Charakterisierung der FAM26-Proteine als neue Familie kalziumpermeabler Ionenkanäle:
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2012
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INHALT
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
1.1 DIE ROLLE VON KALZIUM IN DER ZELLPHYSIOLOGIE I
1.2 REGULIERUNG D E R |CA 2+)J DURCH KAIZIUMPERMEABLE KANAELE 1
1.3 KALZIUMDYSREGULATION BEI MORBUS ALZHEIMER 4
1.4 T R P (TRANSIENT RECEPTOR POTENTIAL)- KANAELE 4
1.5 T R P M 7 ( TRANSIENT RECEPTOR POTENTIAL MELASTATIN 7) 6
1.6 FAMILY O F SEQUENCE SIMILARITY (FAM26)-PROTEINFAMILIE 7
1.6.1 EIGENSCHAFTEN VON FAM26C (CALHM1) 8
1.6.2 EIGENSCHAFTEN VON FAM26A, FAM26B, FAM26D,
FAM26E UND FAM26F 10
1.7 ZUSAMMENFASSUNG UND ZIELSETZUNG DES PROJEKTES 11
2. MATERIAL 13
3. METHODEN 18
3.1 MOLEKULARBIOLOGIE 18
3.2 ZELLKULTUR 29
3.3 IMMUNZYTOCHEMIE 3 0
3.4 FLUORESCENCE RESONANCE ENERGY TRANSFER (FRET) 31
3.5 MESSUNG D E R INTRAZELLULAEREN KALZIUMKONZENTRATION 3 3
3.5.1 KALZIUMMESSUNGEN MIT BIOLUMINESZENZ 3 3
3.5.2 HIGH-THROUGHPUT-SCREENINGVERFAHREN PHARMAKOLOGISCHER STOFFE 3 4
3.5.3 KALZIUM-IMAGING MIT FURA-2 3 6
3.5.4 ERSTELLUNG VON DOSIS-WIRKUNGS-KURVEN MIT FURA-2 3 9
3.6 STATISTISCHE ANALYSEN 3 9
3.7 ERSTELLUNG EINES PHYLOGENETISCHEN BAUMES 3 9
4. ERGEBNISSE 4 0
4.1 UNTERSUCHUNG DER SUBZELLULAEREN LOKALISATION D E R FAM26-PROTEINE 4 0
4.2 FRET-EXPERIMENTE Z U R PROTEININTERAKTION VON F A M 2 6 B
UND FAM26F 50
4.3 FUNKTION DER FAM26-PROTEINE ALS KAIZIUMPERMEABLE KANAELE 5 3
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IMAGE 2
INHALT
4.4 ERGEBNISSE DES HIGH-THROUGHPUT-SCREENINGVERFAHRENS PHARMAKOLOGISCHER
STOFFE 59
4.5 EVALUATION VON NS8593 ALS NEGATIVEM MODULATOR FUER T R P M 7 6 4
4.6 EVALUATION VON FELODIPIN ALS NEGATIVEM MODULATOR FUER FAM26B 6 6
4.7 EVALUATION VON RALOXIFEN ALS POSITIVEM MODULATOR FUER FAM26B 69
4.8 EINFLUSS D E R FAM26-PROTEINE A U F INTRAZELLULAERE
SIGNALTRANSDUKTIONSWEGE... 71
4.9 ERSTELLUNG EINES PHYLOGENETISCHEN BAUMES D E R FAM26-PROTEINE 76
4.10 ZUSAMMENFASSUNG D E R ERGEBNISSE 7 6
5. DISKUSSION 7 9
5.1 SUBZELLULAERE VERTEILUNG DER FAM26-PROTEINE 79
5.2 HOMO- UND HETEROMULTIMERISATION VON F A M 2 6 B UND FAM26F 8 2
5.3 FAM26-PROTEINE ALS KALZIUMPERMEABLE KANAELE 8 3
5.4 HIGH-THROUGHPUT-SCREENING VON PHARMAKOLOGISCHEN SUBSTANZEN 8 5
5.4.1 PHOSPHORYLIERUNG ALS MOEGLICHER MODULATIONSWEG FUER FAM26B UND
FAM26F 8 7
5.4.2 MOEGLICHER EINFLUSS VON CAMP AUF DIE STEUERUNG VON FAM26B
UND FAM26F 88
5.5 NEGATIVE MODULATION VON T R P M 7 DURCH NS8593 91
5.6 NEGATIVE MODULATION VON FAM26B DURCH FELODIPIN 9 3
5.7 POSITIVE MODULATION VON FAM26B DURCH RALOXIFEN 9 4
5.8 EINFLUSS D E R FAM26-PROTEINE A U F INTRAZELLULAERE SIGNALWEGE 95
5.9 ZUSAMMENFASSUNG D E R DISKUSSION UND AUSBLICK 9 8
6. LITERATURVERZEICHNIS 9 9
7. A N H A N G 110
8. TABELLENVERZEICHNIS 14545
9. ABBILDUNGSVERZEICHNIS 146
10. DANKSAGUNG 148
11. EIGENE PUBLIKATIONEN UND KONGRESSBEITRAEGE 149
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