Identifizierung und Charakterisierung von PEXEL-negativen exportierten Proteinen in Malariaparasiten:
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| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Berlin
Mensch und Buch Verl.
2012
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| Item Description: | Zusfassung in dt. und engl. Sprache |
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG 1
SUMMARY 2
INHALTSVERZEICHNIS . 3
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
AB KUERZUNGS VERZEICHNIS 10
1 E I N L E I T U N G 13
1.1 MALARIA 13
1.1.1 EPIDEMIOLOGIE 13
1.1.2 ERREGER U N D UEBERTRAEGER 14
1.1.3 KLINIK U N D DIAGNOSE 14
1.1.4 THERAPIE U N D PROPHYLAXE 16
1.1.5 IMPFSTOFFENTWICKLUNG 16
1.1.6 VEKTORKONTROLLE I S
1.2 LEBENSZYKLUS V O N PLASMODIUM SPP 19
1.2.1 LEBERSTADIUM 20
1.2.2 BLUTSTADIUM 21
1.3 SEKRETORISCHER PROTEINTRANSPORT 2 3
1.3.1 T R A N S P O R T ZUR NAHRUNGSVAKUOLE 24
1.3.2 T R A N S P O R T Z U M APIKOPIAST 25
1.3.3 T R A N S P O R T ZU D E N APIKALEN ORGANELLEN 25
1.4 PROTEINEXPORT 26
1.4.1 P E X E L / V T S - M O T I V 27
1.4.2 P T E X - K O M P L E X 28
1.4.3 P F E M P L - E X P O R T 29
1.4.4 P N E P S 30
1.4.5 P N E P S IN ANDEREN PLASMODIENSPEZIES 31
1.5 ZIELSETZUNG 32
2 M A T E R I A L 3 3
2.1 GERAETE 33
2.2 V ERBRAUCHSMATERIAL 34
2.3 CHEMIKALIEN 35
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS 4
2.4 KOMMERZIELLE KITS, LAENGENSTANDARDS U N D ENZYME 37
2.5 MEDIEN, PUFFER U N D LOESUNGEN 38
2.5.1 ARBEITEN MIT P.FALAEPARUM 38
2.5.1.1 KULTIVIERUNG 38
2.5.1.2 SYNCHRONISATION U N D TRANSFEKTION 38
2.5.1.3 SAPONINLYSE 39
2.5.1.4 PERCOLLGRADIENT 39
2.5.2 MOLEKULARBIOLOGISCHE ARBEITEN 39
2.5.2.1 K O M P E T E N T E E. COLI. 39
2.5.2.2 KULTUR U N D LAGERUNG V O N E . COLI. 40
2.5.2.3 D N A - A U F T R E N N U N G 40
2.5.2.4 REKOMBINANTE PROTEINEXPRESSION 40
2.5.3 BIOCHEMISCHE ARBEITEN 40
2.5.3.1 S D S - P A G E 4 0
2.5.3.2 WESTERN BLOT 41
2.6 STAEMME 41
2.7 ANTIKOERPER 41
2.7.1 PRIMAERANTIKOERPER 41
2.7.2 SEKUNDAERANTIKOERPER 4 2
2.8 VEKTOREN 4 2
2.9 OLIGONUKLEOTIDE 4 3
2.10 PROGRAMME 47
2.11 DATENBANKEN U N D INTERNETDIENSTE 47
3 M E T H O D E N 4 9
3.1 STERILISATION 49
3.2 ARBEITEN MIT V.FAKIPARUM 4 9
3.2.1 KULTIVIERUNG 49
3.2.2 EINFRIEREN U N D AUFTAUEN 49
3.2.3 SYNCHRONISATION 50
3.2.4 TRANSFEKTION 50
3.2.5 SAPONINLYSE 50
3.2.6 ISOLATION GENOMISCHER D N A 51
3.2.7 PERCOLLGRADIENT 51
3.2.8 TETANOLYSINLYSE 51
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS D
3.3 ARBEITEN MIT P. BERGHEI 52
3.4 MIKROSKOPIE 52
3.4.1 FLUORENSZENZMIKROSKOPIE 52
3.4.2 LEBENDFAERBUNG M I T BODIPY-TR-C 5-CERAMIDE 52
3.4.3 IMMUNFLUORESZENZANALYSEN (IFAS) V O N P.JALCIPARUM- BLUTSTADIEN 52
3.4.4 IMMUNFLUORESZENZANALYSEN (IFAS) V O N P. ^ ^ - L E B E R S T A
D I E N 53
3.4.5 KONFOKALE 4D-MIKROSKOPIE 53
3.4.6 ELEKTRONENMIKROSKOPIE 54
3.5 MOLEKULARBIOLOGISCHE ARBEITEN 55
3.5.1 HERSTELLUNG KOMPETENTER E . COLI 55
3.5.2 POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) 55
3.5.3 AUFTRENNUNG V O N D N A (AGAROSE-GELELEKTROPHORESE) 55
3.5.4 RESTRIKTIONSVERDAU 56
3.5.5 DEPHOSPHORYLIERUNG V O N D N A 56
3.5.6 LIGATION 56
3.5.7 TRANSFORMATION KOMPETENTER E . COLI 57
3.5.8 KOLONIE-PCR 57
3.5.9 KULTUR U N D LAGERUNG V O N E. COLI 57
3.5.10 ISOLATION V O N PLASMID-DNA (MINI- U N D MIDIPREP) 57
3.5.11 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG V O N D N A 58
3.5.12 PRAEZIPITATION V O N D N A 58
3.5.13 HERSTELLUNG REKOMBINANTER GST-FUSIONSPROTEINE 58
3.6 BIOCHEMISCHE M E T H O D E N 59
3.6.1 AUFTRENNUNG V O N PROTEINEN MITTELS S D S - P A G E 59
3.6.2 COOMASSIE-FAERBUNG 59
3.6.3 TRANSFER U N D IMMUNDETEKTION V O N PROTEINEN MITTELS WESTERN BLOT
59
4 E R G E B N I S S E 60
4.1 IDENTIFIZIERUNG NEUER P N E P S IN P. FALCIPARUM 60
4.1.1 BIOINFORMATISCHE SUCHE BASIEREND A U F EINEM PNEP-AEHNLICHEN
TRANSKRIPTIONSPROFIL 60
4.1.1.1 AUSWAHL DER P N E P - K A N D I D A T E N 61
4.1.1.2 LOKALISATION DER P N E P - K A N D I D A T E N 62
4.1.2 H O M O L O G E ZU PF13_0194 SIND WEITERE P N E P S 75
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
6
4.1.3 EVALUIERUNG EINER DURCH MASCHINELLE LERNANSAETZE GENERIERTEN P N E
P -
KANDIDATENLISTE 83
4.1.3.1 AUSWAHL DER P N E P - K A N D I D A T E N 8 3
4.1.3.2 LOKALISATION DER P N E P - K A N D I D A T E N 84
4.1.4 BIOINFORMATISCHE SUCHE BASIEREND A U F EINEM SUBTELOMEREN GENLOCUS
88
4.1.4.1 AUSWAHL DER P N E P - K A N D I D A T E N 88
4.1.4.2 LOKALISATION DER P N E P - K A N D I D A T E N 89
4.2 CHARAKTERISIERUNG DES NEUEN P N E P PF13_0192 94
4.2.1 DAS ENDOGENE PF13_0192 94
4.2.1.1 LOKALISATION DES ENDOGENEN PF13_0192 95
4.2.1.2 EXPRESSIONSPROFIL DES ENDOGENEN PF13_0192 97
4.2.2 E X P O R T V O N PF13_0192-GFP IN 4 DIMENSIONEN 99
4.2.3 APF13_0192 101
4.3 IDENTIFIZIERUNG BEKANNTER P.FALCIPARUM- PNEPS IN ANDEREN
PLASMODIENSPEZIES 104
4.3.1 EXPRESSION PUTATIVER P N E P S ANDERER PLASMODIENSPEZIES IN
P.FALAEPANTM 107
4.3.2 EXPRESSION V O N P B M A H R P L A IN P. BERGHEI. 111
4.4 ETABUEERUNG EINES EXPRESSIONSSVSTEMS ZUR VISUALISIERUNG V O N
RINGSTADIENPROTEINEN..114
4.4.1 ETABLIERUNG EINES EXPRESSIONSSYSTEMS FUER RINGSTADIENPROTEINE 114
4.4.2 VISUALISIERUNG V O N R E X 2 - G F P IN RINGSTADIEN 120
5 D I S K U S S I O N 123
5.1 N E U E P N E P S IN P. FALCIPARUM 123
5.2 BEKANNTE P N E P S IN ANDEREN PLASMODIENSPEZIES 133
5.3 VISUALISIERUNG V O N RINGSTADIENPROTEINEN 137
LITERATURVERZEICHNIS 139
PUBLIKATIONEN 157
A N H A N G 1 158
A N H A N G II 160
A N H A N G I I I 162
DANKSAGUNG * 163
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