Evaluierung verschiedener Verdünner zur Flüssigkonservierung von caninem Sperma:
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Gießen
VVB Laufersweiler Verlag
2012
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG UND FRAGESTELLUNG 1
2 LITERATUR 3
2.1 BEDEUTUNG DER KUENSTLICHEN BESAMUNG FUER DIE HUNDEZUCHT 3
2.1.1 V O R - U N D NACHTEILE 3
2.1.2 TECHNIK DER SAMENUEBERTRAGUNG 6
2.1.3 BESAMUNGSDOSIS 9
2.1.4 ERFOLGSRATEN 9
2.2 GEWINNUNG DES EJAKULATES 12
2.2.1 INDIKATIONEN FUER DIE SPERMAGEWINNUNG 12
2.2.2 VORAUSSETZUNGEN UND METHODEN 12
2.3 SPERMAUNTERSUCHUNG 15
2.3.1 KONVENTIONELLE SPERMAUNTERSUCHUNG 16
2.3.1.1 MAKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG 16
2.3.1.2 CHEMISCH-PHYSIKALISCHE UNTERSUCHUNG 18
2.3.1.3 MIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG 18
2.3.2 HYPOOSMOTISCHER SCHWELLTEST (HOS-TEST) 2 3
2.3.3 COMPUTER-ASSISTED SPERM ANALYSIS (CASA) 25
2.3.3.1 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG 2 8
2.3.3.2 MOTILITAETSANALYSE 29
2.3.3.3 VIABILITAETSANALYSE 32
2.4 SPERMAKONSERVIERUNG 33
2.4.1 FLUESSIGKONSERVIERUNG 35
2.4.1.1 HERSTELLUNG VON FLUESSIGKONSERVIERTEM SPERMA 36
2.4.1.2 LAGERUNG BZW. VERSAND 37
2.4.1.3 UEBERLEBENSDAUER 39
2.4.2 KRYOKONSERVIERUNG 4 2
2.4.3 VERGLEICH VON FLUESSIG- UND KRYOKONSERVIERUNG 4 4
2.5 VERDUENNER ZUR FLUESSIGKONSERVIERUNG VON CANINEM SPERMA 4 6
2.5.1 ANFORDERUNGEN AN EINEN VERDUENNER 4 6
2.5.2 INHALTSSTOFFE 4 8
2.5.2.1 ZUCKERKOMPONENTEN 4 8
2.5.2.2 PUFFER 50
2.5.2.3 MEMBRANPROTEKTIVA 51
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
2.5.2.3.1 EIGELB 5 3
2.5.2.3.2 MILCH 5 6
2.5.2.4 KRYOPROTEKTIVA 5 6
2.5.2.5 ANTIBIOTIKA 58
2.5.2.6 SONSTIGE INHALTSSTOFFE 58
2.5.2.6.1 ANTIOXIDANTIEN 5 8
2.5.2.6.2 NATRIUMDODECYL(LAURYL)SULFAT
(SODIUMDODECYL(LAURYL)SULFATE, SDS) 60
2.5.3 EINZELNE VERDUENNER 62
2.5.3.1 MILCHVERDUENNER 6 3
2.5.3.2 TRIS-GEPUFFERTE EIGELB-VERDUENNER 6 4
2.5.3.3 SONSTIGE VERDUENNER 65
2.5.3.4 KOMMERZIELLE VERDUENNER 65
2.5.3.5 VERGLEICHENDE UNTERSUCHUNGEN 65
3 MATERIAL UND METHODEN 75
3.1 PROBANDEN 7 5
3.2 SPERMAGEWINNUNG 76
3.3 SPERMABEURTEILUNG 77
3.3.1 KLASSISCHE SPERMATOLOGIE 78
3.3.1.1 MAKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG 7 8
3.3.1.2 CHEMISCH-PHYSIKALISCHE UNTERSUCHUNG 7 8
3.3.1.3 MIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG 78
3.3.2 SPERMAC-FAERBUNG 82
3.3.3 HOS-TEST 82
3.3.4 COMPUTER-ASSISTED SPERM ANALYSIS (CASA) 83
3.3.4.1 AUFBAU UND FUNKTIONSWEISE DES SPERMVISION*-SYSTEMS 8 3
3.3.4.2 PROBENVORBEREITUNG UND BEFUELLUNG DER MESSKAMMER 85
3.3.4.3 MOTILITAETSANALYSE 86
3.3.4.4 VIABILITAETSANALYSE 8 8
3.4 WEITERVERARBEITUNG DES SPERMAS
(AUFBEREITUNG MIT DEN VERSCHIEDENEN VERDUENNERN) 90
3.4.1 HERSTELLUNG DER VERDUENNER 90
3.4.2 ALIQUOTIERUNG UND VERDUENNUNG DES SPERMAS 91
3.5 UNTERSUCHUNG DES VERDUENNTEN SPERMAS 93
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
3.6 UNTERSUCHUNG DER HALTEPROBEN 94
3.7 STATISTISCHE METHODEN 9 6
4 ERGEBNISSE 9 9
4.1 UNTERSUCHUNGSERGEBNISSE DER NATIVEJAKULATE 99
4.1.1 MAKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG 99
4.1.2 CHEMISCH-PHYSIKALISCHE UNTERSUCHUNG 99
4.1.3 MIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG 99
4.1.4 SPERMAC-FAERBUNG 100
4.1.5 HOS-TEST 100
4.1.6 COMPUTER-ASSISTED SPERM ANALYSIS (CASA) 100
4.1.6.1 MOTILITAETSANALYSE 100
4.1.6.2 VIABILITAETSANALYSE 101
4.2 ERGEBNISSE DER WEITERVERARBEITETEN EJAKULATE UNMITTELBAR NACH DEM
VERDUENNEN AN TAG 0 101
4.2.1 DICHTEN DER VERDUENNTEN EJAKULATE 102
4.2.1.1 NEUBAUER-ZAEHLKAMMER 102
4.2.1.2 CASA 102
4.2.2 EINFLUSS DER VERDUENNER AUF DIE MOTILITAET AN TAG 0 102
4.2.2.1 SUBJEKTIV GESCHAETZTE VORWAERTSBEWEGLICHKEIT 103
4.2.2.2 MITTELS CASA GEMESSENE GESAMTMOTILITAET 104
4.2.2.3 MITTELS CASA GEMESSENE VORWAERTSBEWEGLICHKEIT 105
4.2.2.4 WEITERE MITTELS CASA BESTIMMTE MOTILITAETSPARAMETER 106
4.2.3 EINFLUSS DER VERDUENNER AUF DIE VIABILITAET AN TAG 0 113
4.2.3.1 ANTEIL LEBENDER SAMENZELLEN IM EOSINAUSSTRICH 113
4.2.3.2 MITTELS CASA GEMESSENE VIABILITAET 114
4.2.4 EINFLUSS DER VERDUENNER AUF DEN ANTEIL AN MORPHOLOGISCH
VERAENDERTEN SAMENZELLEN AN TAG 0 116
4.2.5 EINFLUSS DER VERDUENNER AUF DEN ANTEIL AN AKROSOMALEN
VERAENDERUNGEN BZW. AUF DEN ANTEIL AN ABGELOESTEN AKROSOMEN AN
TAG 0 118
4.2.6 EINFLUSS DER VERDUENNER AUF DEN ANTEIL AN MEMBRANDEFEKTEN
SAMENZELLEN IM HOS-TEST AN TAG 0 120
4.3 ERGEBNISSE DER HALTEPROBEN IM ZEITVERLAUF 122
4.3.1 EINFLUSS DER VERDUENNER AUF DIE MOTILITAET IM ZEITVERLAUF 122
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
4.3.1.1 SUBJEKTIV GESCHAETZTE VORWAERTSBEWEGLICHKEIT 123
4.3.1.2 MITTELS CASA GEMESSENE GESAMTMOTILITAET 125
4.3.1.3 MITTELS CASA GEMESSENE VORWAERTSBEWEGLICHKEIT 127
4.3.1.4 WEITERE MITTELS CASA BESTIMMTE MOTILITAETSPARAMETER 129
4.3.2 EINFLUSS DER VERDUENNER AUF DIE VIABILITAET IM ZEITVERLAUF 136
4.3.2.1 ANTEIL LEBENDER SAMENZELLEN IM EOSINAUSSTRICH 136
4.3.2.2 MITTELS CASA GEMESSENE VIABILITAET 138
4.3.3 EINFLUSS DER VERDUENNER AUF DEN ANTEIL AN MORPHOLOGISCH
VERAENDERTEN SAMENZELLEN IM ZEITVERLAUF 140
4.3.4 EINFLUSS DER VERDUENNER AUF DEN ANTEIL AN AKROSOMALEN
VERAENDERUNGEN IM ZEITVERLAUF 144
4.4 KORRELATIONEN DER UNTERSUCHTEN PARAMETER 147
4.4.1 ZUSAMMENHANG ZWISCHEN DEN MITTELS NEUBAUER-ZAEHLKAMMER
BESTIMMTEN UND DEN DURCH CASA GEMESSENEN DICHTEN 147
4.4.1.1 KORRELATIONEN NACH VERDUENNERN GETRENNT 147
4.4.1.2 KORRELATION OHNE TRENNUNG NACH VERDUENNERN 148
4.4.2 ZUSAMMENHANG ZWISCHEN DER SUBJEKTIV GESCHAETZTEN UND DER
MITTELS CASA GEMESSENEN VORWAERTSBEWEGLICHKEIT 149
4.4.2.1 KORRELATIONEN NACH VERDUENNERN GETRENNT 149
4.4.2.2 KORRELATIONEN OHNE TRENNUNG NACH VERDUENNERN 150
4.4.3 ZUSAMMENHANG ZWISCHEN DEM IM EOSINAUSSTRICH BESTIMMTEN
ANTEIL AN LEBENDEN SPERMIEN UND DER DURCH CASA ERMITTELTEN
VIABILITAET 150
4.4.3.1 KORRELATIONEN NACH VERDUENNERN GETRENNT 151
4.4.3.2 KORRELATIONEN OHNE TRENNUNG NACH VERDUENNERN 151
4.4.4 ZUSAMMENHAENGE ZWISCHEN VERSCHIEDENEN SPERMAPARAMETERN..152
4.4.4.1 KORRELATIONEN NACH VERDUENNERN GETRENNT 152
4.4.4.2 KORRELATIONEN OHNE TRENNUNG NACH VERDUENNERN 154
DISKUSSION 156
5.1 DISKUSSION DER FRAGESTELLUNG 156
5.2 DISKUSSION DER METHODIK 158
5.2.1 AUSWAHL DER PROBANDEN 158
5.2.2 SPERMAGEWINNUNG 160
5.2.3 VERWENDETE SPERMATOLOGISCHE UNTERSUCHUNGSMETHODEN 161
IMAGE 5
INHALTSVERZEICHNIS
5.2.3.1 KLASSISCHE SPERMATOLOGIE 161
5.2.3.2 COMPUTER-ASSISTED SPERM ANALYSIS (CASA) 163
5.2.3.2.1 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG 168
5.2.3.2.2 MOTILITAETSANALYSE 168
5.2.3.2.3 VIABILITAETSANALYSE 169
5.2.4 VERDUENNER 170
5.2.4.1 INHALTSSTOFFE 171
5.2.4.2 UNTERSCHIEDE BEZUEGLICH DER AUFARBEITUNG 174
5.3 DISKUSSION DER ERGEBNISSE 176
5.3.1 NATIVEJAKULATE 176
5.3.1.1 KLASSISCHE SPERMATOLOGIE 176
5.3.1.2 CASA 176
5.3.2 ERGEBNISSE DER WEITERVERARBEITETEN EJAKULATE UNMITTELBAR NACH
DEM VERDUENNEN AN TAG 0 179
5.3.2.1 DICHTEN 179
5.3.2.2 MOTILITAET 180
5.3.2.3 VIABILITAET 186
5.3.2.4 PATHOMORPHOLOGIE 187
5.3.2.5 AKROSOMALE VERAENDERUNGEN 189
5.3.2.6 FUNKTIONELLE INTEGRITAET DER PLASMAMEMBRAN 192
5.3.3 ERGEBNISSE DER HALTEPROBEN IM ZEITVERLAUF 193
5.3.3.1 MOTILITAET 194
5.3.3.2 VIABILITAET 202
5.3.3.3 PATHOMORPHOLOGIE 204
5.3.3.4 AKROSOMALE VERAENDERUNGEN 208
5.3.4 KORRELATIONEN DER UNTERSUCHTEN PARAMETER 211
5.3.4.1 DICHTEN 211
5.3.4.2 MOTILITAET 213
5.3.4.3 VIABILITAET 214
5.3.4.4 SPERMAPARAMETER 215
5.4 SCHLUSSBETRACHTUNG UND FAZIT FUER DIE PRAXIS 217
5.5 OFFENE FRAGESTELLUNGEN 219
6 ZUSAMMENFASSUNG 221
7 SUMMARY 224
IMAGE 6
INHALTSVERZEICHNIS
8 LITERATURVERZEICHNIS 227
9 ANHANG 250
9.1 GERAETE 250
9.2 ANALYSEEINSTELLUNGEN DES SPERMVISION*-SYSTEMS 251
9.3 VERBRAUCHSMATERIALIEN 252
9.4 CHEMIKALIEN 253
9.5 REZEPTE DER VERWENDETEN MEDIEN 254
9.5.1 REZEPTE DER VERDUENNER 254
9.5.1.1 TRIS-FRUKTOSE-EIGELB-VERDUENNER 254
9.5.1.2 UPPSALA-VERDUENNER (UPPSALA EQUEX-2 SYSTEM) 254
9.5.2 ZUSAMMENSETZUNG DES VERDUENNERS CANIPRO* CHILI 10 255
9.5.3 REZEPTE DIVERSER GEBRAUCHSLOESUNGEN 255
9.5.3.1 EOSIN-FAERBELOESUNG 255
9.5.3.2 HYPOOSMOTISCHE LOESUNG 255
9.5.3.3 FAERBELOESUNG FUER DIE VIABILITAETSANALYSE 256
9.6 HERSTELLERANGABEN 256
9.7 VERDUENNER ZUR FLUESSIGKONSERVIERUNG VON CANINEM SPERMA 261
9.7.1 MILCHVERDUENNER 261
9.7.2 TRIS-GEPUFFERTE EIGELB-VERDUENNER 261
9.7.3 SONSTIGE VERDUENNER 264
9.7.4 KOMMERZIELLE VERDUENNER 265
9.8 ERGEBNISTABELLEN 267
9.9 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 284
9.10 TABELLENVERZEICHNIS 286
10 DANKSAGUNG 291
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