Untersuchungen zur Induktion von Apoptose in humanen ejakulierten Spermatozoen:
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| adam_text | Titel: Untersuchungen zur Induktion von Apoptose in humanen ejakulierten Spermatozoen
Autor: Dathe, Sylvia
Jahr: 2008
Inhaltsverzeichnis
1 EINLEITUNG 1
2 THEORETISCHE EINFÜHRUNG 3
2.1 Apoptose 3
2.1.1 Apoptose im Allgemeinen 3
2.1.2 Caspasen 5
2.1.3 Der extrinsische Weg 6
2.1.4 Der intrinsische Weg 8
2.1.5 Interaktionen 9
2.1.6 Die gemeinsame Endstrecke 10
2.1.7 Alternative Wege des Programmierten Zelltodes 11
2.2 Apoptose am Spermium 11
2.3 Kryokonservierung 14
2.4 Reaktive Sauerstoffspezies als Ursache von Infertilität 16
2.4.1 H2O2-Effekte an humanen Spermatozoen 18
2.4.2 H2O2 und Apoptose 19
2.5 Betulinsäure 21
2.5.1 Charakterisierung und Eigenschaften 21
2.5.2 Die Betulinsäure-getriggerte Apoptosekaskade 21
2.6 Ziel der Arbeit 23
3 MATERIAL UND METHODEN 25
3.1 Spenderakquisition 25
3.2 Ejakulatanalysen 25
3.2.1 Standard-Spermiogrammparameter 25
3.2.2 Motilitätsanalysen 26
3.3 Probenaufbereitung 27
3.4 Kryokonservierung 27
3.4.1 Test Yolk Buffer 27
3.4.2 Graduelles Einfrieren 28
3.4.3 Der Auftauprozeß 28
3.5 Nachweis und Quantifizierung aktiver Caspasen in vitalen Spermatozoen 28
3.6 Detektion und Evaluation des transmembranösen mitochondrialen Potenzials29
3.7 Durchflusszytometrische Analysen 30
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3.7.1 Technisches Prinzip 30
3.7.2 Akrosomenintaktheit 31
3.8 Versuchsdesign 32
3.8.1 Autoaktivierung von Caspasen 32
3.8.2 Induktion des Typ I Weges mittels H2O2 33
3.8.3 Induktion des Typ II Weges durch Betulinsäure 34
3.9 Statistische Verfahren 35
4 ERGEBNISSE 36
4.1 Ejakulatanalysen 36
4.2 Einstellungen des Durchflusszytometers 37
4.3 Autoaktivierung von Caspasen 39
4.4 Induktion des Typ I Weges mittels H2O2 41
4.4.1 Untersuchungen an kryokonservierten Proben 41
4.4.2 Untersuchungen an frischen Ejakulaten 42
4.5 Induktion des Typ II Weges mit Betulinsäure 43
4.5.1 Beeinflussung der Motilität durch Betulinsäure 43
4.5.2 Quantifizierung des Motilitätsverlustes durch Betulinsäure 44
4.5.3 Apoptoseinduktion durch Betulinsäure 46
5 DISKUSSION 50
5.1 Ejakulatanalysen und Probandenrekrutierung 50
5.2 Autoaktivierung von Caspasen 52
5.3 Apoptoseinduktion durch H2O2 53
5.4 Apoptoseinduktion durch Betulinsäure 56
6 ZUSAMMENFASSUNG 59
7 LITERATUR 61
8 ANHANG 72
8.1 Puffer und Lösungen 72
8.2 Chemikalien und Testkits 72
8.3 Labortechnik 72
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