Einfluss des Notch Antagonisten Hairless auf apoptotische Prozesse in Drosophila melanogaster:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Verl. Dr. Hut
2008
|
| Ausgabe: | 1. Aufl. |
| Schriftenreihe: | Biologie
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | XII, 197 S. Ill., graph. Darst. 210 mm x 148 mm, 212 gr. |
| ISBN: | 9783899638202 |
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|---|---|
| adam_text | DC INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG 1 1.1 DER NOTCH-SIGNALWEG 1 1.1.1 DIE
MOLEKULAREN GRUNDLAGEN DES NOTCH-SIGNALWEGES 1 1.1.2 VERSCHIEDENE
WIRKUNGSEBENEN DES NOTCH-SIGNALWEGES 4 1.2 WIE WIRD DER NOTCH-SIGNALWEG
REGULIERT ? 10 1.2.1 BEDEUTUNG DER GLYKOSYLIERUNG VON LIPIDEN UND
PROTEINEN 10 1.2.2 UNTERSCHIEDLICHER SIGNALOUTPUT 13 1.2.3
WECHSELWIRKUNGEN MIT ANDEREN SIGNALWEGEN 13 1.3 ZIELE DER ARBEIT 20 2
MATERIAL UND METHODEN 21 2.1 INTERNET-ADRESSEN 21 2.2 KITS UND
CHEMIKALIEN 21 2.3 BAKTERIENSTAMME 22 2.4 A-PHAGENBIBLIOTHEK 22 2.5
ZELLLINIEN 23 2.6 VEKTOREN 23 2.7 SUBKLONE 25 2.8
LISTEDEROLIGONUKLEOTIDE 28 2.9 FLIEGENSTAMME 29 2.10 ANTIKORPER 35
2.10.1 PRIMARE ANTIKORPER 35 2.10.2 SEKUNDARE ANTIKORPER 36 2.11
MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 37 2.11.1 EIECTROPHORETIC MOBILITY SHIFT
ASSAY (EMSA) 37 2.11.2 EXPRESSION UND AUFREINIGUNG EINES
MBP-FUSIONSPROTEINS 39 2.11.3 HERSTELLUNG VON PROTEINEXTRAKTEN AUS
EMBRYONEN 40 2.11.4 IMMUNPRAZIPITATION MIT PROTEINEXTRAKT AUS EMBRYONEN
ODER S2- ZELLEN 40 2.11.5 ISOLIERUNG GENOMISCHER FLIEGEN-DNA IM
KLEINANSATZ 41 2.11.6 PHAGENSCREEN 42 2.11.7 PROTEINAUFREINIGUNG MIT
DERN PHOSPHOCRUZ* KIT VON SANTACRUZ . . 47 BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/991285255 DIGITALISIERT DURCH INHALTSVERZEICHNIS 2.11.8
SEQUENZIERUNG 47 2.11.9 SDS-GELELEKTROPHORESE UND WESTERN BLOT 48
2.11.10 SONDENHERSTELLUNG 48 2.11.11 SOUTHERN BLOT 50 2.12
ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 51 2.12.1 KULTIVIEREN UND UMSETZEN VON S2
ZELLEN 51 2.12.2 TRANSFEKTION UND INDUKTION VON S2 ZELLEN 52 2.12.3
TRANSIENTE TRANSFEKTION 52 2.12.4 HERSTELLUNG GENETISCH STABILER LINIEN
52 2.12.5 ABERNTEN DER S2 ZELLEN UND GEWINNUNG VON PROTEINEXTRAKTEN ...
53 2.12.6 ANTIKORPERFARBUNGEN AN S2-ZELLEN 53 2.12.7 METHODEN ZUM
NACHWEIS VON APOPTOSE IN ZELLKULTUREN 54 2.13 FLIEGENARBEIT 56 2.13.1
FLIEGENHALTUNG 56 2.13.2 FLIEGENKREUZUNGEN 57 2.13.3
KEIMBAHNTRANSFORMATION 57 2.13.4 BALANCIERUNGEN 57 2.13.5 JUMP-OUT
MUTAGENESE 57 2.13.6 HERSTELLUNG UND ANALYSE VON UBEREXPRESSIONSKLONEN
58 2.14 HISTOLOGISCHE METHODEN 58 2.14.1 PREPARATION 59 2.14.2
ANTIKORPERFARBUNGEN 59 2.14.3 COBALTSULFIDFARBUNG 61 2.14.4 IN SITU
HYBRIDISIERUNGEN 61 2.15 DOKUMENTATION UND STATISTISCHE AUSWERTUNG 63
2.15.1 DOKUMENTATION 63 2.15.2 VERMESSEN VON AUGEN-, THORAX- UND
FLUGELFLACHEN MIT IMAGEJ ... 64 2.15.3 STATISTISCHE AUSWERTUNG MIT DEM
STUDENT S T-TEST 64 ERGEBNISSE 66 3.1 DER EINFLUSS VON HAIRLESS AUF
APOPTOTISCHE PROZESSE IN DROSOPHILA MELANOGASTER 66 3.1.1 WELCHE
ABSCHNITTE DES HAIRLESS-PROTEINS VERMITTELN DIE PRO-APOPTOTISCHE WIRKUN
INHALTSVERZEICHNIS 3.1.7 RESULTIERT HAIRLESS-INDUZIERTE APOPTOSE AUS DER
REPRESSION VON WACHSTUMS- ODER ZELLZYKLUSREGULATOREN ? 80 3.1.8
INDUZIERT HAIRLESS APOPTOSE DURCH INHIBITION DES ANTIAPOPTOTISCHEN
FAKTORSDIAPL ? 81 3.1.9 VERMITTELT HAIRLESS ZELLTOD DURCH EINE
INTERAKTION MIT ANDEREN, BE- KANNTERMAFIEN ZELLTOD-BEEINFLUSSENDEN
SIGNALWEGEN ? 82 3.2 EINFLUSS DER MAPK-PHOSPHORYLIERUNGSSTELLE AUF DIE
FUNKTION VON SU(H) . . 92 3.2.1 WIRD SU(H) IN VIVO PHOSPHORYLIERT ? 93
3.2.2 ANALYSE DER BINDUNGSEIGENSCHAFTEN VON SU(H) IN VITRO 95 3.2.3
UNTERSUCHUNG DER INTERAKTION VON SU(H) UND H IN VIVO 101 3.2.4
AUSWIRKUNGEN DES PHOSPORYLIERUNGSSTATUS VON SU(H) AUF DIE ZIEL-
GENAKTIVIERUNG 103 3.2.5 EINFLUSS VERSCHIEDENER KOMPONENTEN DES
EGFR-SIGNALWEGES AUF DIE WINGLESS EXPRESSION 109 3.3 MOLEKULARE UND
GENETISCHE CHARAKTERISIERUNG DER EP-LINIE 797 ILL 3.3.1 IDENTIFIKATION
VON EP797 ALS VERSTARKER VON HAIRLESS ILL 3.3.2 MOLEKULARE
CHARAKTERISIERUNG DER EP-LINIE 797 112 3.3.3 CG17223 KODIERT FUR EINE
A-L,4-GLYKOSYLTRANSFERASE,A4GTL 113 3.3.4 RNA-EXPRESSIONSPROFIL VON
O.4GT1 115 3.3.5 ANALYSEN ZUR PROTEINVERTEILUNG VONA4GTL 116 3.3.6
FUNKTIONELLE ANALYSEN ZU A4GTL 119 3.3.7 SYSTEMATISCHE ANALYSEN NACH
UBEREXPRESSION BZW. RNA INTERFE- REN INHALTSVERZEICHNIS 4.3.4
INTERAGIERT A4GTL MIT PROAPOPTOTISCHEN FAKTOREN ? 154 4.3.5 WELCHE
FUNKTIONEN HAT A4GTL IN DER KEIMBAHN UND IN DER EM- BRYONALENTWICKLUNG ?
154 4.3.6 HAT A4GTL EINEN EINFLUSS AUF NOTCH-VERMITTELTE PROZESSE
WAHREND DER ENTWICKLUNG ? 155 4.3.7 WIE LASST SICH DER DURCH REDUKTION
VON A4GTL INDUZIERTE GEWEBE- VERLUST ERKLAREN ? 156 5 ZUSAMMENFASSUNG
158 6 SUMMARY 160 LITERATURVERZEICHNIS 161 7 ANHANG 185 7.0.8 TEST
ANDERER ZELLTODNACHWEISMETHODEN 186 XN
|
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DC INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG 1 1.1 DER NOTCH-SIGNALWEG 1 1.1.1 DIE
MOLEKULAREN GRUNDLAGEN DES NOTCH-SIGNALWEGES 1 1.1.2 VERSCHIEDENE
WIRKUNGSEBENEN DES NOTCH-SIGNALWEGES 4 1.2 WIE WIRD DER NOTCH-SIGNALWEG
REGULIERT ? 10 1.2.1 BEDEUTUNG DER GLYKOSYLIERUNG VON LIPIDEN UND
PROTEINEN 10 1.2.2 UNTERSCHIEDLICHER SIGNALOUTPUT 13 1.2.3
WECHSELWIRKUNGEN MIT ANDEREN SIGNALWEGEN 13 1.3 ZIELE DER ARBEIT 20 2
MATERIAL UND METHODEN 21 2.1 INTERNET-ADRESSEN 21 2.2 KITS UND
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2.10.1 PRIMARE ANTIKORPER 35 2.10.2 SEKUNDARE ANTIKORPER 36 2.11
MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 37 2.11.1 "EIECTROPHORETIC MOBILITY SHIFT
ASSAY (EMSA)" 37 2.11.2 EXPRESSION UND AUFREINIGUNG EINES
MBP-FUSIONSPROTEINS 39 2.11.3 HERSTELLUNG VON PROTEINEXTRAKTEN AUS
EMBRYONEN 40 2.11.4 IMMUNPRAZIPITATION MIT PROTEINEXTRAKT AUS EMBRYONEN
ODER S2- ZELLEN 40 2.11.5 ISOLIERUNG GENOMISCHER FLIEGEN-DNA IM
KLEINANSATZ 41 2.11.6 PHAGENSCREEN 42 2.11.7 PROTEINAUFREINIGUNG MIT
DERN PHOSPHOCRUZ* KIT VON SANTACRUZ . . 47 BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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ZELLBIOLOGISCHE METHODEN 51 2.12.1 KULTIVIEREN UND UMSETZEN VON S2
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TRANSIENTE TRANSFEKTION 52 2.12.4 HERSTELLUNG GENETISCH STABILER LINIEN
52 2.12.5 ABERNTEN DER S2 ZELLEN UND GEWINNUNG VON PROTEINEXTRAKTEN .
53 2.12.6 ANTIKORPERFARBUNGEN AN S2-ZELLEN 53 2.12.7 METHODEN ZUM
NACHWEIS VON APOPTOSE IN ZELLKULTUREN 54 2.13 FLIEGENARBEIT 56 2.13.1
FLIEGENHALTUNG 56 2.13.2 FLIEGENKREUZUNGEN 57 2.13.3
KEIMBAHNTRANSFORMATION 57 2.13.4 BALANCIERUNGEN 57 2.13.5 JUMP-OUT
MUTAGENESE 57 2.13.6 HERSTELLUNG UND ANALYSE VON UBEREXPRESSIONSKLONEN
58 2.14 HISTOLOGISCHE METHODEN 58 2.14.1 PREPARATION 59 2.14.2
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HYBRIDISIERUNGEN 61 2.15 DOKUMENTATION UND STATISTISCHE AUSWERTUNG 63
2.15.1 DOKUMENTATION 63 2.15.2 VERMESSEN VON AUGEN-, THORAX- UND
FLUGELFLACHEN MIT IMAGEJ . 64 2.15.3 STATISTISCHE AUSWERTUNG MIT DEM
STUDENT'S T-TEST 64 ERGEBNISSE 66 3.1 DER EINFLUSS VON HAIRLESS AUF
APOPTOTISCHE PROZESSE IN DROSOPHILA MELANOGASTER 66 3.1.1 WELCHE
ABSCHNITTE DES HAIRLESS-PROTEINS VERMITTELN DIE PRO-APOPTOTISCHE WIRKUN
INHALTSVERZEICHNIS 3.1.7 RESULTIERT HAIRLESS-INDUZIERTE APOPTOSE AUS DER
REPRESSION VON WACHSTUMS- ODER ZELLZYKLUSREGULATOREN ? 80 3.1.8
INDUZIERT HAIRLESS APOPTOSE DURCH INHIBITION DES ANTIAPOPTOTISCHEN
FAKTORSDIAPL ? 81 3.1.9 VERMITTELT HAIRLESS ZELLTOD DURCH EINE
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FUNKTION VON SU(H) . . 92 3.2.1 WIRD SU(H) IN VIVO PHOSPHORYLIERT ? 93
3.2.2 ANALYSE DER BINDUNGSEIGENSCHAFTEN VON SU(H) IN VITRO 95 3.2.3
UNTERSUCHUNG DER INTERAKTION VON SU(H) UND H IN VIVO 101 3.2.4
AUSWIRKUNGEN DES PHOSPORYLIERUNGSSTATUS VON SU(H) AUF DIE ZIEL-
GENAKTIVIERUNG 103 3.2.5 EINFLUSS VERSCHIEDENER KOMPONENTEN DES
EGFR-SIGNALWEGES AUF DIE WINGLESS EXPRESSION 109 3.3 MOLEKULARE UND
GENETISCHE CHARAKTERISIERUNG DER EP-LINIE 797 ILL 3.3.1 IDENTIFIKATION
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A-L,4-GLYKOSYLTRANSFERASE,A4GTL 113 3.3.4 RNA-EXPRESSIONSPROFIL VON
O.4GT1 115 3.3.5 ANALYSEN ZUR PROTEINVERTEILUNG VONA4GTL 116 3.3.6
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154 4.3.6 HAT A4GTL EINEN EINFLUSS AUF NOTCH-VERMITTELTE PROZESSE
WAHREND DER ENTWICKLUNG ? 155 4.3.7 WIE LASST SICH DER DURCH REDUKTION
VON A4GTL INDUZIERTE GEWEBE- VERLUST ERKLAREN ? 156 5 ZUSAMMENFASSUNG
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