In-vitro-Expressions-Analyse von Transkriptionsfaktoren muriner Astrozyten und Mikrogliazellen nach Infektion mit dem Theiler-Enzephalomyelitis-Virus:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Gießen
DVG-Service
2009
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Nebentitel: In vitro analysis of the expression of transcription factors of murine astrocytes and microglia after infection with Theiler's murine encephalomyelitis virus |
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| adam_text | INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS KAPITEL 1 EINLEITUNG 1 KAPITEL 2
LITERATURUEBERSICHT 3 2.1 EXPERIMENTELL INDUZIERTE UND SPONTAN
AUFTRETENDE DEMYELINISIERENDE ERKRANKUNGEN 3 2.1.1
STAUPEVIRUSENZEPHALITIS DES HUNDES 4 2.1.2 EXPERIMENTELLE AUTOIMMUNE
ENZEPHALOMYELITIS 5 2.1.3 MULTIPLE SKLEROSE 6 2.1.4
THEILERVIAIS-ENZEPHALOMYELITIS 10 2.2 MATRIX-METALLOPROTEINASEN 18 2.3
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 20 2.3.1 DEFINITION UND FUNKTION 20 2.3.2 DIE
ETS-TRANSKRIPTIONSFAKTORFAMILIE 25 2.3.3 DIE AKTIVATOR PROTEIN
(AP)-I-TRANSKRIPTIONSFAKTORFAMILIE 27 2.3.4 DIE
NF-KB/REL-TRANSKRIPTIONSFAKTORFAMILIE 30 KAPITEL 3 MATERIAL UND METHODEN
35 3.1 ALLGEMEINER VERSUCHSAUFBAU 35 3.2 MAEUSE 35 3.3 ZELLKULTURELLE
UNTERSUCHUNGEN 36 3.3.1 HERSTELLUNG EINES THEILERVIRUSPOOLS ZUR
INFEKTION DER PRIMAEREN GEHIRNZELLEN 36 3.3.1.1 KULTUR UND PASSAGE DES
THEILERVIRUS IN BHK-21-ZELLEN 36 3.3.1.2 PLAQUETEST 36 3.3.1.3
INAKTIVIERUNG DES TMEV MITTELS UV-LICHT-BESTRAHLUNG 37 3.3.2 ISOLIERUNG
DER MURINEN GEHIRNZELLEN 38 3.3.2.1 PROTOKOLL ZUR ISOLIERUNG DER MURINEN
GEHIRNZELLEN 38 BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/995700761
DIGITALISIERT DURCH INHALTSVERZEICHNIS 3.3.3 AUFTRENNUNG VON
MIKROGLIA/MAKROPHAGEN, OLIGODEN- DROZYTENVORLAEUIERZELLEN UND ASTROZYTEN
40 3.3.3.1 PROTOKOLL ZUR AUFREINIGUNG DER MIKROGLIA/MAKROPHAGEN 40
3.3.3.2 PROTOKOLL ZUR BESEITIGUNG DER OLIGODENDRO- ZYTENVORLAEUFERZELLEN
41 3.3.3.3 PROTOKOLL ZUR AUFREINIGUNG DER ASTROZYTEN 42 3.3.4 KOKULTUREN
VON ASTROZYTEN UND MIKROGLIA/MAKROPHAGEN IM TRANSWELLSYSTEM 42 3.3.5
INFEKTION DER GEHIRNZELLKULTUREN 43 3.3.6 IMMUNFLUORESZENZ 43 3.3.6.1
PRIMAERANTIKOERPER/PROTEINE 43 3.3.6.2 DARSTELLUNG DER
MIKROGLIA/MAKROPHAGEN MITTELS DIL-AC-LDI 45 3.3.6.3 NACHWEIS DER
ANTIGENE TMEV, GFAP, IBA1 UND CLEAVED CASPASE-3 45 3.3.6.4 FAERBUNG DER
ZELLKERNE 45 3.3.6.5 NEGATIVKONTROLLEN 46 3.3.6.6 AUSWERTUNG UND
DOKUMENTATION DER ERGEBNISSE 46 3.3.7 BRDU-TEST 46 3.4
MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 47 3.4.1 RNS-ISOLIERUNG UND
DNASE-BEHANDLUNG 47 3.4.2 REVERSE TRANSKRIPTION 50 3.4.3 PRIMERAUSWAHL
51 3.4.4 KONVENTIONELLE PCR 51 3.4.5 GELELEKTROPHORESE 52 3.4.6
PCR-KONTROLLEN 53 3.4.7 HERSTELLUNG DER STANDARDREIHEN 53 3.4.8
QUANTITATIVE PCR 54 3.4.9 TRANSFEKTION VON PRIMAEREN ASTROZYTEN MIT SIRNS
56 3.5 STATISTISCHE AUSWERTUNG 57 4.4.5 QUANTIFIZIERUNG VON
TMEV-MINUS-STRANG-RNS IN MIKROGLIA 116 INHALTSVERZEICHNIS KAPITEL 4
ERGEBNISSE 59 4.1 HERSTELLUNG EINES THEILERVIRUSPOOLS 59 4.1.1
VERMEHRUNG 59 4.1.2 TITRATION 60 4.1.3 NACHWEIS 60 4.2 HERSTELLUNG
PRIMAERER GEHIRNZELLKULTUREN 61 4.2.1 HERSTELLUNG EINER MISCHKULTUR 61
4.2.2 HERSTELLUNG DER PRIMAEREN ASTROZYTEN- UND MIKROGLIAKULTUREN 62 4.3
INFEKTION DER PRIMAEREN ASTROZYTEN- UND MIKROGLIAKULTUREN 63 4.3.1
NACHWEIS VON TMEV-ANTIGEN UND INFEKTIOESEM VIRUS IN DER MONOKULTUR 65
4.3.2 NACHWEIS VON TMEV-ANTIGEN UND INFEKTIOESEM VIRUS IN DER KOKULTUR 70
4.3.3 ZELLZAHLEN DER PRIMAEREN ASTROZYTEN UND MIKROGLIAZELLEN 72 4.3.4
BRDU-TEST VON PRIMAEREN ASTROZYTEN 74 4.3.5 APOPTOSERATE VON PRIMAEREN
ASTROZYTEN 78 4.4 MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 81 4.4.1 RT-QPCR
81 4.4.1.1 RT-QPCR DER ASTROZYTEN IN DER MONOKULTUR 82 4.4.1.2 RT-QPCR
DER MIKROGLIA IN DER MONOKULTUR 88 4.4.1.3 RT-QPCR DER ASTROZYTEN IN DER
KOKULTUR 93 4.4.1.4 RT-QPCR DER MIKROGLIA IN DER KOKULTUR 98 4.4.2
SPEARMANS-RANGKORRELATIONSKOEFFIZIENTEN 103 4.4.2.1
SPEARMANS-RANGKORRELATIONSKOEFFIZIENTEN IN DER MONOKULTUR 103 4.4.2.2
SPEARMANS-RANGKORRELATIONSKOEFFIZIENTEN IN DER KOKULTUR 106 4.4.3
VERGLEICH DER GENEXPRESSION ZWISCHEN ASTROZYTEN UND MIKROGLIA 109 4.4.4
RT-QPCR DER MIT SIRNS BEHANDELTEN ASTROZYTEN 112 174 IV
INHALTSVERZEICHNIS KAPITEL 5 DISKUSSION 119 5.1 GERINGE REPLIKATION DES
THEILERVIRUS IN MIKROGLIA 120 5.2 PROLIFERATIONSHEMMUNG UND
APOPTOSE/NEKROSE DURCH TMEV IN ASTROZYTEN 122 5.3 UNTERSCHIEDE ZWISCHEN
NICHT INFIZIERTEN ASTROZYTEN UND MIKROGLIA IN DER BASALEN GENEXPRESSION
VON TRANSKRIPTIONSFAKTOREN, MMPS UND ZYTOKINEN 123 5.4 BEEINFLUSSUNG DER
GENEXPRESSION VON TRANSKRIPTIONS- FAKTOREN, ZYTOKINEN UND MMPS DURCH DIE
TMEV-INFEKTION 124 5.4.1 DIE ROLLE DER TRANSKRIPTIONSFAKTOREN UND
ZYTOKINE IM VERLAUF DER TMEV-INFEKTION 125 5.4.1.1 BEDEUTUNG VON P50 FUER
DIE TMEV-INDUZIERTE TRANSKRIPTION VON TNF 125 5.4.1.2 EXPRESSION VON
MAXIM VERLAUF DER TME 127 5.4.1.3 BEDEUTUNG VON ETS-1 UND P53 FUER DIE
PATHOGENESE DER TME 129 5.4.1.4 INTERAKTIONEN DER UNTERSUCHTEN
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN 129 5.4.2 DIE ROLLE DER MMPS IM VERLAUF DER
TMEV-INFEKTION 132 5.5 SCHLUSSBETRACHTUNG 136 KAPITEL 6 ZUSAMMENFASSUNG
139 KAPITEL 7 SUMMARY 143 KAPITEL 8 LITERATURVERZEICHNIS 147 KAPITEL 9
ANHANG 165 9.1 BEZUGSQUELLEN FUER REAGENZIEN UND EINMALARTIKEL 165 9.2
BEZUGSQUELLEN FUER GERAETE 170 9.3 LOESUNGEN UND PUFFER 174 9.3.1 LOESUNGEN
UND PUFFER IN DER MOLEKULARBIOLOGIE 9.5 ERKLAERUNG 185 INHALTSVERZEICHNIS
9.3.2 MEDIEN UND PUFFER IN DER ZELLKULTUR 175 9.4 DANKSAGUNG 184
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