Differenzierungspotential mesenchymaler Stammzellen in Meniskusfibrochondrozyten in 2D- und 3D-Kulturen:
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2012
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|---|---|
| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
...................................................................................................
1
1.1
EINORDNUNG
DER
STUDIE
...........................................................................
1
1.2
DER
MENISKUS
.........................................................................................
2
1.2.1
MAKROSKOPISCHE
BETRACHTUNG
DES
MENISKUS
................................
2
1.2.2
MENISKUSZELLEN
.............................................................................
4
1.2.3
BIOMECHANIK
DES
KNIEGELENKS
......................................................
5
1.2.4
MENISKUSVERLETZUNGEN
..................................................................
6
1.3
MESENCHYMALE
STAMMZELLEN
.................................................................
7
1.3.1.
BESCHREIBUNG
DER
MESENCHYMALEN
STAMMZELLEN
.........................
7
1.3.2.
THERAPEUTISCHE
ANWENDUNGSGEBIETE
VON
MSC
..........................
10
1.4
TISSUE
ENGINEERING
..............................................................................
11
1.5
ZIEL
DER
STUDIE
......................................................................................
12
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.............................................................................
13
2.1
MATERIAL
...............................................................................................
13
2.1.1
LABORTECHNISCHE
APPARATE
UND
INSTRUMENTE
...............................
13
2.1.2
CHEMIKALIEN
.................................................................................
16
2.1.3
MATRICART
....................................................................................
19
2.1.4
HUMANES
OPERATIONSMATERIAL
......................................................
19
2.2
METHODEN
.............................................................................................
21
2.2.1
AUFBAU
DER
DOKTORARBEIT
...............................................................
21
2.2.2
ZELLKULTUR
......................................................................................
22
2.2.2.1
ALLGEMEINE
ARBEITSBEDINGUNGEN
............................................
22
2.2.2.2
ANLAGE
EINER
ZELLKULTUR
MESENCHYMALER
STAMMZELLEN
..........
22
2.2.2.3
HERSTELLUNG
EINES
STAMMZELLMEDIUMS
...................................
23
2.2.2.4
MEDIUMWECHSEL
......................................................................
24
INHALTSVERZEICHNIS
2.2.2.5
DIFFERENZIERUNG
IN
ADIPOZYTEN
................................................
24
2.2.2.6
EINFRIERMEDIUM
.......................................................................
25
2.2.3
PASSAGIEREN
VON
ZELLEN
..............................................................
25
2.2.4
ZELLZAHLBESTIMMUNG
....................................................................
26
2.2.5
BESIEDELUNG
VON
ALGINAT-BEADS
..................................................
26
2.2.5.1
ALGINAT
....................................................................................
26
2.2.5.2
HERSTELLUNG
DER
ALGINAT-BEADS
...............................................
27
2.2.5.3
HERSTELLUNG
VON
INKOMPLETTEM
CHONDROGENEM
INDUKTIONSMEDIUM
.................................................................
27
2.2.5.4
HERSTELLUNG
VON
KOMPLETTEM
CHONDROGENEM
INDUKTIONSMEDIUM
.................................................................
27
2.2.6
INOKULATION
DER
ZELLEN
IN
UND
EXTRAKTION
DER
ZELLEN
AUS
MATRICART
...................................................................
28
2.2.7
RT-PCR
.......................................................................................
29
2.2.7.1
ALLGEMEINES
UND
PRINZIP
.......................................................
29
2.2.7.2
DURCHFUEHRUNG
DER
PCR
..........................................................
31
2.2.7.3
AUSWERTUNG
DES
LIGHT
CYCLERS
..............................................
32
2.2.7.4
RNA-EXTRAKTION
......................................................................
32
2.2.7.5
RNA-QUANTIFIZIERUNG
..............................................................
33
2.2.7.6
CDNA-SYNTHESE
.....................................................................
34
2.2.8
IMPLANTATION
DER
MATRICART-VLIESE
IN
DIE
SCID-MAEUSE
...............
35
2.2.9
EXPLANTATION
DER
MATRICART-VLIESE
AUS
DEN
SCID-MAEUSEN
.........
35
2.2.10
PARAFFINSCHNITTE
...........................................................................
36
2.2.10.1
EINBETTEN
IN
PARAFFIN
..............................................................
36
2.2.10.2
HERSTELLUNG
VON
PARAFFINSCHNITTEN
..........................................
37
2.2.10.3
ENTPARAFFINIEREN
UND
ENTWAESSERN
DER
SCHNITTE
.......................
37
2.2.11
HISTOLOGISCHE
STANDARDFAERBUNGEN
...............................................
38
2.2.11.1
HE-FAERBUNG
...........................................................................
38
2.2.11.2
ALZIANBLAU-FAERBUNG
...............................................................
39
2.2.11
.3
TOLUIDINBLAU-FAERBUNG
............................................
39
V
INHALTSVERZEICHNIS
2.2.11.4
...............................................................
40
2.2.11.5
ALZARINROT-FAERBUNG
..................................................................
40
2.2.11.6
OELROT-FAERBUNG
.........................................................................
41
2.2.12
IMMUNHISTOCHEMIE
......................................................................
41
2.2.12.1
FLUORESZENZ-IN-SITU-HYBRIDISIERUNG
(FISH)
.............................
41
2.2.12.2
ALU-SEQUENZEN
.......................................................................
42
2.2.12.3
DAPI
.......................................................................................
44
2.2.12.4
IMMUNHISTOCHEMISCHE
FAERBUNGEN
.........................................
44
2.2.12.5 IMMUNHISTOCHEMIE
AM
PARAFFINSCHNITT
...................................
45
2.2.12.6
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
........................................................
46
3
ERGEBNISSE
.................................................................................................
47
3.1
ALLGEMEINE
ERLAEUTERUNGEN
...................................................................
47
3.2
ZELLKULTUR
..............................................................................................
47
3.2.1
ANLAGE
VON
ZELLKULTUREN
..............................................................
47
3.2.2
ZELLZAHL
.......................................................................................
48
3.2.3
RNA-QUANTIFIZIERUNG
...................................................................
49
3.2.4
VERAENDERUNGEN
BEI
DER
HERSTELLUNG
DER
ALGINAT-BEADS
..............
50
3.3
ZELLCHARAKTERISIERUNG
...........................................................................
51
3.3.1
RT-PCR
......................................................................................
51
3.3.1.1
RT-PCR
BEI
ADIPOGENER
DIFFERENZIERUNG
...............................
51
3.3.1.2
RT-PCR
BEI
CHONDROGENER
DIFFERENZIERUNG
...........................
53
3.3.1.3
GENINDUKTIONEN
VON
CHONDROGEN
DIFFERENZIERTEN
MSC
IN
MATRICART
..................................................................
54
3.3.1.4
GENEXPRESSIONEN
VON
UNDIFFERENZIERTEN
MSC
IN
MATRICART...
55
3.3.1.5
VERGLEICH
DER
GENINDUKTIONEN
VON
CHONDROGEN
DIFFERENZIERTEN
UND
UNDIFFERENZIERTEN
MSC
IN
MATRICART
.......
58
VI
INHALTSVERZEICHNIS
3.3.1.6
VERGLEICH
DER
GENINDUKTIONEN
VON
CHONDROGEN
DIFFERENZIERTEN
MSC
IN
MATRICART
MIT
CHONDROGEN
DIFFERENZIERTEN
MSC
IN
ALGINAT
...............................................
60
3.3.1.7
GENEXPRESSIONEN
VON
UNDIFFERENZIERTEN
MSC
IN
ZELLKULTURFLASCHEN
NACH
DREIWOECHIGER
INKUBATIONSZEIT
IN
DER
3.
PASSAGE
...................................................................
61
3.4
HISTOLOGISCHE
FAERBUNGEN
....................................................................
64
3.4.1
ALLGEMEINES
...............................................................................
64
3.4.2
HE-FAERBUNG
...............................................................................
65
3.4.3
SAFRANIN-O-FAERBUNG
...................................................................
66
3.4.4
ALIZARINROT-FAERBUNG
....................................................................
67
3.4.5
ALZIANBLAU-FAERBUNG
....................................................................
68
3.4.6
TOLUIDINBLAU-FAERBUNG
.................................................................
69
3.4.7
OELROT-FAERBUNG
.............................................................................
70
3.5
IMMUNHISTOCHEMIE
..............................................................................
71
4
DISKUSSION..................................................................................................
76
4.1
ZELLKULTUR
.............................................................................................
76
4.1.1
ZELLZAHL
......................................................................................
76
4.1.2
RNA-QUANTIFIZIERUNG
..................................................................
77
4.2
ZELLCHARAKTERISIERUNG
...........................................................................
77
4.2.1
RT-PCR
.....................................................................................
77
4.2.2
HISTOLOGIE
...................................................................................
80
4.2.2.1
HE-FAERBUNG
...........................................................................
80
4.2.2.2
ALIZARINROT-FAERBUNG
................................................................
80
4.2.2.3
SAFRANIN-O-,
ALZIANBLAU-,
TOLUIDINBLAU-FAERBUNG
.....................
81
4.2.2.4
OELROT-FAERBUNG
........................................................................
82
4.2.3
IMMUNHISTOCHEMIE
.....................................................................
82
4.3
...
............................................................................................................
83
VII
INHALTSVERZEICHNIS
5
ZUSAMMENFASSUNG
...................................................................................
86
6
LITERATURVERZEICHNIS
..................................................................................
87
7
DANKSAGUNG
..............................................................................................
91
8
CURRICULUM
VITAE
........................................................................................
92
|
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