Herstellung und Charakterisierung mesenchymaler Stammzellen bei Patienten mit akuten Leukämien:
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| Format: | Thesis Book |
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| Published: |
2011
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AUS DER KLINIK FUER INNERE MEDIZIN
MIT SCHWERPUNKT HAEMATOLOGIE, ONKOLOGIE UND IMMUNOLOGIE
(DIREKTOR: PROF. DR. MED. A. NEUBAUER)
DES FACHBEREICHS MEDIZIN DER PHILIPPS-UNIVERSITAET MARBURG
IN ZUSAMMENARBEIT MIT DEM UNIVERSITAETSKLINIKUM GIESSEN UND MARBURG GMBH,
STANDORT MARBURG
HERSTELLUNG UND CHARAKTERISIERUNG
MESENCHYMALER STAMMZELLEN BEI PATIENTEN
MIT AKUTEN LEUKAEMIEN
INAUGURAL-DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DER GESAMTEN
HUMANMEDIZIN DEM FACHBEREICH MEDIZIN DER PHILIPPS-UNIVERSITAET MARBURG
VORGELEGT VON
KATRIN MAEVERS AUS MARBURG
MARBURG, 2011
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/1014227046
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS VI
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG....................
.......................................................................................1
1.1 AKUTE LEUKAEMIEN 1
1.1.1 ALLGEMEINES 1
1.1.2 DIAGNOSTIK UND KLASSIFIKATION. 1
1.1.3 THERAPIE UND PROGNOSE 3
1.1.4 NUMERISCHE UND STRUKTURELLE ABERRATIONEN 4
1.1.5 TRANSLOKATIONT(8;21) UND INVERSION INV(16) 4
1.1.6 TRANSLOKATIONT(9;22) 5
1.1.7 MOLEKULARE DIAGNOSTIK. 5
1.2 ADULTE STAMMZELLEN 6
1.2.1 DEFINITION 6
1.2.2 MESENCHYMALE STAMMZELLEN (MSC) 6
1.3 MESENCHYMALE STAMMZELLEN IN DER THERAPIE 7
1.3.1 REGENERATION 7
1.3.2 TRANSPLANTATION 8
1.3.3 IMMUNMODULATORISCHE FUNKTIONEN 9
1.3.4 TRANSDIFFERENZIERUNG 9
1.3.5 MSC ALS INDUZIERTE PLURIPOTENTE STAMMZELLEN (IPS) 9
1.4 ZIEL DER ARBEIT 11
2 MATERIAL UND METHODEN J,.. ,.......I... ***,.,*, ,,.12
2.1 PATIENTENPROBEN UND KONTROLLEN 12
2.2 ISOLATION UND ZELLKULTUR 13
2.2.1 DICHTEGRADIENTEN-ZENTRIFUGATION 13
2.2.2 ZELLKULTUR 14
2.3 KRYOKONSERVIERUNG 15
2.4 IMMUNPHAENOTYPISIERUNG (FACS) 15
2.5 IN-VITRO-DIFFERENZIERUNG VON MSC 17
2.5.1 OSTEOGENE RICHTUNG 17
2.5.2 CHONDROGENE RICHTUNG 18
2.6 FLUORESZENZ-IN-SITU-HYBRIDIERUNG (FISH) 18
2.7 RNA-EXTRAKTION 19
2.8 QUANTIFIZIERUNG VON RNA UND DNA 20
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS VU
2.9 CDNA-SYNTHESE 21
2.10POLYMERASE-KETTENREAKTION(PCR) 22
2.10.1 SS-AKTIN RT-PCR 23
2.10.2 KONVENTIONELLE PCR ZUM NACHWEIS VON AML1/ETO 23
2.10.3 KONVENTIONELLE PCR ZUM NACHWEIS VON CBFSS/MYHL 1 25
2.10.4 KONVENTIONELLE PCR ZUM NACHWEIS VON MAJOR BCR/ABL 25
2.10.5 KONVENTIONELLE PCR ZUM NACHWEIS VON MINOR BCR/ABL 26
2.11 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 26
2.12 GERAETE UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 27
3 ERGEBNISSE...................................... ......
............................................................29
3.1 ZELLKULTUR 29
3.1.1 WACHSTUMSKINETIK VON MSC BEI PATIENTEN MIT AML UND ALL 30
3.1.2 WACHSTUMSKINETIK VON MSC IN PRIMAERKULTUREN UND PASSAGEN 33
3.2 KRYOKONSERVIERUNG 34
3.3 IMMUNPHAENOTYPISIERUNG (FACS) 34
3.4 IN-VITRO-DIFFERENZIERUNG VON MSC 37
3.4.1 OSTEOGENE RICHTUNG 37
3.4.2 CHONDROGENE RICHTUNG 37
3.5 FISH- UND PCR-ANALYSE VON MSC BEI PATIENTEN MIT AML UND ALL 39
4 DISKUSSION
..........................................................................................................42
4.1 CHARAKTERISIERUNG HUMANER MSC 42
4.2 UNTERSCHIEDE ZWISCHEN MSC VON PATIENTEN MIT AML UND ALL 44
4.3 UNTERSUCHUNG VON MSC AUF CHROMOSOMALE ABERRATIONEN 45
5 ZUSAMMENFASSUNG
....................................................................................47
6 LITERATUR 49
7 ANHANG...............................................
........................................................70
VERZEICHNIS DER AKADEMISCHEN LEHRER 70
DANKSAGUNG 71
EHRENWOERTLICHE ERKLAERUNG 72
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