Molekularbiologische Untersuchungen zum Östrogenrezeptor Beta: die Expression untranslatierter Exons in zellulären Systemen
Gespeichert in:
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2010 [erschienen] 2011
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1
EINLEITUNG
..............................................................................
1
1.1
EINFUEHRUNG
IN
DIE
OESTROGENE
........................................................................
1
1.2
STRUKTUR
DER
OESTROGENREZEPTOREN
.................................................................
1
1.3
WIRKMECHANISMUS
DER
OESTROGENREZEPTOREN
..............................................
3
1.3.1
KLASSISCHER
MECHANISMUS
................................................................
3
1.3.2
SP1
MECHANISMUS
............................................................................
4
1.3.3
AP-1
MECHANISMUS
............................................................................
5
1.3.4
NF
K
B
HEMMUNG
................................................................................
5
1.4
PHYSIOLOGISCHE
EFFEKTE
DURCH
OESTROGENREZEPTOREN
..................................
6
1.4.1
WEIBLICHE
FORTPFLANZUNGSORGANE
......................................................
6
1.4.2
MAENNLICHE
FORTPFLANZUNGSORGANE
......................................................
7
1.4.3
SKELETTSYSTEM
....................................................................................
8
1.4.4
KARDIOVASKULAERES
SYSTEM
.................................................................
8
1.5
DAS
OESTROGENREZEPTOR
SS
GEN
........................................................................
9
1.6
DAS
SYSTEM
DER
UNTRANSLATIERTEN
EXONS
DES
OESTROGENREZEPTOR
SS
...........
11
1.7
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
...................................................................................
12
2
MATERIAL
UND
METHODEN
......................................................
14
2.1
MATERIAL
.........................................................................................................
14
2.1.1
LOESUNGEN
UND
PUFFER
.......................................................................
14
2.1.2
OLIGONUKLEOTIDE
(PRIMER)
..................................................................
14
2.1.3
ZELLLINIEN
............................................................................................
16
2.2
METHODEN
.......................................................................................................
16
2.2.1
ZELLKULTUR
............................................................................................
16
2.2.2
DIFFERENZIERUNG
DER
MSC
...................................................................
17
2.2.3
ISOLIERUNG
VON
TOTALER
RNA
.................................................................
17
2.2.4
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
DER
RNA
................................................
18
2.2.5
ISOLIERUNG
VON
POLYA+
RNA
................................................................
19
2.2.6
REVERSE
TRANSKRIPTION
DER
RNA
.........................................................
19
2.2.7
POLYMERASE
KETTENREAKTION
(PCR)
....................................................
20
2.2.8
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
...............................................................
21
2.2.9
SEQUENZIERUNG
...................................................................................
21
3
ERGEBNISSE
.............................................................................23
3.1
DIE
GENOMISCHE
ORGANISATION
DES
ERSS
....................................................
23
3.2
NACHWEIS
DER
EXPRESSION
DES
ERSS
...........................................................
25
3.2.1
ETABLIERUNG
EINER
PCR
ZUM
NACHWEIS
DES
ERSS
...............................
25
3.2.2
EXPRESSION
DES
ERSS
IN
DEN
ZELLLINIEN
...............................................
27
3.3
NACHWEIS
DER
EXPRESSION
UNTRANSLATIERTER
EXONS
.....................................
28
3.3.1
ETABLIERUNG
EINER
PCR
ZUM
NACHWEIS
VON
UNTRANSLATIERTEN
EXONS
IM
ZELLSYSTEM
SK-N-SH
.....................................................................
28
3.2.2
WEITERE
UNTERSUCHUNGEN
DES
ZELLSYSTEMS
SK-N-SH
AUF
UNTRANSLATIERTE
EXONS
.........................................................................
30
3.3.3
KONTROLL-PCR
FUER
BISHER
NICHT
NACHWEISBARE
UNTRANSLATIERTE
EXONS.
..31
3.3.4
UNTERSUCHUNG
VON
HFOB
AUF
UNTRANSLATIERTE
EXONS
.........................
33
3.3.5
UNTERSUCHUNG
VON
PRIMAEREN
MSC
AUF
DIE
EXPRESSION
UNTRANSLATIERTER
EXONS
.......................................................................
36
3.3.6
UNTERSUCHUNG
VON
T/C28A2
AUF
DIE
EXPRESSION
UNTRANSLATIERTER
EXONS
.......................................................................
39
3.4
EXPRESSION
VON
ERSS
WAEHREND
DER
DIFFERENZIERUNG
VON
MSC
...................
39
3.4.1
OSTEOGENE
DIFFERENZIERUNG
...............................................................
39
3.4.2
ADIPOGENE
DIFFERENZIERUNG
...............................................................
40
4
DISKUSSION
.............................................................................
42
4.1
METHODISCHE
UEBERLEGUNGEN
.........................................................................
42
4.2
NACHWEIS
DES
ERSS
........................................................................................
43
4.3
NACHWEIS
UNTRANSLATIERTER
EXONS
DES
ERSS
.................................................
44
4.3.1
SK-N-SH
............................................................................................
44
4.3.2
HFOB
.................................................................................................
45
4.3.3
MSC
...................................................................................................
46
4.3.4
T/C28A2
.............................................................................................
47
4.4
NACHWEIS
DES
ERSS
WAEHREND
DER
DIFFERENZIERUNG
MESENCHYMALER
STAMMZELLEN
..................................................................................................
48
5
ZUSAMMENFASSUNG
..............................................................50
6
ABKUERZUNGEN
.........................................................................52
7
LITERATURVERZEICHNIS
.............................................................53
|
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