Entwicklung und Charakterisierung von Bioprozessen zur Produktion osteoinduktiver Wachstumsfaktoren in Chinese-Hamster-ovary-Zellen:
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| Format: | Thesis Book |
| Language: | German |
| Published: |
Berlin
Köster
2008
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| Edition: | 1. Aufl. |
| Series: | Wissenschaftliche Schriftenreihe Bioprozesstechnik
Bd. 1 |
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| Online Access: | Inhaltsverzeichnis |
| Physical Description: | XII, 241 S. graph. Darst. 21 cm |
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| adam_text | INHALTSSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS SYMBOL- UND ABKURZUNGSVERZEICHNIS
V ZUSAMMENFASSUNG XI ABSTRACT XII 1. EINLEITUNG 1 1.1 PROBLEMSTELLUNG
UND ZIELSETZUNG 3 1.2 BEDEUTUNG UND WIRKUNG OSTEOINDUKTIVER
WACHSTUMSFAKTOREN 5 1.2.1 WIRKUNGSPRINZIP 6 1.2.2 ZEIT- UND
DOSISABHAENGIGKEIT VON OSTEOINDUKTIVEN WACHSTUMSFAKTOREN 8 1.2.3
SYNERGIEEFFEKTE ZWISCHEN OSTEOINDUKTIVEN WACHSTUMSFAKTOREN 9 1.3
PRODUKTION VON OSTEOINDUKTIVEN WACHSTUMSFAKTOREN 11 1.4 EINFLUSSGROEOEN
DER PROZESSENRWICKLUNG 13 1.4.1 CHO ALS WIRTSSZELLEN FUER DIE HETEROLOGE
PROTEINPRODUKTION 14 1.4.2 KULTIVIERUNG VON SAEUGERZELLEN 15 1.4.3
METABOLISMUS VON SAEUGERZELLLINIEN 17 1.4.3.1 EINFLUSS VON SAUERSTOFF AUF
DEN METABOLISMUS 19 1.4.3.2 GLUKOSEMETABOLISMUS 21 1.4.3.3 ZITRATZYKLUS
(TCA) 23 1.4.3.4 GLUTAMINMETABOLISMUS 25 1.4.3.5 INTERAKTION ZWISCHEN
GLUKOSE- UND GLUTAMINSTOFFWECHSEL 27 1.4.3.6 AMINOSAEURESTOFFWECHSEL 28
2. MATERIAL UND METHODEN 31 2.1 ORGANISMEN, PLASMIDE UND NUKLEINSAEUREN
31 2.2 BAKTERIELLE NAEHRMEDIEN 36 2.2.1 LURIA BERTANI (LB)-MEDIUM 36
2.2.2 PSI-MEDIUM 36 I BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/99107095X DIGITALISIERT DURCH INHALTSSVERZEICHNIS 2.2.3
SOC-MEDIUM 36 2.2.4 X-GAL-IPTG-MEDIUM 37 2.3 ZELLKULTURMEDIEN 37 2.3.1
RIO-MEDIUM 37 2.3.2 R15-MEDIUM 37 2.4 ANTIBIOTIKA - 37 2.5
MIKROBIOLOGISCHE METHODEN 39 2.5.1 STAMMKONSERVIERUNG 39 2.5.2
KULTIVIERUNG VON E. COLI 39 2.5.3 HERSTELLUNG UND KONSERVIERUNG VON
CHEMISCH-KOMPETENTEN E. COLI 40 2.5.4 HERSTELLUNG VON
ELEKTRO-KOMPETENTEN E. COLI 41 2.6 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 41
2.6.1 ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA AUS EUKARYOTISCHEN ZELLEN 41 2.6.2
ISOLIERUNG VON GENOMISCHER DNA AUS EUKARYOTISCHEN ZELLEN 42 2.6.3
ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA AUS E. COLI 42 2.6.4 ISOLIERUNG VON
HOCHREINER, ENDOTOXINFREIER PLASMID-DNA 43 2.6.5
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUKLEINSAEUREN 44 2.6.6 DNA-HYDROLYSE DURCH
RESRRIKTIONSENDONUKLEASEN 44 2.6.7 ISOLIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN DURCH
ADSORPTION AN SILICA 45 2.6.8 POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) 45 2.6.9
REVERSE TRANSKRIPTASE-POLYMERASEKETTENREAKTION (RT-PCR) 47 2.6.10
LIGATION VON DNA-FRAGMENTEN 48 2.6.11 TRENNUNG VON DNA-FRAGMENTEN DURCH
AGAROSEGEL-ELEKTROPHORESE (AGE) 49 2.6.12 TRANSFORMATION UND SELEKTION
VON E. COLI 50 2.6.13 SEQUENZIERUNG DES PLASMIDS.. 51 2.
INHALTSSVERZEICHNIS 2.8 ANALYTISCHE METHODEN 61 2.8.1 ERMITTLUNG DER
TRANSFEKTIONSEFFIZIENZ DURCH DURCHFLUSSZYTOMETRIE 61 2.8.2
QUANTIFIZIERUNG DES EGFPS 61 2.8.3 SANDWICH-ELISA (ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT ASSAY) 62 2.8.4 BESTIMMUNG DER LAKTATKONZENTRATIONEN IN
ZELLKULTURUEBERSTAENDEN 64 2.8.5 BESTIMMUNG DER GLUKOSEKONZENTRATIONEN IN
ZELLKULTURUEBERSTAENDEN 65 2.8.6 PH-WERT-BESTIMMUNG 66 2.8.7 ANALYSE VON
EXTRAZELLULAEREN AMINOSAEUREN 66 2.8.8 FLUORESZENZFAERBUNG VON HVEGFA UND
DER HVEGFA-REZEPTOREN 67 2.8.9 PROTEINBESTIMMUNG NACH BRADFORD 68 2.8.10
BESTIMMUNG DER METABOLISCHEN AKTIVITAET 69 2.8.11 HERSTELLUNG VON
ROHEXTRAKTEN DURCH ZELLLYSE 69 2.8.12 PROLIFERATIONSTEST 70 2.8.13
QUANTIFIZIERUNG DER ALKALISCHEN PHOSPHATASE (ALP) UND VON KOLLAGEN TYPL
71 2.9 CHEMIKALIEN 72 3. ERGEBNISSE UND DISKUSSION 73 3.1 ETABLIERUNG
EINES PRODUKTIONSSYSTEMS ZUR HERSTELLUNG HUMANER WACHSTUMSFAKTOREN IN
CHO- KL-/.EILEN 73 3.1.1 UEBERLEGUNGEN ZUR EXPRESSION HUMANER
WACHSTUMSFAKTOREN 73 3.1.2 KLONIERUNG DER EXPRESSIONSVEKTOREN 76 3.1.3
ETABLIERUNG DES TRANSFEKTIONSSYSTEMS 77 3.1.4 ETABLIERUNG EINES AUF DER
KOEXPRESSION VON EGFP-BASIERENDEN SCREENINGSYSTEMS 79 3.1.4.1
ENTWICKLUNG EINES SCREENINGVERFAHRENS 80 3.1.4.2 IDENTIFIZIERUNG VON
HIGH PRODUCER STABILKLONEN 89 3.2 CHARAKTERISIERUNG ISOLIERTER KLONE 9
INHALTSSVERZEICHNIS 3.3.5.1 EINFLUSS DER STABILEN INSERTION AUF DEN
AMINOSAEUREMETABOLISMUS 151 3.3.5.2 EINFLUSS DER FUETTERUNG AUF DEN
AMINOSAEUREMETABOLISMUS IN SPINNERFLASCHEN 157 3.3.5.3 EINFLUSS DER
PROZESSFUEHRUNG (PH, P O 2 AUF DEN AMINOSAEUREMETABOLISMUS 161 3.3.5.4
EINFLUSS DER FUETTERUNG AUF DEN AMINOSAEUREMETABOLISMUS IM BIOREAKTOR 164
3.3.6 ZUSAMMENFASSUNG DER KULTIVIERUNGSDATEN 169 3.3.7 BEEINFLUSSUNG DER
PRODUKTIONSZELLEN DURCH HVEGFA 172 3.3.7.1 UNTERSUCHUNG DER
HVEGFA-BINDUNG AN CHO-KL- BZW. MDJ8-ZELLEN 172 3.3.7.2 BEEINFLUSSUNG DER
CHO-KL-ZELLEN DURCH HVEGFA 175 3.3.7.3 BEEINFLUSSUNG DER MDJ8-ZELLEN
DURCH HVEGFA 177 3.4 WECHSELWIRKUNGEN HUMANER WACHSTUMSFAKTOREN MIT
HUMANEN CALVARIALEN OSTEOBLASTEN UND OSTEOSARKOMZELLEN 182 3.4.1
ZELLAKTIVITAET UND PROLIFERATION 183 3.4.2 EXPRESSION DER ALKALISCHEN
PHOSPHATASE (ALP) UND VON KOLLAGEN TYPL 188 4. SCHLUSSFOLGERUNGEN UND
AUSBLICK 194 A VERWENDETE PLASMIDE 197 B DATENANALYSE 200 B.L.
BERECHNUNGEN FUER DAS SCREENING 200 B.L.L SIGNAL-HINTERGUND-VERHAELTNIS
200 B.L.2 DETEKTIONSLIMIT 200 B.2 AUSWERTUNG ELISA 201 B.3 AUSWERTUNG
LAKTATTEST 202 B. 4 BERECHNUNGEN ZUR KULTIVIERUNG 203 B.4.1
WACHSTUMSRATE UND GENERATIONSZEIT 203 B.4.2 SPEZIFISCHE
SUBSTRATVERBRAUCHS-, METABOLITBILDUNGS- UND PRODUKTBILDUNGSRATEN 203
B.4.3 AUSBEUTEKOEFFIZIENT 204 LITERATURVERZEICHNIS 205 I
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