Eine Untersuchung von zwei Tiermodellen auf ihre Eignung für Studien der Spermatogenese (Weißbüschelaffe, Callithrix jacchus) und der frühen Embryonalentwicklung (Rind, Bos taurus) des Menschen:
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Gießen
VVB Laufersweiler Verl.
2010
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1.
EINLEITUNG
UND
ZIELE
1
2.
LITERATURUEBERSICHT
4
2.1.
DER
WEISSBUESCHELAFFE
(CALLITHRIX
JACCHUS)
4
PRODUKTION,
REIFUNG
UND
FUNKTION
DES
MAENNLICHEN
GAMETEN
2.2.
AUFBAU
DES
HODENS
UND
ABLAUF
DER
SPERMATOGENESE
6
2.2.1.
DAS
INTERSTITIUM
7
2.2.1.1.
LEYDIGZELLEN
7
2.2.2.
DAS
KEIMEPITHEL
7
2.2.2.1.
SERTOLI
ZELLEN
8
2.2.2.2.
KEIMZELLEN
8
2.2.3.
STADIEN
DER
SPERMATOGENESE
10
2.2.3.1.
ZELLBILD
DER
6
SPERMATOGENESESTADIEN
DES
MENSCHEN
12
2.2.3.2.
ZELLBILD
DER
6
SPERMATOGENESESTADIEN
BEI
CALLITHRIX
JACCHUS
14
2.2.3.3.
SPERMATOGENESE
BEI
BOS
TAURUS
17
2.3.
SPERMATOGENESESTOERUNGEN
17
2.4.
REGULATIONSMECHANISMEN
DER
SPERMATOGENESE
18
2.4.1.
HORMONELLE
FAKTOREN
18
2.4.2.
GENETISCHE
FAKTOREN
20
2.4.2.1.
HISTON-PROTAMIN-AUSTAUSCH
20
2.4.2.2.
HISTONE
21
2.4.2.3.
PROTAMINE
24
2.4.3.
EPIGENETISCHE
REGULATIONSMECHANISMEN
WAEHREND
DER
SPERMATOGENESE
27
2.4.3.1.
HISTON-CODE
27
PRODUKTION,
REIFUNG
UND
FUNKTION
DES
WEIBLICHEN
GAMETEN
2.5.
AUFBAU
DES
OVARS
UND
ABLAUF
DER
OOGENESE
30
2.5.1.
OOGENESE
UND
FOLLIKULOGENESE
30
2.5.2.
MORPHOLOGIE
DER
OOZYTE
31
2.5.3.
HORMONELLE
REGULATION
32
2.5.4.
FERTILISATION
UND
FRUEHE
EMBRYONALENTWICKLUNG
33
2.5.5.
EPIGENETISCHE
REGULATIONSMECHANISMEN
WAEHREND
DER
FRUEHEN
EMBRYONALENTWICKLUNG
34
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
37
3.1.
MATERIAL
37
3.1.1.
HUMANE
HODENBIOPSIEN
37
3.1.2.
HUMANES
EJAKULAT
37
3.1.3.
HODEN
VON
CALLITHRIXJACCHUS
37
3.1.4.
EJAKULAT
VON
CALLITHRIXJACHHUS
UND
BOS
TAURUS
38
3.1.5.
EIZELLEN,
ZYGOTEN,
2-ZELL
UND
4-ZELL
EMBRYONEN
VON
CALLITHRIX
JACCHUS
UND
BOS
TAURUS
38
3.2.
METHODEN
39
3.2.1.
EXTRAKTION
VON
HISTONEN
AUS
EJAKULAT
VON
MENSCH
UND
CALLITHRIX
JACCHUS
39
3.2.2.
WESTERN
BLOT
ANALYSE
40
3.2.3.
PARAFFINMATERIAL
49
3.2.4.
EJAKULATAUSSTRICHE
51
3.2.5.
IMMUNHISTOCHEMIE
VON
HODENGEWEBE
52
3.2.6.
IMMUNHISTOCHEMIE
VON
EJAKULAT
56
3.2.7.
QUANTITATIVE
AUSWERTUNG
UND
STATISISCHE
ANALYSE
57
3.2.8.
IN-SITU
HYBRIDISIERUNG
57
3.2.9.
GESAMT
RNA
EXTRAKTION
AUS
EJAKULAT
VON
CALLITHRIX
JACCHUS
UND
MENSCH
76
3.2.10.
GESAMT
RNA
EXTRAKTION
AUS
EIZELLEN,
ZYGOTEN,
2-ZELL-STADIEN
UND
4-ZELL-STADIEN
VON
CALLITHRIX
JACCHUS
UND
BOS
TAURUS
77
3.2.11.
REVERSE
TRANSKRIPTASE-POLYMERASE
KETTENREAKTION
(RT-PCR)
78
3.2.12.
ANALYSE
DES
PCR-PRODUKTES
MITTELS
GEL-ELEKTROPHORESE
83
3.2.13.
SEQUENZIERUNG
83
4.ERGEBNISSE
84
4.1.
WESTERN
BLOT
ANALYSE
VON
MENSCHLICHEM
EJAKULAT
84
4.2.
WESTERN
BLOT
ANALYSE
VON
EJAKULAT
VON
CALLITHRIX
JACCHUS
85
4.3.
SEQUENZIERUNG
UND
ANALYSE
VON
PROTAMIN-1
DES
CALLITHRIX
JACCHUS
86
4.4.
IN-SITU
HYBRIDISIERUNG
89
4.5.
IMMUNHISTOCHEMIE
(IHC)
91
4.5.1.
NORMALE
SPERMATOGENESE
BEIM
MENSCH
91
4.5.2.
NORMALE
SPERMATOGENESE
BEI
CALLITHRIX
JACCHUS
93
4.5.3.
IMMUNHISTOCHEMISCHE
ERGEBNISSE
VON
MENSCH
UND
CALLITHRIX
JACCHUS
IM
VERGLEICH
95
4.5.4.
EJAKULIERTE
SPERMATOZOEN
BEIM
MENSCHEN
97
4.5.5.
EJAKULIERTE
SPERMATOZOEN
BEI
CALLITHRIXJACCHUS
98
4.5.6.
RT-PCR
ERGEBNISSE
99
5.
DISKUSSION
101
5.1.
SPERMATOGENESE:
HISTON-PROTAMIN
AUSTAUSCH
BEI
MENSCH
UND
CALLITHRIX
JACCHUS
101
5.2.
EXPRESSION
VERSCHIEDENER
TRANSKRIPTE
WAEHREND
DER
FRUEHEN
EMBRYONAL
ENTWICKLUNG
103
5.3.
EIGNUNG
DER
VON
UNS
EINGESETZTEN
TIERMODELLE
FUER
STUDIEN
DER
SPERMATO
GENESE
UND
UND
FRUEHEN
EMBRYONALENTWICKLUNG
108
6.
ZUSAMMENFASSUNG
110
7.
SUMMARY
112
8.
LITERATURVERZEICHNIS
114
9.ANHANG
131
10
.
DANKSAGUNG
136
11
.
ERKLAERUNG
137
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