Charakterisierung des neu entwickelten monoklonalen Antikörpers UMB-3 gegen den My-Opioidrezeptor:
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1. ZUSAMMENFASSUNG 1
2. EINLEITUNG 3
2.1 OPIOIDE 3
2.2 STRUKTUR UND VORKOMMEN DER OPIOIDREZEPTOREN 4
2.3 SIGNALTRANSDUKTION UND DEREN EFFEKTE AUF DIE ZIELORGANE 6
2.4 TOLERANZ UND PRONOZIZEPTIVE SYSTEME 8
2.5 ANTIKOERPER 9
2.6 HERSTELLUNG MONOKLONALER ANTIKOERPER 11
3. ZIELE DER ARBEIT 13
4. MATERIAL UND METHODEN 14
4.1 MATERIAL 14
4.1.1 UNTERSUCHUNGSMATERIAL 14
4.1.1.1 TIERMATERIAL 14
4.1.1.2 MENSCHLICHES MATERIAL 14
4.1.2 PUFFER UND LOESUNGEN 15
4.1.2.1 WESTERN-BLOT-ANALYSEN 15
4.1.2.2 IMMUNCYTOCHEMIE 16
4.1.2.3 IMMUNHISTOCHEMIE 16
4.1.3 CHEMIKALIEN 17
4.1.4 ANTIKOERPER UND KITS 18
4.1.5 MEDIKAMENTE 19
4.2 METHODEN 19
4.2.1 WESTERN-BLOT-ANALYSEN 19
4.2.1.1 REZEPTORISOLATION AUS ZELLEN 19
4.2.1.1.1 ZELLAUFBEREITUNG 19
4.2.1.1.2 REZEPTORISOLATION AUS ZELLEN MIT WGA-BEADS 19
4.2.1.2 REZEPTORISOLATION AUS DEM GEWEBE 20
4.2.1.2.1 GEWEBEAUFBEREITUNG 20
4.2.1.2.2 REZEPTORISOLATION AUS DEM GEWEBE MIT PROTEIN-A-BEADS 20
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IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
4.2.1.3 DARSTELLUNG DER REZEPTORPROTEINE MITTELS SDS-PAGE UND
WESTERN-BLOT 21
4.2.1.3.1 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 21
4.2.1.3.2 WESTERN-BLOT 21
4.2.1.3.3 ANTIKOERPERBEHANDLUNG 22
4.2.1.3.4 PEPTIDNEUTRALISATION 22
4.2.1.3.5 ENTWICKLUNG 23
4.2.2. IMMUNCYTOCHEMIE 23
4.2.2.1 ZELLAUFBEREITUNG 23
4.2.2.2 STIMULATION DER ZELLEN 23
4.2.2.3 FIXIERUNG DER ZELLEN UND VORBEREITUNG AUF DIE
ANTIKOERPERBEHANDLUNG 24
4.2.2.4 ANTIKOERPERBEHANDLUNG 24
4.2.3 IMMUNHISTOCHEMIE 24
4.2.3.1 AUFBEREITUNG DES UNTERSUCHUNGSMATERIALS 24
4.2.3.2 VORBEREITUNG DER PARAFFINSCHNITTE 25
4.2.3.3 DIE AVIDIN-BIOTIN-KOMPLEX-METHODE (ABC-METHODE) 25
4.2.3.4 GEGENFAERBUNG UND EINDECKEN 26
4.2.3.5 PEPTIDNEUTRALISATION 27
4.2.4 AUSWERTUNG 27
5. ERGEBNISSE 28
5.1 WESTERN-BLOT-ANALYSEN. 28
5.1.1 WESTERN-BLOT-ANALYSE AN MOR-EXPRIMIERENDEN HEK-293-ZELLEN 28
5.1.2 WESTERN-BLOT-ANALYSE AM HIRNGEWEBE DER MAUS 29
5.2 IMMUNZYTOCHEMISCHE FAERBUNGEN AN MOR-EXPRIMIERENDEN HEK-293-ZELLEN 30
5.3 IMMUNHISTOCHEMIE 31
5.3.1 IMMUNHISTOCHEMISCHE UNTERSUCHUNG VON VERSCHIEDENEN GEWEBEN DER
RATTE 31
5.3.2 IMMUNHISTOCHEMISCHE UNTERSUCHUNG VON VERSCHIEDENEN GEWEBEN DER
MAUS 37
5.3.3 IMMUNHISTOCHEMISCHE UNTERSUCHUNG VON VERSCHIEDENEN HUMANEN GEWEBEN
42
5.3.4 IMMUNHISTOCHEMISCHE UNTERSUCHUNG VON VERSCHIEDENEN HUMANEN
TUMORGEWEBEN....42
6. DISKUSSION 44
6.1 WESTERN-BLOT-ANALYSEN AN MOR-EXPRIMIERENDEN HEK-293-ZELLEN UND AM 44
HIRNGEWEBE DER MAUS
6.2 IMMUNZYTOCHEMISCHE FAERBUNGEN AN MOR-EXPRIMIERENDEN HEK-293-ZELLEN 46
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
6.3 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNGEN AN VERSCHIEDENEN GEWEBEN
UNTERSCHIEDLICHER SPEZIES... 48
6.4 IMMUNHISTOCHEMISCHE FAERBUNGEN AN VERSCHIEDENEN TUMORGEWEBEN DES
MENSCHEN 59
7. SCHLUSSFOLGERUNGEN 62
8. LITERATURVERZEICHNIS 63
9. ANHANG 74
9.1 LEBENSLAUF UND PUBLIKATION 74
9.2 EHRENWOERTLICHE ERKLAERUNG 75
9.3 DANKSAGUNG 76
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