Immunoanalytische Detektion von Beta2-Glykoprotein I-Autoantikörpern beim Antiphospholipid-Syndrom:
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|---|---|
| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
München
Verl. Dr. Hut
2011
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| Edition: | 1. Aufl. |
| Series: | Analytische Chemie
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| ISBN: | 9783868537840 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG UND PROBLEMSTELLUNG 1
2 THEORIE 4
2.1 ANTIPHOSPHOLIPID-SYNDROM 4
2.1.1 KRANKHEITSBILD 4
2.1.2 THERAPIE 8
2.2 DIAGNOSTIK DER ANTIPHOSPHOLIPID-ANTIKOERPER 8
2.2.1 FUNKTION UND STOERUNGEN DES IMMUNSYSTEMS 8
2.2.2 HETEROGENITAET DER ANTIPHOSPHOLIPID-ANTIKOERPER 10
2.2.3 DIAGNOSTISCHE UND PATHOLOGISCHE RELEVANZ 12
2.3 APS-LABORANALYTIK 12
2.3.1 LUPUS-ANTIKOAGULANS 13
2.3.2 /J2-GPI-ELISA 14
2.3.3 CARDIOLIPIN-ELISA 15
2.3.4 ROC-KURVENANALYSE 16
2.4 BIOSENSORIK 18
2.4.1 DEFINITION UND EINTEILUNG DER BIOSENSOREN 18
2.4.2 OBERFLAECHENPLASMONENRESONANZ (SPR)-BIOSENSOREN 19 2.4.3 AUFBAU DES
BIACORE X-SPR-BIOSENSORS 21
2.4.4 SELBSTORGANISIERENDE MONOLAGEN 22
2.4.5 SNAP-TAG-FUSIONSPROTEINE 24
2.4.6 AUSWERTUNG VON SPR-SENSORGRAMMEN 26
2.5 PROTEIN-MIKROARRAY 28
2.5.1 GRUNDLAGEN DER MIKROARRAY-TECHNOLOGIE 29
2.5.2 HERSTELLUNG DES MIKROARRAY-CHIPS 30
2.5.3 MUNICH CHIP READER - MCR 3 32
3 ERGEBNISSE UND DISKUSSION 34
3.1 UNTERSUCHUNG VON VERSCHIEDENEN /32-GPI-PRAEPARATIONEN 35
3.1.1 GELELEKTROPHORESE UND WESTERN BLOT 36
3.1.2 ELISA-MESSUNGEN 37
3.1.3 SPR-BIOSENSOR-MESSUNGEN 39
3.1.4 VERHALTEN DER ANTIGENE GEGENUEBER DEN STANDARDS (HCAL/EY2C9) 45
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/101033896X
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
3.1.5 ZUSAMMENFASSUNG 47
3.2 UNTERSUCHUNG VON /32-GPI-ABGELEITETEN PEPTIDFRAGMENTEN 50 3.2.1
REKOMBINANTE EXPRESSION VON ANTIGENFRAGMENTEN 52 3.2.2 CHARAKTERISIERUNG
59
3.2.3 BIOSENSOR-MESSUNGEN 60
3.2.4 ELISA-MESSUNGEN 65
3.2.5 ZUSAMMENFASSUNG 68
3.3 MIKROARRAY-MESSUNGEN 71
3.3.1 AUFBAU DER MIKROARRAY-CHIPOBERFLAECHEN 71
3.3.2 OPTIMIERUNG DER SPOTTING- UND INKUBATIONSBEDINGUNGEN 75 3.3.3
OPTIMIERUNG DER ABLAUFSTEUERUNG 80
3.3.4 SENSITIVITAET UND NACHWEISGRENZE DER ANTIGEN-MIKROARRAYS . . .. 81
3.3.5 MESSUNG VON KLINISCHEN SERUMPROBEN 86
3.3.6 ZUSAMMENFASSUNG 90
3.4 METHODENVERGLEICH 91
4 ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK 92
5 EXPERIMENTELLER TEIL 94
5.1 GERAETE UND ZUBEHOER 94
5.1.1 GERAETE UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 94
5.2 SOFTWARE 95
5.3 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 96
5.3.1 CHEMIKALIEN 96
5.3.2 ENZYME UND ZELLEN 98
5.3.3 /32-GLYCOPROTEIN I-PRAEPARATIONEN 99
5.3.4 WEITERE ANTIGENE 99
5.3.5 ANTIKOERPER 100
5.3.6 PATIENTENPROBEN 100
5.4 PUFFER, LOESUNGEN UND KULTURMEDIEN 102
5.5 METHODEN 106
5.5.1 KLONIERUNG VON SNAP-TAG-FUSIONSPROTEINEN 106
5.5.2 ALLGEMEINE METHODEN DER BIOCHEMIE 109
5.5.3 BIOSENSORIK 113
5.5.4 STANDARDPROZEDUREN MCR 114
6 ABKUERZUNGEN 118
7 ANHANG 121
LITERATURVERZEICHNIS 130
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