Intraendothelialer Metabolismus von Tetrahydrobiopterin unter dem Einfluss atherosklerotischer Risikofaktoren: Zusammenhang mit der endothelialen Dysfunktion
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Autor: Hilge, Robert
Jahr: 2009
Inhaltsverzeichnis
1. Einleitung 1
1.1 Kardiovaskuläre Erkrankungen und endotheliale Dysfunktion 1
1.1.1 Schwierigkeiten bei Prävention und Therapie atherosklerotischer
Erkrankungen 1
1.1.2 Endotheliale Dysfunktion 2
1.2 Die Rolle von Tetrahydrobiopterin 6
1.2.1 eNOS und Tetrahydrobiopterin 6
1.2.2 Synthese und Recycling von Tetrahydrobiopterin 7
1.2.3 Kardiovaskuläre Risikofaktoren und Tetrahydrobiopterin 9
1.3 Pteridinzufuhr 10
1.3.1 Tetrahydrobiopterinsupplementation 10
1.3.2 Sepiapterinsupplementation 12
1.4 Widersprüche und Limitationen bisheriger Studien 13
1.5 Ziel der Arbeit 15
2. Material und Methoden 16
2.1 Material 16
2.1.1 Endothelzellen 16
2.1.2 Zellkulturmedien, Zusätze und fertige Pufferlösungen 16
2.1.3 Proteine und Enzyme 17
2.1.4 Chemikalien und fertige Lösungen 17
2.1.5 Kulturbehältnisse und Verbrauchsmaterialien 20
2.1.6 Technische Geräte 21
2.1.7 Software 22
Inhaltsverzeichnis
2.2 Methoden 23
2.2.1 Endothelzellkultur und Behandlungsmethoden 23
2.2.2 Gewinnung der Low Density Lipoproteine 27
2.2.3 Proteinmessung 28
2.2.4 Oxidation der Low Density Lipoproteine und Messung des
Oxidationsgrades mit der TBARS-Methode 29
2.2.5 Bestimmung des intrazellulären Tetrahydrobiopterinspiegels
mittels HPLC 31
2.2.6 Fluorometrische NO-Messung mit DAF-2 35
2.2.7 Statistik 43
3. Ergebnisse 45
3.1 Intrazelluläre Tetrahydrobiopterinspiegel 45
3.1.1. Tetrahydrobiopterinspiegel ohne Sepiapterinsupplementation 45
3.1.2. Tetrahydrobiopterinspiegel nach Sepiapterinsupplementation 47
3.2. NO-Produktion 50
3.2.1. NO ohne Sepiapterinsupplementation 50
3.2.2. NO nach Sepiapterinsupplementation mit 100 uM 53
3.2.3. NO nach Sepiapterinsupplementation mit 10 uM 55
3.2.4. NO unter aufsteigenden Sepiapterinkonzentrationen 57
3.2.5. NO nach Tetrahydrobiopterinsupplementation 58
3.2.6. NO nach PKC-Stimulation mit PMA 61
3.2.7. NO nach Behandlung mit Tiron 64
4. Diskussion 67
4.1 Bewertung der Methodik 67
4.2 Zusammenhänge von intrazellulärem Tetrahydrobiopterinspiegel
und endothelialer NO-Produktion 69
4.2.1 Auswirkungen proatherogener Bedingungen 69
4.2.2 Auswirkungen exogener Pteridinzufuhr 74
4.2.3 Konsequenzen für die Interpretation vorheriger Studien und
Planung zukünftiger Untersuchungen 80
4.2.4 Mögliche Rolle von Phosphokinase C und Superoxidanionen 85
4.3. Limitationen der aktuellen Arbeit 91
Inhaltsverzeichnis
5. Zusammenfassung der Arbeit 92
6. Literaturverzeichnis 95
Tabellenanhang 111
Erklärung häufig verwendeter Abkürzungen 123
Danksagung 125
Lebenslauf 126
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