Charakterisierung von glomerulären und interstitiellen dendritischen Zellen und deren TNF-vermittelte Aktivierung in der Mausniere mittels kompartimentspezifischer Durchflusszytometrie:
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2012
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1
INHALTSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG : 4
2 EINLEITUNG 8
2.1 DAS CHRONISCHE NIERENVERSAGEN 8
2.1.1 DEFINITION UND EINTEILUNG DER CHRONISCHEN NIERENINSUFFIZIENZ 8
2.1.2 BEDEUTUNG DER CHRONISCHEN NIERENINSUFFIZIENZ 9
2.1.3 URSACHEN EINER CHRONISCHEN NIERENINSUFFIZIENZ 10
2.1.4 PHYSIOLOGISCHE FUNKTION DER NIERE 11
2.1.5 KOMPLIKATIONEN DER EINGESCHRAENKTEN NIERENFUNKTION 13
2.2 PATHOGENESE UND BEDEUTUNG ENTZUENDLICHER GLOMERULAERER ERKRANKUNGEN 14
2.2.1 EINTEILUNG DER GLOMERULONEPHRITIDEN 14
2.2.2 THERAPIEOPTIONEN 16
2.3 DAS IMMUNSYSTEM 17
2.3.1 DAS ANGEBORENE IMMUNSYSTEM 17
2.3.2 DAS ERWORBENE IMMUNSYSTEM 18
2.3.3 DAS MONONUKLEAERE PHAGOZYTENSYSTEM 19
2.3.4 ANTIGENPRAESENTIERENDE ZELLEN 20
2.3.5 AUFGABEN UND FUNKTIONEN VON DENDRITISCHEN ZELLEN 20
2.3.6 DAS TNF-SYSTEM 22
2.4 DENDRITISCHE ZELLEN IN DER NIERE 25
2.5 FRAGESTELLUNG DER ARBEIT 27
3 MATERIAL UND METHODEN 28
3.1 MATERIALIEN 28
3.1.1 TIERE UND TIERHALTUNG 28
3.1.2 GERAETE : 28
3.1.3 MATERIALEN 29
3.1.4 CHEMIKALIEN, LOESUNGEN UND PUFFER 30
3.1.5 ANTIKOERPER 34
3.1.6 PRIMER 35
3.1.7 SOFTWARE 37
3.2 TIERVERSUCHE 38
3.2.1 VERSUCHSTIERE 38
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2
3.2.2 TIERHALTUNG 38
3.2.3 GENOTYPISIERUNG 39
3.2.4 MODELL DER TNF-STIMULATION 42
3.2.5 UNILATERALE URETERLIGATION 42
3.3 KOMPARTIMENTSPEZIFISCHE GEWEBEISOLATION 43
3.3.1 PRINZIP DER METHODE 43
3.3.2 VORBEREITUNG DER DYNABEADS M-450 EPOXY 44
3.3.3 PERFUSION DER MAUS 45
3.3.4 ISOLATION DES GLOMERULAEREN UND TUBULOINTERSTITIELLEN GEWEBES 46
3.4 HERSTELLUNG EINER KOMPARTIMENTSPEZIFISCHEN EINZELZELLSUSPENSION 47
3.5 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 48
3.5.1 ALLGEMEINE FUNKTIONSWEISE 48
3.5.2 KOMPARTIMENTSPEZIFISCHE DURCHFLUSSZYTOMETRIE 49
3.6 RNA-ANALYSEN 5 1
3.6.1 RNA-ISOLATION 5 1
3.6.2 QUALITAETSBESTIMMUNG DER RNA 52
3.6.3 SYNTHESE DER CDNA 52
3.6.4 QUANTITATIVE RT-PCR (TAQMAN) 53
3.7 IMMUNHISTOCHEMISCHE METHODEN 55
3.7.1 ALLGEMEINES FUNKTIONSPRINZIP 55
3.7.2 FAERBUNG FUER T-ZELLEN, MONONUKLEAERE PHAGOZYTEN UND NEUTROPHILE
GRANULOZYTEN 56
3.7.3 FAERBUNGEN FUER DIE TNF-REZEPTOREN 1 UND 2 59
3.8 STATISTISCHE ANALYSEN 6 1
4 ERGEBNISSE 62
4.1 KOMPARTIMENTSPEZIFISCHE GEWEBEISOLATION 62
4.2 KOMPARTIMENTSPEZIFISCHE MRNA-EXPRESSION VON TNF-REZEPTOREN,
CHEMOKINEN UND
ADHAESIONSMOLEKUELEN UND DEREN TNF-ABHAENGIGE INDUKTION 64
4.3 QUANTIFIZIERUNG VON GLOMERULAEREN UND TUBULOINTERSTITIELLEN
LEUKOZYTENINFILTRATEN
MITTELS DURCHFLUSSZYTOMETRIE 69
4.3.1 QUANTIFIZIERUNG DER LEUKOZYTENINFILTRATE BEI OBSTRUKTIVER
NEPHROPATHIE 72
4.3.2 KOMPARTIMENTSPEZIFISCHE QUANTIFIZIERUNG DER LEUKOZYTENINFILTRATE
BEI NORMALEN
UND TNF-STIMULIERTEN TIEREN 79
IMAGE 3
3
4.3.3 ABHAENGIGKEIT DERTNF-INDUZIERTEN LEUKOZYTENINFILTRATION VON
TNF-REZEPTOR 1 UND
2 85
4.4 PHAENOTYPISCHE CHARAKTERISIERUNG GLOMERULAERER UND
TUBULOINTERSTITIELLER DENDRITISCHER
ZELLEN MITTELS DURCHFLUSSZYTOMETRIE 89
5 DISKUSSION 96
5.1 DENDRITISCHE ZELLEN IN DER NIERE 96
5.2 KOMPARTIMENTSPEZIFISCHE GEWEBEISOLATION 99
5.3 KOMPARTIMENTSPEZIFISCHE DURCHFLUSSZYTOMETRIE 100
5.4 WIRKUNG VON TNF AUF RENALE LEUKOZYTENINFILTRATE 101
5.5 WIRKUNG VON TNF AUF RENALE LEUKOZYTENINFILTRATE IN ABHAENGIGKEIT VON
DEN TNFREZEPTOREN 1 UND 2 101
5.6 TNF- UND TNF-REZEPTORBLOCKADE BEI NIERENERKRANKUNGEN 102
5.7 CHARAKTERISIERUNG VON RENALEN DENDRITISCHEN ZELLEN 104
5.8 AUSBLICK 105
6 LITERATURVERZEICHNIS 106
7 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 116
7.1 ABBILDUNGEN 116
7.2 TABELLEN 117
8 ABKUERZUNGEN 118
9 DANKSAGUNG 122
10 LEBENSLAUF 123
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