Untersuchung des Verhaltens autoaggressiver T-Zellen während der experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis der Ratte mittels intravitaler 2-Photonen-Mikroskopie:
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| Veröffentlicht: |
2011
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1.
ZUSAMMENFASSUNG
1
2.
EINLEITUNG
5
2.1.
DIE
AUTOIMMUNERKRANKUNG
MULTIPLE
SKLEROSE
5
2.2.
DIE
EXPERIMENTELLE
AUTOIMMUNE
ENZEPHALOMYELITIS
7
2.2.1.
TEAE
IN
DER
LEWIS-RATTE
..........................................................................
8
2.3.
T-ZELL-IMMUNBIOLOGIE
10
2.3.1.
WIRKUNGEN
VON
SPHINGOSIN-1
-PHOSPHAT
AUF
DIE
MIGRATION
VON
T-ZELLEN
...........................................................................
14
2.3.2.
INTERAKTION
VON
LYMPHOZYTEN
MIT
DEM
GEFAESSENDOTHEL
..........................
16
2.3.3.
EXTRAVASATION
VON
T-ZELLEN
IM
ZNS
.......................................................
19
2.3.4. REAKTIVIERUNG
VON
EFFEKTOR-T-ZELLEN
IM
ZNS
.........................................
21
2.4.
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
23
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
25
3.1.
MATERIALIEN
25
3.1.1.
PUFFER
......................................................................................................
25
3.1.2.
PRIMER
.....................................................................................................26
3.1.3.
ANTIKOERPER
................................................................................................
27
3.2.
METHODEN
28
3.2.2.
KULTIVIERUNG
VON
T-ZELLEN
........................................................................
29
3.2.3.
ENZYMGEKOPPELTER
IMMUNADSORPTIONSTEST
(ELISA)
...............................
30
3.2.4.
ZELLQUANTIFIZIERUNG
IN
GEWEBEPROBEN
....................................................
31
3.2.5.
ANTIKOERPER-FAERBUNG
FUER
DIE
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
..................................
33
3.2.6.
UNTERSUCHUNG
DER
EXPRESSION
VON
OBERFLAECHENANTIGENEN
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
(FACS)
...................................................................................................
33
3.2.7.
QUANTITATIVE
GENEXPRESSIONSANALYSE
....................................................
33
3.3.
TECHNIK
FUER
DIE
2-PHOTONEN-MIKROSKOPIE
35
3.4.
TIEREXPERIMENTELLE
TECHNIKEN
35
3.4.1.
VERSUCHSTIERHALTUNG
35
3.4.2.
ALLGEMEINE
PROTOKOLLE
FUER
DIE
TIERVERSUCHE
......................................
36
3.4.3.
ORALE
VERABREICHUNG
VON
WIRKSTOFFEN
...............................................
37
3.4.4.
PRAEPARATIONSTECHNIKEN
FUER
DIE
INTRAVITALMIKROSKOPIE
.........................
37
4.
ERGEBNISSE
43
4.1.
FLUORESZENZ-MARKIERTE
T-ZELLLINIEN
43
4.2.
AUFBAU
EINES
SYSTEMS
FUER
DIE
INTRAVITALE
MIKROSKOPIE
VON
RATTEN
UND
MAEUSEN
44
4.2.1.
PRAEPARATION,
FIXIERUNG
UND
ANAESTHESIE-SYSTEM
..............................
44
4.2.2.
MODIFIZIERUNG
DES
MIKROSKOPS
ZUR
DETEKTION
ZUSAETZLICHER
FLUORESZENZKANAELE
........................................................46
4.2.3.
ENTWICKLUNG
EINER
COMPUTERGESTEUERTEN
MIKROSKOPBUEHNE
................................................................................
48
4.3.
BEWEGUNG
VON
T-ZELLEN
INNERHALB
MENINGEALER
BLUTGEFAESSE
48
4.3.1.
ANALYSE
DER
ZELLULAEREN
BEWEGUNGSPARAMETER
..................................
52
4.3.2.
FUNKTIONELLE
UNTERSUCHUNG
DER
INTRALUMINALEN
MIGRATION
...........................................................................................
56
4.4.
BEWEGUNG
VON
T-ZELLEN
IN
BLUTGEFAESSEN
AUSSERHALB
DES
ZNS
58
4.5.
EXTRAVASATION
VON
EFFEKTOR-T-ZELLEN
59
4.6.
AKTIVIERUNG
VON
EFFEKTOR-T-ZELLEN
IN
DEN
MENINGEN
62
4.6.1.
INTERAKTION
VON
T-ZELLEN
MIT
MENINGEALEN
APCS
.............................
64
4.6.2.
INTRATHEKALER
TRANSFER
VON
OVA-BELADENEN
APCS
..........................
66
4.7.
BEGINN
DER
T-ZELL-INFILTRATION
IN
DER
TEAE
67
4.8.
BEEINFLUSSUNG
DER
MIGRATION
ENZEPHALITOGENER
T-ZELLEN
DURCH
FTY720
71
5.
DISKUSSION
81
5.1.
TECHNISCHE
VERAENDERUNGEN
DES
INTRAVITALMIKROSKOPIE
ARBEITSPLATZES
UND
DER
MIKROSKOPIE-TECHNIK
81
5.2.
VERLAUF
DER
INFILTRATION
DES
RUECKENMARKS
DURC
ENZEPHALITOGENE
T-ZELLEN
IN
DER
FRUEHPHASE
DER
TEAE
82
5.3.
MIGRATION
VON
EFFEKTOR-T-ZELLEN
IN
MENINGEALEN
POSTKAPILLAEREN
VENOLEN
83
5.4.
MIGRATION
VON
EFFEKTOR-T-ZELLEN
IN
DEN
BLUTGEFAESSEN
AUSSERHALB
DES
ZNS
86
5.5.
EXTRAVASATION
VON
EFFEKTOR-T-ZELLEN
IN
DEN
MENINGEN
87
5.6.
KONTAKTE
ZWISCHEN
EFFEKTOR-T-ZELLEN
UND
MENINGEALEN
APCS
88
5.7.
EINFLUSS
VON
FTY720
AUF
DIE
MIGRATION
VON
EFFEKTOR-T-ZELLEN
IN
DER
TEAE
90
6.
LITERATURVERZEICHNIS
95
7.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
105
8.
QUELLENNACHWEIS
109
9.
ANHANG
111
9.1.
TECHNISCHE
PLANUNGEN
111
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