Studien zum Einfluss von Kaffeegetränken und ausgewählten Inhaltsstoffen auf die Regulation der Magensäuresekretion:
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Garching
Verl. Deutsche Forschungsanstalt für Lebensmittelchemie (DFA)
2009
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| adam_text | Titel: Studien zum Einfluss von Kaffeegetränken und ausgewählten Inhaltsstoffen auf die Regulation der Ma
Autor: Rubach, Malte Jörn
Jahr: 2009
Inhaltsverzeichnis I
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung..................................................................................................1
1.1 Herkunft und Verarbeitung von Kaffee......................................................2
1.1.1 Verfahren zur Herstellung von Schonkaffees................................................7
1.2 Regulation der Säuresekretion im menschlichen Magen.......................10
1.3 Einfluss von Kaffeegetränken auf die Magensäuresekretion.................17
1.4 Fragestellung..............................................................................................26
2 Ergebnisse und Diskussion..............................................................29
2.1 Methodenvalidierung.................................................................................29
2.1.1 Einfluss von Kaffeelyophilisaten auf die Zellvitalität.....................................30
2.1.2 Messung des transepithelialen elektrischen Widerstandes (TEER).............31
2.1.3 Messung des intrazellulären pH-Wertes von HGT-1 Zellen.........................32
2.1.4 Messung der Genexpression mittels Realtime-PCR....................................36
2.1.4.1 Bestimmung des Referenzgens...................................................................36
2.1.4.2 Validierung der Realtime-PCR Assays.........................................................39
2.2 Einfluss der lyophilisierten Kaffeegetränke auf zelluläre Parameter der
Magensäuresekretion................................................................................51
2.2.1 Stoffliche Charakteristika der verwendeten Kaffeegetränke.........................51
2.2.2 Einfluss der Kaffeelyophilisate auf die sekretorische Aktivität von
Parietalzellen................................................................................................57
2.2.2.1 Diskussion....................................................................................................59
2.2.3 Einfluss der Kaffeelyophilisate auf die Signaltransduktion der
Magensäuresekretion...................................................................................61
2.2.3.1 Diskussion....................................................................................................69
Inhaltsverzeichnis II
2.2.4 Einfluss der Kaffeelyophilisate auf die Regulation sekretorisch relevanter
Gene............................................................................................................73
2.2.4.1 Diskussion....................................................................................................88
2.3 Einfluss ausgewählter Kaffeeinhaltsstoffe auf zelluläre Parameter der
Magensäuresekretion................................................................................90
2.3.1 Einfluss der Kaffeeinhaltsstoffe auf die sekretorische Aktivität von
Parietalzellen................................................................................................90
2.3.1.1 Diskussion....................................................................................................97
2.3.2 Einfluss der Kaffeeinhaltsstoffe auf die Signaltransduktion der
Magensäuresekretion.................................................................................100
2.3.2.1 Diskussion..................................................................................................106
2.3.3 Einfluss der Kaffeeinhaltsstoffe auf die Regulation sekretorisch relevanter
Gene..........................................................................................................112
2.3.3.1 Effekte der Kaffeeinhaltsstoffe auf die Genexpression...............................113
2.3.3.2 Aufklärung von Kombinationseffekten einzelner Kaffeeinhaltsstoffe..........121
2.3.3.3 Diskussion..................................................................................................126
2.4 Identifizierung von sekretorisch dominanten Kaffeeinhaltsstoffen
mittels neuronalem Netzwerk..................................................................131
2.4.1 Diskussion..................................................................................................137
2.5 Einfluss der Kaffeegetränke auf die Magensäuresekretion in vivo.....140
2.5.1 Diskussion..................................................................................................143
2.6 Schlussbetrachtung.................................................................................146
Inhaltsverzeichnis III
3 Experimenteller Teil...........................................................................148
3.1 Verzeichnis der Geräte, Verbrauchsmaterialien und Chemikalien......148
3.2 Zellkultur...................................................................................................152
3.2.1 Kulturbedingungen.....................................................................................153
3.2.2 Zellzählung und Vitalitätsbestimmung........................................................153
3.2.3 Messung des transepithelialen elektrischen Widerstandes (TEER)...........155
3.3 Molekularbiologische Methoden.............................................................157
3.3.1 RNA-Aufreinigung......................................................................................157
3.3.2 Reverse-Transkriptase-PCR (RT-PCR).....................................................159
3.3.3 cDNA-Synthese..........................................................................................161
3.3.4 Realtime-PCR............................................................................................162
3.3.5 Sequenzierung...........................................................................................167
3.4 Immunochemie.........................................................................................169
3.4.1 Protein-Quantifizierung..............................................................................169
3.4.2 Protein Arrays............................................................................................170
3.4.3 Enzyme linked Immunosorbent Assay (ELISA)..........................................171
3.5 Messung der Sekretion............................................................................173
3.5.1 Fluorometrische Bestimmung des intrazellulären pH-Wertes.....................173
3.5.2 lonenstrommessung mit der Ussing-Kammer............................................176
3.5.3 Intragastrale pH-Wert Messung mit der Heidelberg-Kapsel.......................178
3.6 Neuronales Netzwerk...............................................................................180
3.7 Probenvorbereitung.................................................................................181
3.8 Statistik.....................................................................................................183
_Inhaltsverzeichnis_IV
4 Zusammenfassung.............................................................................184
5 Summary................................................................................................185
6 Literatur..................................................................................................186
7 Abbildungsverzeichnis.....................................................................197
8 Tabellenverzeichnis...........................................................................201
9 Anhang....................................................................................................205
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