Untersuchungen zum Differenzierungszustand von Sertoli Zellen in Mäusen mit Sertoli Zellspezifischem Knockout des Connexin 43-Gens (SCCx43KO):
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| Published: |
Gießen
VVB Laufersweiler Verlag
2011
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VEROEFFENTLICHUNGEN V
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VI
ABBILDUNGSVERZEICHNIS IX
TABELLENVERZEICHNIS XI
1 EINLEITUNG UND ZIELE DER ARBEIT 1
2 LITERATURUEBERSICHT 4
2.1 FUNKTIONELLE HISTOLOGIE DES HODENS 4
2.1.1 KEIMZELLEN 4
2.1.1.1 URSPRUNG 5
2.1.1.2 SPERMATOGENESE 5
2.1.1.3 KINETIK DER SPERMATOGENESE 7
2.1.1.4 HORMONELLE REGULATION DER SPERMATOGENESE 9
2.1.2 SERTOLI ZELLEN 10
2.1.2.1 URSPRUNG 10
2.1.2.2 FUNKTIONEN UND EIGENSCHANEN 10
2.1.2.3 PROLIFERATION UND DIFFERENZIERUNG 13
2.1.2.4 REGULATION DER PROLIFERATION UND DIFFERENZIERUNG 14
2.1.2.5 BIOCHEMISCHE DIFFERENZIERUNGSMARKER UND ZEIL-SPEZIFISCHE MARKER
14
2.1.2.6 VERAENDERTE DIFFERENZIERUNG BEI TESTIKULAEREN STOERUNGEN 19
2.2 GAP JUNCTIONS UND CONNEXINE 21
2.2.1 AUFBAU UND FUNKTIONEN VON GAP JUNCTION-KANAELEN 21
2.2.2 CONNEXINE - DIE PROTEINE DER GAP JUNCTIONS 23
2.2.2.1 NOMENKLATUR 23
2.2.2.2 PROTEINSTRUKTUR UND LOKALISATION 24
2.2.2.3 GENSTRUKTUR UND EXPRESSION 25
2.2.3 PERMEABILITAET VON GAP JUNCTION-KANAELEN 26
2.2.4 LEBENSZYKLUS VON GAP JUNCTIONS 27
2.2.5 GAP JUNCTION- UND CONNEXIN-EXPRESSION IM HODEN 29
2.2.6 CONNEXIN 43 IM KEIMEPITHEL VERSCHIEDENER SPEZIES 31
2.2.7 CONNEXIN 43 UND TRANSGENE MAUSMODELLE 32
2.2.7.1 KONSTITUTIVE CONNEXIN 43-KNOCKOUT-MAEUSE 32
2.2.7.2 KONSTITUTIVE CONNEXIN 43-KNOCKIN-MAEUSE 34
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/1013649850
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
2.2.7.3 KONDITIONALE (ZEIL-SPEZIFISCHE) CONNEXIN 43-KNOCKOUT-MAEUSE 34
2.2.8 ROLLE UND FUNKTIONEN VON CONNEXIN 43 IM KEIMEPITHEL 38
3 MATERIAL UND METHODEN 41
3.1 VERSUCHSDESIGN UND VERSUCHSTIERE 41
3.1.1 VERSUCHSTIERHALTUNG 41
3.1.2 GENERIERUNG DER SCCX43KO-MAEUSE 41
3.1.3 PCR-GENOTYPISIERUNG 42
3.1.4 BESTAETIGUNG DER PCR-GENOTYPLSIERUNGSERGEBNISSE 45
3.1.5 PROBENGEWINNUNG 46
3.1.6 VERSUCHSDESIGN UND EINGESETZTE MAUSHODEN 46
3.2 HERSTELLUNG VON PARAFFINSCHNITTEN 49
3.2.1 FIXIERUNG IN BOUIN ODER 10 % NBF 49
3.2.2 ENTWAESSERUNG UND EINBETTUNG 50
3.2.3 BESCHICKUNG DER OBJEKTTRAEGER MIT APES 50
3.2.4 MIKROTOMIE 51
3.3 HAEMATOXYLIN-EOSIN-FAERBUNG 51
3.4 IMMUNHISTOCHEMIE 52
3.4.1 ALLGEMEINE VORBEMERKUNG 52
3.4.2 VIMENTIN 53
3.4.3 ANTI-MUELLER-HORMON 55
3.4.4 ANDROGENREZEPTOR 56
3.4.5 GATA-1 56
3.4.6 3SS-HYDROXYSTEROID-DEHYDROGENASE 56
3.4.7 KI-67 57
3.4.8 SS-GALAKTOSIDASE 57
3.4.9 MIKROSKOPISCHE AUSWERTUNG UND DOKUMENTATION 58
3.5 TUNEL-FAERBUNG 58
3.6 EXTRAKTION UND ISOLATION VON RNA UND PROTEINEN AUS GEFRIERMATERIAL
... 60
3.6.1 ALLGEMEINE VORBEMERKUNG UND GEFRIERFIXIERUNG 60
3.6.2 EXTRAKTION UND ISOLATION MITTELS TRIZOL-REAGENZ 60
3.7 DNASE-VERDAU UND CDNA-SYNTHESE (RT-PCR) 64
IMAGE 3
3.7.1 ALLGEMEINE VORBEMERKUNG 64
3.7.2 DNASE-VERDAU UND CDNA-SYNTHESE 64
3.7.3 UEBERPRUEFUNG DES DNASE-VERDAUS UND DER RT-PCR 66
3.7.4 AUFREINIGUNG DER CDNA 67
3.8 WESTERN BLOT-ANALYSE 68
3.8.1 ALLGEMEINE VORBEMERKUNG 68
3.8.2 PROBENVORBEREITUNG 69
3.8.3 GELELEKTROPHORESE 69
3.8.4 ELEKTROBLOTTING 70
3.8.5 NACHWEISREAKTION FUER ANTI-MUELLER-HORMON UND GATA-1 70
3.8.6 DOKUMENTATION 72
3.9 REAL-TIME PCR 72
3.9.1 ALLGEMEINE VORBEMERKUNG 72
3.9.2 GENERIERUNG DER PRIMER 73
3.9.3 BESTIMMUNG DER EXAKTEN EFFIZIENZEN UND SCHMELZKURVENANALYSE 73
3.9.4 GENEXPRESSIONSVERGLEICH FUER ANTI-MUELLER-HORMON UND GATA-1 75
3.9.5 SEQUENZIERUNG DER PCR-PRODUKTE 76
3.9.6 STATISTISCHE ANALYSE 78
3.10 SEMIDUENNSCHNITTE UND TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE 79
4 ERGEBNISSE 81
4.1 DIFFERENZIERUNGSZUSTAND VON SERTOLI ZELLEN IN SCCX43KO-MAEUSEN 81
4.1.1 DIFFERENZIERUNG AUF BIOCHEMISCHER EBENE 81
4.1.1.1 VIMENTIN S1
4.1.1.2 ANTI-MUELLER-HORMON 82
4.1.1.3 ANDROGENREZEPTOR. 84
4.1.1.4 GATA-1 86
4.1.2 DIFFERENZIERUNG AUF MORPHOLOGISCHER EBENE 88
4.2 INTRATUBULAERE ZELLCLUSTER IN SCCX43KO-MAEUSEN 89
4.2.1 ZUSAMMENSETZUNG UND DIFFERENZIERUNG 89
4.2.2 APOPTOSE 91
4.2.3 ZEITPUNKT DES AUFTRETENS 92
5 DISKUSSION 93
IMAGE 4
6 ZUSAMMENFASSUNG 102
7 SUMMARY 105
8 LITERATURVERZEICHNIS 107
9 ANHANG 127
9.1 STOFFE UND REAGENZIEN 127
9.2 ANTIKOERPER 129
9.3 HERGESTELLTE PUFFER UND LOESUNGEN 130
9.4 GERAETE 133
9.5 GERAETEZUBEHOER UND SONSTIGES MATERIAL 134
9.6 SOFTWARE 134
ERKLAERUNG 135
DANKSAGUNG 136
IV
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| spelling | Weider, Karola Verfasser (DE-588)1017024871 aut Untersuchungen zum Differenzierungszustand von Sertoli Zellen in Mäusen mit Sertoli Zellspezifischem Knockout des Connexin 43-Gens (SCCx43KO) Karola Weider 1. Aufl. Gießen VVB Laufersweiler Verlag 2011 XI, 136 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Edition Scientifique Zugl.: Gießen, Univ., Diss., 2011 sertoli cells cabt transgenic animals cabt knockout mice spermatogenesis cabt testicles cabt PCR cabt cell differentiation cabt proliferation cabt Gap junction (DE-588)4197886-9 gnd rswk-swf Transgene Tiere (DE-588)4279021-9 gnd rswk-swf Spermatogenese (DE-588)4135384-5 gnd rswk-swf Maus (DE-588)4169148-9 gnd rswk-swf Connexin (DE-588)4307065-6 gnd rswk-swf Sertoli-Zelle (DE-588)4181057-0 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Maus (DE-588)4169148-9 s Transgene Tiere (DE-588)4279021-9 s Spermatogenese (DE-588)4135384-5 s Sertoli-Zelle (DE-588)4181057-0 s Gap junction (DE-588)4197886-9 s Connexin (DE-588)4307065-6 s DE-604 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=024545216&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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