Etablierung eines In-vitro-Modells des caninen malignen Hämangioendothelioms:
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| Published: |
Berlin
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2009
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2.1.5 2.1.6 2.1.7 2.2 2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.2.4 2.2.5 2.3 2.3.1 2.3.2
2.3.3 2.3.4 2.3.5 2.3.6 2.3.7 2.3.8 2.4 2.4.1 2.4.2 EINLEITUNG UND ZIEL
LITERATURUEBERSICHT AUFBAU UND ENTSTEHUNG DER BLUTGEFAESSE DAS
BLUTGEFAESSSYSTEM ENDOTHELZELLEN VASKULOGENESE ANGIOGENESE INTUSSUSZEPTION
PHYSIOLOGISCHE BLUTGEFAESSBILDUNG PATHOPHYSIOLOGISCHE UND PATHOLOGISCHE
ANGIOGENESE DIE EX VIVO KULTIVIERUNG VON ENDOTHELZELLEN
EXPLANTAT-KULTUREN VON ENDOTHELZELLEN IN VITRO KULTUR VON ENDOTHELZELLEN
DIE IN VITRO ANGIOGENESE ZWEIDIMENSIONALE MODELLE DER IN VITRO
ANGIOGENESE DREIDIMENSIONALE MODELLE DER IN VITRO ANGIOGENESE DAS
MALIGNE HAEMANGIOENDOTHELIOM BETROFFENE TIERARTEN RASSEDISPOSITION BEIM
HUND ALTERSVERTEILUNG DER ERKRANKTEN TIERE GESCHLECHTERVERTEILUNG DER
PATIENTEN GROESSE UND GEWICHT DER PATIENTEN LOKALISATIO BIBLIOGRAFISCHE
INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/998068160 DIGITALISIERT DURCH
INHALTSVERZEICHNIS 3 MATERIAL 20 3.1 ZELLEN 20 3.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN
20 3.3 GERAETE 21 3.4 LOESUNGEN FUER DIE ZELLKULTUR 22 3.5 VERWENDETE
KULTURMEDIEN 23 3.5.1 ZUSAMMENSETZUNG DES ERHALTUNGSMEDIUMS (DMEM+) 23
3.5.2 ZUSAMMENSETZUNG DES SELEKTIVMEDIUMS (P O ) 23 3.6 EINFRIERMEDIUM
23 3.7 MATERIALIEN FUER DIE ZELLISOLIERUNG 24 3.7.1 ENZYMLOESUNG FUER DIE
ZELLISOLIERUNG 24 3.7.2 EDELSTAHLSIEBE 24 3.8 NACHWEIS DER BINDUNG
FITC-KONJUGIERTER-LEKTINE 24 3.9 ANTIKOERPER, IMMUNREAGENZIEN UND
REAKTIONS-KIT 25 3.10 TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPIE 26 3.10.1
VERBRAUCHSMATERIALIEN 26 3.10.2 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 26 4 METHODEN
27 4.1 HERKUNFT DER ZELLEN 27 4.1.1 ENTNAHME UND TRANSPORT DER ORGANE
FUER DIE ZELLISOLIERUNG 27 4.2 ZELLKULTUR 28 4.2.1 AUFBEREITUNG DER
PROBEN UND ISOLIERUNG DER ZELLEN 28 4.2.2 KULTIVIERUNG DER ZELLEN 29
4.2.3 SUBKULTIVIERUNG 29 4.2.4 KRYOKONSERVIERUNG 29 4.2.5 AUFTAUEN DER
ZELLEN 30 4.3 ZELLZAEHLUNG NACH ABLOESUNG DER IN VITRO KULTIVIERTEN ZELLEN
30 4.4 ZELLZAEHLUNG IN VITRO OHNE ABLOESUNG DER ZELLEN 30 4.5
PHASENKONTRASTMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNGEN IN VITRO KULTIVIERTER ZELLEN
31 4.6 TRANSMISSIONSELEKTRONENMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNGEN IN
INHALTSVERZEICHNIS 5 ERGEBNISSE 36 5.1 IN VITRO KULTIVIERUNG CANINER
ZELLEN 36 5.1.1 MORPHOLOGIE UND PROLIFERATION DER ZELLEN NACH DER
ISOLIERUNG 36 5.1.1.1 ZELLEN AUS MALIGNEN HAEMANGIOENDOTHELIOMEN 36
5.1.1.2 ZELLEN AUS EINER UNVERAENDERTEN MILZ 39 5.1.2 AUSBILDUNG
ANGIOGENER STUKTUREN 41 5.1.2.1 ZELLEN DES MALIGNEN HAEMANGIOENDOTHELIOMS
41 5.1.2.2 ZELLEN AUS DER GESUNDEN MILZ EINES HUNDES 44 5.1.3 IN VITRO
PROLIFERATIONSVERHALTEN 46 5.1.4 MAXIMALE KULTIVIERUNGSDAUER 47 5.2
IMMUNZYTOCHEMISCHE UNTERSUCHUNGEN 48 5.2.1 IMMUNZYTOCHEMISCHE MARKIERUNG
MIT ANTI-VWF (VON WILLEBRAND FAKTOR) 48 5.2.1.1 KONTROLLEN 50 5.2.2
IMMUNZYTOCHEMISCHE MARKIERUNG MIT ANTI-CD31 (PLATELET ENDOTHELIAL CELL
ADHESION MOLECULE, PECAM-1) 51 5.2.2.1 KONTROLLEN 53 5.2.3
IMMUNZYTOCHEMISCHE MARKIERUNG MIT ANTI-TIE-2 (H-176) 54 5.2.3.1
KONTROLLEN 56 5.2.4 IMMUNZYTOCHEMISCHE MARKIERUNG MIT ANTI-C051/61
(INTEGRIN AVSS3, VITRONECTIN-REZEPTOR) 57 5.2.4.1 KONTROLLEN 59 5.2.5
TABELLARISCHE UEBERSICHT DER IMMUNZYTOCHEMISCHEN UNTERSUCHUNGEN 60 5.3
LEKTINZYTOCHEMISCHE UNTERSUCHUNGEN 61 5.3.1 BINDUNG DES DOLICHOS
BIFLORUS AGGLUTININ (DBA) 61 5.3.2 BINDUNG DES ULEX EUROPAEUS AGGLUTININ
(UEAI) 63 5.3.3 BINDUNG DES CONCANAVALIN A (CON A) 65 5.3.4 BINDUNG DES
WHEAT GERM AGGLUTININ (WGA) 67 5.4 ELEKTRONENMIKROSKOPIE 69 5.4.
INHALTSVERZEICHNIS 6 DISKUSSION 75 6.1 ISOLIERUNG DER CANINEN ZELLEN 75
6.2 IDENTIFIZIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DER ISOLIERTEN ZELLEN 76 6.2.1
IMMUNZYTOCHEMISCHE IDENTIFIZIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DER ISOLIERTEN
ZELLEN 76 6.2.2 LEKTINZYTOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG DER ISOLIERTEN
ZELLEN 79 6.2.3 ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE CHARAKTERISIERUNG
ENDOTHELZELLTYPISCHER MORPHOLOGISCHER MERKMALE 81 6.3 IN VITRO
KULTIVIERUNG DER CANINEN ENDOTHELZELLEN 82 6.3.1 MORPHOLOGIE UND
PROLIFERATION DER IN VITRO KULTIVIERTEN ENDOTHELZELLEN 82 6.3.2 IN VITRO
GEFAESSENTWICKLUNG 84 6.3.3 WICHTIGSTE UNTERSCHIEDE DER ZELLKULTURMODELLE
DER TUMOROES ENTARTETEN ENDOTHELZELLEN UND DER ENDOTHELZELLEN AUS EINER
GESUNDEN MILZ 88 6.3.4 ANWENDBARKEIT DES ZELLKULTURMODELLS 89 7
ZUSAMMENFASSUNG 90 8 SUMMARY 93 9 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 95 10
ABBILDUNGSVERZEICHNIS 97 11 LITERATURVERZEICHNIS 98 12 DANKSAGUNG 110
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