Wirksamkeitsprüfung chemischer Verfahren zur Desinfektion von Coxiella burnetii in kontaminierten Bodenmatrizes:
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Giessen
VVB Laufersweiler
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS IV
1 EINLEITUNG 1
2 LITERATURUEBERSICHT 2
2.1 COXIELLA BURNETII 2
2.1.1 Q-FIEBER UND COXIELLOSE 2
2.1.2 ERREGEREIGENSCHAFTEN UND -TAXONOMIE 3
2.1.3 TENAZITAET VON COXIELLEN 3
2.1.3.1 TENAZITAET GEGENUEBER PHYSIKALISCHEN EINFLUESSEN 4
2.1.3.2 TENAZITAET GEGENUEBER CHEMISCHEN EINFLUESSEN 11
2.1.3.3 UNTERSCHIEDE IN DER TENAZITAET DER VERSCHIEDENEN ZELLFORMEN VON
C. BURNETII 14 2.1.3.4 EINFLUSS VON PROTEINEN AUF DIE TENAZITAET VON C.
BURNETII 16
2.1.4 EMPFEHLUNGEN ZUR DESINFEKTION VON C. OEURNEF/Z-KONTAMINIERTEN
MATRIZES 18 2.2 BODENDESINFEKTION 20
2.3 WIRKSAMKEITSPRUEFUNGEN VON DESINFEKTIONSMITTELN 25
3 MATERIAL UND METHODEN 31
3.1 MATERIAL 31
3.1.1 NAEHRMEDIEN, PUFFER, LOESUNGEN, VERBRAUCHSMATERIALIEN UND GERAETE 31
3.1.2 COXIELLA BURNETII-STAMM 31
3.1.3 BGM-ZELLEN 31
3.1.4 DESINFEKTIONSMITTEL 31
3.1.5 BODENPROBEN 32
3.1.6 REAKTIONSGEFAESSE FUER DIE ARBEITEN MIT BODENPROBEN 32
3.2 METHODEN 33
3.2.1 KULTURELL-MIKROBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNG UND AUTOKLAVIEREN VON
BODENPROBEN 33
3.2.2 ANZUCHT UND ZAEHLUNG VON BGM-ZELLEN 34
3.2.3 FAERBEMETHODEN 34
3.2.3.1 TRYPANBLAUFAERBUNG 35
3.2.3.2 GIMENEZ-FAERBUNG 35
3.2.3.3 FAERBUNG MIT LYSOTRACKER RED 35
3.2.3.4 IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG 35
3.2.4 MIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG VON ZELLKULTUREN 36
3.2.5 HERSTELLUNG VON C. BUMEF/7-SUSPENSIONEN 37
3.2.6 ZELLKULTURTESTS ZUR BESTIMMUNG ZYTOTOXISCHER EFFEKTE 38
3.2.6.1 VORBEREITUNG UND DURCHFUEHRUNG 38
3.2.6.2 AUSWERTUNG MITTELS HELLFELDMIKROSKOPIE 40
3.2.6.3 AUSWERTUNG DER DESINFEKTIONSMITTEL-BEDINGTEN ZELLSCHAEDEN MITTELS
MTT-TEST 40
3.2.7 BESTIMMUNG DER C. FCT/MEFFI-KEIMZAHL IN WAESSRIGEN SUSPENSIONEN 41
3.2.7.1 BESTIMMUNG C. BUMETO-PARTIKELZAHL 41
3.2.7.2 BESTIMMUNG DER C. OEURNETO-LEBENDKEIMZAHL 41
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/1014071097
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.8 WIRKSAMKEITSPRUEFUNG CHEMISCHER DESINFEKTIONSMITTEL AN C. BURNETII-
PRUEFSUSPENSIONEN 43
3.2.8.1 QUANTITATIVER SUSPENSIONSVERSUCH ZUR DESINFEKTION VON C.
BURNETII MIT UND OHNE PROTEINBELASTUNG 43
3.2.8.2 QUANTITATIVER KEIMTRAEGERVERSUCH 46
4 ERGEBNISSE 49
4.1 ZYTOTOXISCHE WIRKUNG DER DESINFEKTIONSMITTEL AUF DIE BGM-ZELLEN 49
4.1.1 LICHTMIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG 49
4.1.2 AUSWERTUNG MITTELS MTT-TEST 55
4.1.3 EVALUIERUNG VON L-HISTIDIN ALS INAKTIVIERUNGSMITTEL ZUR REDUKTION
DER ZYTOTOXISCHEN WIRKUNG VON FORMALIN 57
4.1.3.1 LICHTMIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG 58
4.1.3.2 AUSWERTUNG MITTELS MTT-TEST 59
4.2 VERGLEICHENDE UNTERSUCHUNGEN ZUR ERKENNUNG VON C.
BURNEFH-INFIZIERTEN BGM-ZELLKULTUREN 60
4.3 BESTIMMUNG DER KEIMZAHL DER C. TOURNEF/I-PRUEFSUSPENSION 66
4.4 EINFLUSS VON DESINFEKTIONSMITTELN IN ZELLVERTRAEGLICHEN
KONZENTRATIONEN AUF DIE BESTIMMUNG DER BURNE(/;-LEBENDKEIMZAHL 67
4.5 QUANTITATIVER SUSPENSIONSVERSUCH ZUR DESINFEKTION VON C. BURNETII
OHNE UND MIT EIWEISSBELASTUNG 68
4.6 QUANTITATIVE KEIMTRAEGERVERSUCHE AN BODENPROBEN ZUR WIRKSAMKEITS-
PRUEFUNG CHEMISCHER DESINFEKTIONSMITTEL GEGENUEBER C. BURNETII 78 4.6.1
ZYTOTOXISCHE WIRKUNG DER BODENBESTANDTEILE AUF DIE BGM-ZELLEN 78 4.6.2
KULTURELL-MIKROBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNG UND AUTOKLAVIEREN
DER BODENPROBEN 80
4.6.3 RUECKGEWINNUNG DER COXIELLEN AUS DEN BODENPROBEN 81
4.6.4 QUANTITATIVE KEIMTRAEGERVERSUCHE ZUR DESINFEKTION VON C. BURNETII
UNTER PROTEINBELASTUNG 83
5 BESPRECHUNG DER ERGEBNISSE 88
5.1 ZYTOTOXIZITAET DER DESINFEKTIONSMITTEL AUF BGM-ZELLEN 88
5.2 ABSTOPPEN DER DESINFEKTIONSMITTELWIRKUNG 90
5.3 REDUKTION DER ZYTOTOXIZITAET VON FORMALIN DURCH L-HISTIDIN 91
5.4 VERFAHREN ZUM NACHWEIS VON COXIELLEN-INFIZIERTEN BGM-ZELLEN 91 5.4.1
LEBENDKEIMZAHL DERWAESSRIGEN C. FTURNEF/Z-PRUEFSUSPENSION UND PRAEZISION
DER METHODIK ZUR BESTIMMUNG DER C. FTUMEFT-LEBENDKEIMZAHL 93 5.5
BEEINFLUSSUNG DER LEBENDKEIMZAHLBESTIMMUNG DURCH
DESINFEKTIONSMITTEL IN ZELLVERTRAEGLICHEN KONZENTRATIONEN 94 5.6
QUANTITATIVER SUSPENSIONSVERSUCH ZUR DESINFEKTION VON C. BURNETII 95 5.7
VORAUSETZUNGEN FUER DIE VERWENDUNG VON BODENPROBEN ALS KEIMTRAEGER 96
5.7.1 METHODIK DER KEIMTRAEGERVERSUCHE AN BODENMATRIZES 96
5.7.2 REISOLATION DER COXIELLEN AUS DEN BODENPROBEN 97
5.8 QUANTITATIVER KEIMTRAEGERVERSUCH ZUR DESINFEKTION VON C. BUMETII 99
5.9 SCHLUSSFOLGERUNG UND AUSBLICK 101
6 ZUSAMMENFASSUNG 103
7 SUMMARY 105
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
8 LITERATURVERZEICHNIS 107
ANHANG 116
DANKSAGUNG 124
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