Fibronektin-Bindungsstellen von Borrelia burgdorferi und deren mögliche Bedeutung für die Adhärenz an Epithelzellen:
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1994
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I
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
EINLEITUNG
2
LITERATURUEBERSICHT
2
2.1
BORRELIA
BURGDORFERI
2
2.2
FIBRONEKTIN
6
2.2.1
BAKTERIELLE
BINDUNGEN
AN
FIBRONEKTIN
10
2.2.2
ISOLIERUNG
VON
FIBRONEKTIN
11
2.3
ADHAERENZ
12
3
MATERIAL
UND
METHODEN
17
3.1
VERZEICHNIS
DER
LOSUNGEN
17
3.2
BAKTERIENKULTUREN
23
3.3
ANZUCHTUNG
24
3.4
FIBRONEKTINGEWINNUNG
25
3.4.1
ANTIKORPERGEWINNUNG
25
3.4.2
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DES
FIBRONEKTINS
-
26
3.4.3
BESTIMMUNG
DES
JODIERUNGSGRADES
26
3.5
PROTEINBESTIMMUNG
27
36
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
(PAGE)
28
3.7
"WESTEM-BLOTTING"
29
3.8
IMMUNOBLOTTING
29
3.9
"DOT-TEST"
30
II
3.10
BINDUNGSKINETIK
30
3.10.1
BINDUNGSVERSUCHE
MIT
RADIOAKTIV-MARKIERTEM
FIBRONEKTIN
30
3.10.2
HEMMVERSUCHE
MIT
NICHT-MARKIERTEN
PLASMAPROTEINEN
31
3.10.3
VERDRAENGUNGSVERSUCHE
MIT
NICHT-MARKIERTEM
FIBRONEKTIN
31
3.10.4
"SCATCHARD-PLOT"
32
3.11
ISOLIERUNG
DER
BINDUNGSSTELLEN
32
3.11.1
SAURE
HITZEEXTRAKTION
32
3.11.2
ALKALISCHE
HITZEEXTRAKTION
32
3.11.3
NA-METAPERJODAT
33
3.11.4
HYDROXYLAMMONIUMCHLORID
33
3.11.5
TRYPSINVERDAU
33
3.11.6
PEPSINVERDAU
33
3.11.7
PRONASEVERDAU
34
3
11.8
MUTANOLYSINBEHANDLUNG
34
3.11.9
LYSOZYMBEHANDLUNG
34
3.12
REINIGUNG
DER
BINDUNGSSTELLEN
UEBER
FPLC
(FAST
PROTEIN
LIQUID
CHROMATOGRAPHY)
35
3.13
AFFINITATSCHROMATOGRAPHIE
35
3.14
AUTORADIOGRAPHIE
36
3.15
ADHAERENZ
37
3.15.1
EPITHELZELLISOLIERUNG
37
3.15.2
MARKIERUNG
DER
BAKTERIEN
37
3.15.3
DURCHFUEHRUNG
DER
ADHAERENZVERSUCHE
3
8
4
ERGEBNISSE
39
4.1
FIBRONEKTINGEWINNUNG
39
4.2
FIBRONEKTIN-BINDUNGSSTELLEN
39
4.2.1
BINDUNGEN
AN
RADIOAKTIV-MARKIERTES
FIBRONEKTIN
39
III
4.2.2
"SCATCHARD-PLOT"
UND
KD-WERTE
DER
FIBRONEKTIN-BINDUNGSSTELLEN
43
4.2.3
BORRELIENPRAEPARATIONEN
IM
SDS-GEL
45
4
2
3
1
COOMASSIE-FAERBUNG
45
4.2.3.2
SILBER-FAERBUNG
46
4.2.4
NACHWEIS
DER
FIBRONEKTIN-BINDUNGSAKTIVITAETEN
47
4.3
ISOLIERUNG
DER
FIBRONEKTIN-BINDUNGSSTELLEN
48
4
3
1
ABLOESUNG
DER
BINDUNGSSTELLEN
49
4
3
2
VERGLEICHENDE
DARSTELLUNG
LYSOZYMATISCH
GEWONNENER
FIBRONEKTIN-BINDUNGSSTELLEN
50
4.3.3
ISOLIERUNG
DER
LYSOZYMATISCH
GEWONNENEN
FIBRONEKTIN
BINDUNGSSTELLEN
MITTELS
FPLC
54
4.3.4
LYSOZYMATISCH
GEWONNENE
FIBRONEKTIN-BINDUNGSSTELLEN
NACH
ISOLIERUNG
MITTELS
FPLC
VON
BORRELIA
BURGDORFERI
-STAMM
N34
55
4.3.5
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCHE
REINIGUNG
DER
FPLC-ISOLIERTEN
FIBRONEKTIN-BINDUNGSSTELLEN
57
4.3
6
FPLC-ISOLIERTE
UND
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCH
GEREINIGTE
FIBRONEKTIN-BINDUNGSSTELLEN
VON
BORRELIA
BURGDORFERI-STAMM
N34
58
4.4
ADHAERENZ
60
4.5
HEMMUNG
DER
ADHAERENZ
60
5
DISKUSSION
64
6
ZUSAMMENFASSUNG
68
7
SUMMARY
69
8
LITERATURVERZEICHNIS
70 |
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