Holdings: Entwicklung mikropartikulärer Implantate zur Therapie von Glioblastomen und Gliosarkomen im Tiermodell mit Fischer-344-Ratten

Entwicklung mikropartikulärer Implantate zur Therapie von Glioblastomen und Gliosarkomen im Tiermodell mit Fischer-344-Ratten:

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Main Author:	Allhenn, Daniela 1979- (Author)
Format:	Thesis Microfilm Book
Language:	German
Published:	2012
Edition:	[Mikrofiche-Ausg.]
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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS VEROEFFENTLICHUNGEN ............................................................................ I DANKSAGUNG ..................................................................................... III 1 EINLEITUNG UND ZIELSETZUNG ....................................................... 1 2 THEORETISCHER HINTERGRUND ........................................................ 8 2.1 GLIOME - GLIOBLASTOME UND GLIOSARKOME ............................................. 8 2.1.1 KLASSIFIZIERUNG UND MIKROSKOPISCHES ERSCHEINUNGSBILD VON GLIOMEN ................................................................................................ 9 2.1.2 MAKROSKOPISCHES ERSCHEINUNGSBILD VON GLIOMEN .......................... 11 2.1.3 URSPRUNG VON GLIOMEN AUF ZELLULAERER EBENE ................................... 12 2.1.4 URSACHEN FUER DIE ENTSTEHUNG VON GLIOMEN ..................................... 14 2.1.5 VERBREITUNG VON GLIOMEN .................................................................. 16 2.1.6 DIAGNOSE VON GLIOMEN ..................................................................... 19 2.2 THERAPIEN BEI GLIOMEN .......................................................................... 20 2.2.1 STANDARDTHERAPIE BEI GLIOMEN ......................................................... 20 2.2.2 SYSTEMISCHE THERAPIEN BEI GLIOMEN .............................................. 22 2.2.3 LOKALE THERAPIEN BEI GLIOMEN ........................................................ 23 2.2.3.1 POLYMERHALTIGE IMPLANTATE ....................................................... 25 2.2.3.1.1 MIKROCARRIER-SYSTEME ............................................................ 26 2.3 MIKROPARTIKEL ........................................................................................... 27 2.3.1 HERSTELLUNGSVERFAHREN FUER MIKROPARTIKEL .......................................... 28 2.3.1.1 EMULSIONSVERFAHREN .................................................................. 29 2.4 VERWENDETE POLYMERE ............................................................................33 2.4.1 POLY-YY-CAPROLACTON (PCL) ................................................................. 33 2.4.2 POLYMILCHSAEURE-GLYKOLSAEURE-COPOLYMER (PLGA) .......................... 35 2.5 VERWENDETE WIRKSTOFFE ...........................................................................38 2.5.1 CELECOXIB ............................................................................................ 38 2.5.2 ETOPOSID .............................................................................................. 39 2.5.3 ELACRIDAR .............................................................................................. 41 3 MATERIALIEN UND METHODEN ....................................................... 43 3.1 VERWENDETE SUBSTANZEN ....................................................................... 43 3.1.1 RESOMER RG 502H .............................................................................. 43 3.1.2 POLY-E-CAPROLACTON (PCL) ................................................................ 43 3.1.3 IBUPROFEN ............................................................................................. 44 3.1.4 CELECOXIB ........................................................................................... 44 3.1.5 ETOPOSID .............................................................................................. 45 3.1.6 ELACRIDAR .............................................................................................. 45 3.1.7 RITONAVIR .............................................................................................. 45 3.1.8 LOPINAVIR ............................................................................................. 46 3.1.9 SUDAN III .............................................................................................. 47 3.1.10 DICHLORMETHAN .................................................................................... 48 3.1.11 ETHYLACETAT .......................................................................................... 48 3.1.12 GLYCOFUROL ........................................................................................... 49 3.1.13 GLYCEROL ..............................................................................................50 3.1.14 METHYLCELLULOSE .................................................................................. 50 3.1.15 MAKROGOLE ........................................................................................... 51 3.1.16 POLYVINYLALKOHOL ................................................................................. 52 3.1.17 POLOXAMER 188 ....................................................................................52 3.2 HERSTELLUNGSVERFAHREN FUER MIKROPARTIKEL ............................................. 53 3.2.1 LOESUNGSMITTELVERDAMPFUNGSVERFAHREN .............................................53 3.2.2 LOESUNGSMITTELEXTRAKTIONSVERFAHREN ..................................................54 3.2.3 ENTWICKLUNG EINES HERSTELLUNGSVERFAHRENS FUER MIKROPARTIKEL OHNE DEN GEBRAUCH TOXISCHER LOESUNGSMITTEL .......................................... 55 3.2.4 GLYCOFUROL EXTRAKTIONSVERFAHREN .......................................................57 3.3 UNTERSUCHUNG DER PHYSIKOCHEMISCHEN EIGENSCHAFTEN VON INNERER UND AEUSSERER PHASE ................................................................................. 57 3.3.1 TROPFENKONTURANALYSE ....................................................................... 57 3.3.2 UNTERSUCHUNG DER VISKOSITAET DER AEUSSEREN PHASE .......................... 58 3.4 MIKROPARTIKEL-ANALYSE .............................................................................59 3.4.1 PARTIKELGROESSENANALYSE (LASERDIFFRAKTOMETRIE) .................................59 3.4.2 RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE (REM) ............................................... 61 3.4.3 KONFOKALE-LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE (CLSM) ........................... 63 3.4.4 DYNAMISCHE DIFFERENZKALORIMETRIE (DDK/ DSC) ............................ 66 3.4.5 HOCHLEISTUNGSFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE (HPLC) ..................... 69 3.4.5.1 BESTIMMUNG DER VERKAPSELUNGSRATEN (INDIREKT/ DIREKT) ........ 71 3.4.5.1.1 IBUPROFEN - METHODE ............................................................... 72 3.4.5.1.2 RITONAVIR & LOPINAVIR - METHODE ........................................... 72 3.4.5.1 .3 SUDAN III - METHODE ............................................................... 72 3.4.5.1.4 CELECOXIB - METHODE ................................................... 73 3.4.5.1.5 ETOPOSID - METHODE ............................................................... 73 3.4.5.1.6 ELACRIDAR - METHODE ................................................................74 3.4.5.2 FREISETZUNG ............... 74 3.4.5.2.1 IBUPROFEN, RITONAVIR, LOPINAVIR, SUDAN III ............................. 75 3.4.5.2.2 CELECOXIB, ETOPOSID, ELACRIDAR ............................................. 75 3.4.6 UV/ ..................................................................................................... 76 3.4.6.1 BESTIMMUNG DES RESTGLYCOFUROL-GEHALTS ............................................. 77 3.5 GLIOMZELLLINIEN .........................................................................................78 3.5.1 HERKUNFT DER ZELLLINIEN ....................................................................... 78 3.5.2 ZELLKULTUR .............................................................................................78 3.5.2.1 9L-ZELLEN ....................................................................................78 3.5.2.2 .................................................................................................... 79 3.5.2.3 AUFTAUEN UND ANLEGEN EINER ZELLKULTUR .................................... 79 3.5.2.4 KULTIVIERUNG DER GLIOSARKOMZELLEN ...........................................80 3.5.2.5 KULTIVIERUNG DER GLIOBLASTOMZELLEN (F98-ZELLEN) .................... 81 3.5.2.6 VITALZELLZAEHLUNG DER GLIOMZELLEN ............................................... 81 3.5.2.7 KRYOKONSERVIERUNG DER GLIOMZELLEN ..........................................83 3.5.2.8 BEHANDLUNG DER GLIOMZELLEN VOR DER IMPLANTATION .................. 84 3.6 IN VIVO VERSUCH ....................................................................................... 84 3.6.1 TIERMODELL ........................................................................................... 84 3.6.2 VERSUCHSDESIGN ................................................................................. 85 3.7 TIERE .......................................................................................................... 87 3.7.1 HERKUNFT DER TIERE .............................................................................. 87 3.7.2 HALTUNG UND FUETTERUNG DER TIERE ......................................................87 3.7.3 NARKOTISIERUNG DER TIERE ................................................................... 88 3.7.4 ABBRUCHKRITERIEN UND ANALGESIE .......................................................89 3.7.5 IMPLANTATION DER GLIOMZELLEN ............................................................ 90 3.7.6 IMPLANTATION DER MIKROPARTIKEL ...........................................................90 3.7.7 EUTHANASIERUNG DER TIERE ................................................................. 91 3.7.8 EXPLANTATION DER TUMOREN ................................................................ 91 3.8 ANALYSE DER TUMOREN ........................................................................... 92 3.8.1 VERMESSUNG UND WAEGUNG DER TUMOREN .........................................92 3.8.2 FIXIERUNG DER TUMOREN ..................................................................... 92 3.8.3 UNTERSUCHUNG DER TUMOREN UNTER UV LICHT ..................................... 92 3.8.4 PARAFFINSCHNITTE DER TUMOREN ............................................................ 93 3.8.5 HAEMATOXYLIN-EOSIN-FAERBUNG (H.E.) DER TUMORSCHNITTE ................ 95 3.9 MIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG DER TUMORSCHNITTE ............................ 96 3.10 STATISTISCHE AUSWERTUNG DES IN VIVO VERSUCHS ............................... 96 4 ERGEBNISSE UND DISKUSSION .................................................... 99 4.1 KONVENTIONELLE HERSTELLUNGSVERFAHREN FUER WIRKSTOFF HALTIGE MIKROPARTIKEL ............................................................................................ 99 4.1.1 AUSWAHL EINES HERSTELLUNGSVERFAHRENS ........................................ 99 4.1.1.1 OPTIMIERUNG DES LOESUNGSMITTELVERDAMPFUNGSVERFAHRENS ..100 4.1.2 MIKROPARTIKEL FUER DEN IN VIVO VERSUCH ............................................110 4.1.2.1 MIKROPARTIKEL-ANALYSE ............................................................... 110 4.1.2.1.1 STRUKTURANALYSE DER MIKROPARTIKEL FUER DEN IN VIVO VERSUCH MIT HILFE DER RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE (REM) .......... 111 4.1.2.1.2 PARTIKELGROESSENANALYSE ......................................................... 112 4.1.2.1.3 BESTIMMUNG DER VERKAPSELUNGSRATEN ................................113 4.1.2.1.4 ANALYSE DES FREISETZUNGSVERHALTENS ................................. 114 4.1.2.2 ZUSAMMENFASSUNG .................................................................. 116 4.2 ENTWICKLUNG EINER EXTRAKTIONSMETHODE ZUR HERSTELLUNG VON MIKROPARTIKELN OHNE DEN GEBRAUCH TOXISCHER LOESUNGSMITTEL.... 118 4.2.1 VERSUCHSREIHE MIT PVA-, GLYCEROL-LOESUNGEN ALS AEUSSERE PHASEN .. .......................................................................................................... 121 4.2.2 VERSUCHSREIHE MIT POLOXAMER-, GLYCEROL-LOESUNGEN ALS AEUSSERE PHASEN ...................................................................... 123 4.2.3 4.2.4 4.2.5 4.2.6 4.2.7 4.2.8 4.2.9 4.2.9.1 4.2.9.1.1 4.2.9.1.2 4.2.9.1.3 4.2.9.1.4 4.2.9.1.5 4.2.9.1.6 VERSUCHSREIHE MIT METHYLCELLULOSE-LOESUNGEN ALS AEUSSERE PHASEN. .......................................................................................................... 128 VERSUCHSREIHE MIT GLYCEROL-, DESTILLIERTEM WASSER-, METHYLCELLULOSE-LOESUNGEN ALS AEUSSERE PHASEN ........................... 129 VERSUCHSREIHE MIT MAKROGOL UND GLYCEROL ALS AEUSSERE PHASEN . 131 VERSUCHSREIHE MIT GLYCEROL-, MAKROGOL 1000-LOESUNGEN ALS AEUSSERE PHASEN ............................................................................................. 133 ANALYSE DER VERSCHIEDENEN AEUSSEREN PHASEN .............................. 136 ZUSAMMENFASSUNG DER ENTWICKLUNG DER HERSTELLUNGSMETHODE FUER MIKROPARTIKELN OHNE DEN GEBRAUCH TOXISCHER LOESUNGSMITTEL .... 139 GLYCOFUROL EXTRAKTIONSMETHODE ..................................................... 141 MIKROPARTIKEL-ANALYSE ............................................................. 141 STRUKTURVERGLEICH DER UNTERSCHIEDLICH HERGESTELLTEN MIKROPARTIKEL MIT HILFE DER RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE (REM) .................................................................................... 142 AUFKLAERUNG DER STRUKTUR VON GLYCOFUROL MIKROPARTIKELN MIT HILFE DER KONFOKALEN LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE (CLSM). .............................................................................................145 BESTIMMUNG DES RESTGLYCOFUROL-GEHALTS IN GLYCOFUROL MIKROPARTIKELN ....................................................................... 147 ANALYSE DER GLASUEBERGANGSTEMPERATUR MITTELS DYNAMISCHER LEISTUNGSDIFFERENZKALORIMETRIE (DSC) ................................ 147 PARTIKELGROESSENANALYSE ......................................................... 152 BESTIMMUNG DER VERKAPSELUNGSRATEN UND DES VORLIEGENDEN VERKAPSELUNGSMECHANISMUS ..............................................154 4.2.9.1.7 ANALYSE DES FREISETZUNGSVERHALTENS ................................. 158 4.2.9.2 ZUSAMMENFASSUNG DER GLYCOFUROL EXTRAKTIONSMETHODE .... 161 4.3 IN VIVO VERSUCH ..................................................................................... 164 4.3.1 9L-GLIOSARKOM ................................................................................ 164 4.3.1.1 MAKROSKOPISCHE BETRACHTUNG DER GLIOSARKOME ..................... 166 4.3.1.2 MIKROSKOPISCHE BETRACHTUNG DER GLIOSARKOME ...................... 168 4.3.1.3 STATISTISCHE ANALYSE DER TUMORVOLUMINA .............................. 171 4.3.2 F98-GLIOBLASTOM .............................................................................173 4.3.2.1 MAKROSKOPISCHE BETRACHTUNG DER GLIOBLASTOME ................... 174 4.3.2.2 MIKROSKOPISCHE BETRACHTUNG DER GLIOBLASTOME ....................179 4.3.2.3 STATISTISCHE ANALYSE DER MITTLEREN UEBERLEBENSDAUER UND DER MITTLEREN UEBERLEBENSWAHRSCHEINLICHKEIT ................................ 182 4.3.3 ZUSAMMENFASSUNG UND DISKUSSION DES IN VIVO VERSUCHS .........189 5 ZUSAMMENFASSUNG ................................................................. 195 6 LITERATURVERZEICHNIS ................................................................200 7 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS ..........................................................239 8 ANHANG .....................................................................................242 8.1 GERAETE ....................................................................................................... 242 8.2 CHEMIKALIEN ............................................................................................ 246 8.3 UEBERSICHTSTABELLEN ZUR HERSTELLUNG VON MIKROPARTIKELN OHNE DEN GEBRAUCH TOXISCHER LOESUNGSMITTEL .................................................. 247 8.4 DSC-THERMOGRAMME ............................................................................ 255 8.5 ZEITVERLAUF - IN VIVO VERSUCH ............................................................. 258 8.6 UEBERSICHTSTABELLEN ZUR STATISTIK DES IN VIVO VERSUCHS ................. 259 9 LEBENSLAUF .................... 261
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