.1.8.2 KATZEN 93
3.1.8.3 HUEHNER 93
3.1.9 HETEROLOGE PROBEN 94
3.2 METHODEN 96
3.2.1 INFEKTION DER MAEUSE UND GEWINNUNG DER ZYSTEN VON T. GONDII 96
3.2.1.1 IFAT 96
3.2.2 INFEKTION DER KATZEN UND GEWINNUNG DER OOZYSTEN 97
3.2.3 INFEKTION DER HUEHNER 98
3.2.3.1 GEWINNUNG UND LAGERUNG VON SERUMPROBEN 101
3.2.3.2 HERSTELLUNG T.-GOND/ / -SPEZIFISCHER REFERENRPROBEN VON HUEHNERN
101
3.2.4 MAT 103
3.2.4.1 OPTIMIERUNG DER ANTIGENKONZENTRATION FUER DAS SCREENING VON
HUEHNERSEREN 103
3.2.4.2 OPTIMIERUNG DER SERUMVERDUENNUNG FUER DAS SCREENING VON
HUEHNERSEREN 104
3.2.4.3 DURCHFUEHRUNG DES SCREENINGTESTS 105
3.2.5 LINEBLOTS MIT REKOMBINANTEN ANTIGENEN 107
3.2.5.1 TESTPRINZIP UND TESTDURCHFUEHRUNG 107
3.2.5.2 OPTIMIERUNG DES LINEBLOTS 108
3.2.5.3 QUANTIFIZIERUNG MIT IMAGE J 110
3.2.6 ZELLKULTURMETHODEN ZUR GEWINNUNG VON T.-GOND/V-TACHYZOITEN 110
3.2.6.1 KULTIVIERUNG DER FIBROBLASTEN 110
3.2.6.2 IN-VITRO-KULTIVIERUNG VON T. GONDII UND TACHYZOITENGEWINNUNG 111
3.2.7 ELISA MIT TACHYZOITENLYSAT 112
3.2.7.1 ANTIGENGEWINNUNG 112
3.2.7.2 PROTEINBESTIMMUNG 112
3.2.7.3 DURCHFUEHRUNG DES ELISA 113
3.2.8 ELISA MIT NATIVEM TGSAGL 116
3.2.8.1 DURCHFUEHRUNG DES ELISA 116
3.2.9 STATISTISCHE AUSWERTUNG 118
3.2.10 VERGLEICH DER SEROLOGISCHEN TESTS 118
IMAGE 3
4 ERGEBNISSE 120
4.1 VERLAUF DER EXPERIMENTELLEN 7.-GOND// -LNFEKTIONEN BEI HUEHNERN 120
4.2 MAT 120
4.2.1 SENSITIVITAET DES MAT 120
4.2.2 SPEZIFITAET DES MAT 125
4.3 LINEBLOTS MIT REKOMBINANTEN ANTIGENEN 125
4.4 ENTWICKLUNG UND OPTIMIERUNG DES ELISA MIT TACHYZOITENLYSAT 137
4.4.1 OPTIMALE KONZENTRATION DES TACHYZOITENLYSATANTIGENS 137
4.4.2 SUBSTRAT 139
4.4.3 KONJUGAT 139
4.4.4 SERUMVERDUENNUNG FUER SCREENINGASSAYS 143
4.5 ERGEBNISSE DER SEREN VON EXPERIMENTELL MIT T. GONDII INFIZIERTEN
HUEHNERN IM ELISA MIT TACHYZOITENLYSAT 144
4.5.1 SPEZIFITAET UND GRENZWERTE DES TACHYZOITENLYSAT-ELISA 144
4.5.2 ANTIKOERPERDYNAMIK BEI EINER SERUMVERDUENNUNG VON 1:50 148
4.5.3 ANTIKOERPERDYNAMIK BEI EINER SERUMVERDUENNUNG VON 1:500 153
4.6 ENTWICKLUNG UND OPTIMIERUNG DES ELISA MIT NATIVEM TGSAGL 158
4.6.1 KONJUGATKONZENTRATION UND SUBSTRAT 158
4.6.2 SERUMVERDUENNUNG 158
4.7 ERGEBNISSE DER SEREN VON EXPERIMENTELL MIT T. GONDII INFIZIERTEN
HUEHNERN IM ELISA MIT NATIVEM TGSAGL 161
4.7.1 SPEZIFITAET UND GRENZWERT DES TGSAG1-ELISA 161
4.7.2 ANTIKOERPERDYNAMIK IM TGSAG1-ELISA 165
4.8 VERGLEICH DER VERSCHIEDENEN TESTSYSTEME 170
5 DISKUSSION 178
5.1 GEWINNUNG VON REFERENZMATERIAL DURCH EXPERIMENTELLE INFEKTION VON
HUEHNERN MIT T.-GONDII OOZYSTEN 178
5.2 MAT 180
5.2.1 OPTIMIERUNG DES MAT MIT BESTIMMUNG DER SPEZIFITAET UND SENSITIVITAET
FUER DEN NACHWEIS VON ANTIKOERPERN BEI HUEHNERN 180
5.3 VALIDIERUNG REKOMBINANTER 7 .-GONDW-ANTIGENE IM LINEBLOT FUER DIE
UNTERSUCHUNG VON HUEHNERSEREN 182
5.4 ELISA 183
5.4.1 OPTIMIERUNG DES TACHYZOITENLYSAT-ELISA UND BESTIMMUNG DER
SPEZIFITAET FUER DIE UNTERSUCHUNG VON HUEHNERSEREN 184
IMAGE 4
5.4.2 OPTIMIERUNG DES TGSAG1-ELISA UND BESTIMMUNG DER SPEZIFITAET FUER DIE
UNTERSUCHUNG
VON HUEHNERSEREN 185
5.5 VERGLEICH DER VERSCHIEDENEN TESTSYSTEME 186
5.6 AUSBLICK 189
6 ZUSAMMENFASSUNG 191
7 SUMMARY 193
8 LITERATURVERZEICHNIS 195
9 ANHANG ...1 248
9.1 CHEMIKALIEN UND ANDERE REAGENZIEN 248
9.2 LOESUNGEN 249
9.3 MEDIKAMENTE 253
9.4 VERBRAUCHSMATERIALIEN UND GERAETE 253
9.5 ZUSAETZLICHE TABELLEN 257
10 TABELLENVERZEICHNIS 264
11 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 267
|
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