Regulation der Expression der Adhäsionsmoleküle ICAM-1 und VCAM-1 auf glatten Gefäßmuskelzellen humaner Venen und Koronarien durch Cytokine:
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| adam_text | Inhaltsverzeichnis
I.Einleitung
Einfuhrung 1
1.1. Theorien zur Atherogenese 3
1.2. Bedeutung glatter Muskelzellen in der Atherogenese 7
1.3. Cytokine und Wachstumsfaktoren 10
1.4. Adhäsionsmoleküle 13
1.5. Problemstellung 17
2.Material und Methoden
2.1. Isolierung humaner venöser und koronarer glatter Gefäßmuskelzellen 19
2.2. Kultivierung humaner glatter Gefäßmuskelzellen 20
2.3. Zell-ELISA 22
2.4. Konfokale Laserscan-Mikroskopie 23
2.5. Isolation von Gesamt-RNA 25
2.6. Semiquantitative RT-PCR 26
2.7. Statistik 29
2.8. Zusammensetzung von Puffern, Medien und Lösungen 30
2.9. Geräte 36
2.10. Reagenzien 37
3. Ergebnisse
3.1. Die Zellkultivierung 40
3.2. Die Effekte von Cytokinen (IL-4, TNFa) auf die Expression von
ICAM-1 und VCAM-1 in SMC aus Koronarien und Venen 42
3.2.1. Die Proteinebene (Zell-ELISA) 42
3.2.1.1. Die Wirkung von TNFa, IL-4 und TGFß auf die Expression
von VCAM-1 und ICAM-1 auf humanen venösen SMC 42
3.2.2. Die Einzelzellebene (CLSM) 44
3.2.3. Die mRNA-Ebene (RT-PCR) 48
3.2.3.1. Die Stimulation der humanen venösen SMC
durch TNFa und IL-4 48
3.2.3.2. Die Stimulation von humanen koronaren SMC durch TNFa 51
3.3. Der Effekt vom Wachstumsfaktor TGFß auf die Expression von
ICAM-1 und VCAM-1 in humanen SMC aus Koronarien und Venen 53
3.3.1. Die Proteinebene (Zell-ELISA) 53
3.3.1.1 Die Wirkung von TGFß auf die Basalexpression von
humanen venösen SMC 53
3.3.1.2. Die Wirkung von TGFß auf die TNFa- bzw. IL-4-Wirkung
an humanen venösen SMC 54
3.3.2. Die mRNA-Ebene (RT-PCR) 57
3.3.2.1. Der Effekt von TGFß auf die TNFa- bzw. IL-4-Wirkung
an humanen venösen SMC 57
3.3.2.2. Der Effekt von TGFß auf die TNFa-induzierbare VCAM-1-
und ICAM-1-Expression in humanen koronaren SMC 60
4. Diskussion
4.1. Die Zellkultur 62
4.2. Die RT-PCR 66
4.3. Die biologische Bedeutung der Ergebnisse 70
5. Zusammenfassung 76
6. Abkürzungen 78
7. Quellenverzeichnis 81
8. Danksagung 90
9. Lebenslauf 91
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