Untersuchungen zur Charakterisierung der an der Regulation des ziliären Transports beteiligten nikotinischen Acetylcholinrezeptoren im Trachealepithel der Maus:
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| Published: |
Gießen
DVG Service
2012
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
2 LITERATURUEBERSICHT 3
2.1 TRACHEALEPITHEL 3
2.1.1 ZELLEN DES TRACHEALEPITHELS 3
2.1.2 FUNKTIONEN DES TRACHEALEPITHELS 4
2.1.3 MUKOZILIAERE CLEARANCE 5
2.1.4 ZILIEN UND ZILIENSCHLAG 6
2.1.4.1 STRUKTUR U N D AUFBAU V O N ZILIEN 6
2.1.4.2 ZILIENSCHLAGFREQUENZ U N D - R E G U L A T I O N 7
2.1.4.3 RICHTUNG UND METACHRONIE D E S ZILIENSCHLAGS 8
2.2 NIKOTINISCHE ACETYLCHOLINREZEPTOREN (NACHR) 10
2.2.1 STRUKTUR DER N A C H R 10
2.2.2 SIGNALTRANSDUKTION UND FUNKTION N A C H R 13
2.2.3 AGONISTEN, ANTAGONISTEN U N D ALLOSTERISCHE LIGANDEN N A C H R 14
2.3 DAS NON-NEURONALE CHOLINERGE SYSTEM 16
2.3.1 FUNKTIONEN VON FREIGESETZTEM A C H IN DER TRACHEA 17
3 MATERIAL UND METHODEN 19
3.1 MESSUNG DER PARTIKELTRANSPORTGESCHWINDIGKEIT IN DER TRACHEA 19
3.1.1 VERSUCHSTIERE 19
3.1.2 ORGANENTNAHME 19
3.1.3 VORBEREITUNG ZUR M E S S U N G 2 0
3.1.4 M E S S U N G 21
3.1.5 AUSWERTUNG 2 4
3.1.6 STATISTIK 2 6
3.2 REVERSE TRANSKRIPTASE-POLYMERASEKETTENREAKTION (RT-PCR) 27
3.2.1 RNA-LSOLIERUNG 2 7
I
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IMAGE 2
3.2.2 CDNA-SYNTHESE 2 7
3.2.3 DURCHFUEHRUNG DER P C R 2 8
3.2.4 AUSWERTUNG DURCH DNA-GELELEKTROPHORESE 31
3.2.5 KONTROLLREAKTIONEN 31
3.3 IMMUNHISTOCHEMIE 3 2
3.3.1 VERSUCHSTIERE 3 2
3.3.2 PERFUSIONSFIXIERUNG 3 2
3.3.3 INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ AN DER TRACHEA 3 3
3.3.4 KONTROLLREAKTIONEN ZU D E N INDIREKTEN
IMMUNFLUORESZENZUNTERSUCHUNGEN 3 4
4 ERGEBNISSE 35
4.1 MESSUNG DER PTG IN DER TRACHEA VON B16-MAEUSEN 35
4.1.1 P T G NACH Z U G A B E V O N NIKOTIN UND ATP 35
4.1.2 P T G NACH ZUGABE VON MECAMYLAMIN, NIKOTIN U N D ATP 3 7
4.1.3 EXPRESSION D E R UNTEREINHEITEN DES N A C H R 3 8
4.2 CHARAKTERISIERUNG DER AN DER REGULATION DER PTG BETEILIGTEN
UNTEREINHEITEN
DURCH ZUGABE SELEKTIVER NACHR-ANTAGONISTEN 41
4.2.1 P T G NACH ZUGABE VON D H SS E , NIKOTIN U N D ATP 41
4.2.1.1 EXPRESSION DER N A C H R A3-, A4-, SS 2 - U N D SS4-UNTEREINHEITEN
4 3
4.2.2 P T G NACH ZUGABE VON A - B T X , NIKOTIN U N D ATP 4 5
4.2.2.1 EXPRESSION D E R A 7 - U N D A9-UNTEREINHEIT D E S N A C H R 4 6
4.2.3 P T G NACH ZUGABE VON A - B T X U N D DHSSE, NIKOTIN U N D ATP 4 8
4.2.3.1 EXPRESSION D E R A3-, A4-, A7-, A9-, SS2- U N D SS4-UNTEREINHEITEN
D E S
N A C H R S 4 8
4.2.4 P T G NACH Z U G A B E VON STRYCHNIN, NIKOTIN UND ATP 5 0
4.2.4.1 EXPRESSION DER ALO-UNTEREINHEIT DES N A C H R 5 3
4.2.4.2 VERGLEICH D E R REAKTIONEN A U F NIKOTIN NACH G A B E VON
STRYCHNIN IN
UNTERSCHIEDLICHEN KONZENTRATIONEN 5 4
4.2.5 VERGLEICH D E R REAKTIONEN A U F NIKOTIN NACH G A B E V O N HEPES
U N D D E N
VERSCHIEDENEN ANTAGONISTEN V O N NACHR-UNTEREINHEITEN 5 5
I I
IMAGE 3
4.3 MESSUNG DER PTG IN DER TRACHEA VON A3-BAC-TRANSGENEN EGFP-MAEUSEN UND
IHREM KORRESPONDIERENDEN KONTROLLMAUSSTAMM 57
4.3.1 P T G BEI F V B - M AE U S E N N A C H ZUGABE V O N HEPES, NIKOTIN
U N D ATP 5 7
4.3.2 P T G BEI A3-BAC-TRANSGENEN E G F P - M AE U S E N NACH ZUGABE V O
N H E P E S ,
NIKOTIN U N D ATP 5 8
4.3.3 P T G BEI A3-BAC-TRANSGENEN E G F P - M AE U S E N NACH ZUGABE V O
N DHSSE, NIKOTIN
U N D ATP 5 9
4.3.4 VERGLEICH D E R REAKTIONEN A U F NIKOTIN NACH G A B E V O N HEPES
UND D H SS E BEI
F V B - U N D A3-BAC-TRANSGENEN E G F P - M AE U S E N 6 0
4.4 IMMUNHISTOCHEMIE 61
5 DISKUSSION 63
5.1 BETEILIGUNG DER UNTEREINHEITEN DES NACHR AN DER STIMULATION DER PTG
IM
TRACHEALEPITHEL 63
5.1.1 EINFLUSS DER A 3 / 4 SS2/4 HETEROMEREN N A C H R A U F DIE
STIMULATION D E R P T G 6 5
5.1.2 EINFLUSS DER A 7 / A 9 H O M O M E R E N N A C H R A U F DIE
STIMULATION DER P T G 6 6
5.1.3 EINFLUSS D E R A9/ALO-UNTEREINHEITEN DES N A C H R A U F DIE
STIMULATION
DER P T G 6 7
5.2 BETEILIGUNG EINES ATYPISCHEN ALO-NACHR AN DER DURCH NIKOTIN
INDUZIERTEN
STEIGERUNG DER PTG 69
6 ZUSAMMENFASSUNG 72
7 SUMMARY 74
8 LITERATURVERZEICHNIS 76
9 ERKLAERUNG 88
10 VEROEFFENTLICHUNGEN 89
11 DANKSAGUNG 90
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