Experimentelle Untersuchungen zur In-vitro-Erzeugung präimplantatorischer Schweineembryonen:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1996
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1
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
6
2
ASPEKTE
DER
GAMETENREIFUNG,
BEFRUCHTUNG
UND
KULTIVIERUNG
UNTER
IN-VIVO
UND
IN-VITRO-BEDINGUNGEN
BEIM
SCHWEIN
7
2.1
REIFUNG
DER
KUMULUS-OOCYTEN-KOMPLEXE
8
2.2
BEFRUCHTUNGSVORBEREITENDE
VORGAENGE
AN
SPERMIEN
_.
11
2.2.1
KAPAZITATION
11
2.2.2
DEKAPAZITATION
13
2.2.3
AKROSOMREAKTION
13
2.3
IN-VITRO-BEFRUCHTUNG
15
2.4
IN-VITRO-KULTUR
VON
EMBRYONEN
16
3
MATERIAL
UND
METHODEN
19
3.1
ALLGEMEINE
ANGABEN
ZUR
DURCHFUEHRUNG
DER
EINZELVERSUCHE
19
3.1.1
TIERMATERIAL
19
3.1.2
GEWINNUNG
DER
KUMULUS-OOCYTEN-KOMPLEXE
19
3.1.2.1
UNREIFE
KUMULUS-OOCYTEN-KOMPLEXE
19
3.1.2.2
IN
VIVO
GEREIFTE
KUMULUS-OOCYTEN-KOMPLEXE
20
3.1.3
GEWINNUNG
UND
BEARBEITUNG
DES
FRISCHSPERMAS
ZUR
IN-VITRO-
BEFRUCHTUNG
20
3.1.4
GEWINNUNG
IN
VIVO
ERZEUGTER
EMBRYONEN
22
3.1.5
METHODEN
ZUR
BEURTEILUNG
VON
OOCYTEN
UND
EMBRYONEN
22
3.1.5.1
MORPHOLOGISCHE
BEURTEILUNG
IN
VITRO
UND
IN
VIVO
GEREIFTER
KUMULUS-OOCYTEN-KOMPLEXE
22
3.1.5.2
DARSTELLUNG
DER
KEMREIFUNGSSTADIEN
UND
DIE
MORPHOLOGISCHE
BEURTEILUNG
VON
EMBRYONEN
25
3.1.5.3
ZYTOGENETISCHE
FAERBUNG
VON
EMBRYONEN
28
3.1.6
VERFAHREN
DER
IN-VITRO-BEFRUCHTUNG
28
3.1.7
EMBRYOTRANSFER
29
3.1.8
STATISTISCHE
AUSWERTUNGEN
29
3.2
SPEZIELLE
ANGABEN
ZU
DEN
EINZELNEN
VERSUCHSABSCHNITTEN
31
3.2.1
EXPERIMENTELLE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
IN-VITRO-REIFUNG
PORCINER
KUMULUS-OOCYTEN-KOMPLEXE
31
3.2.1.1
IN-VITRO-REIFUNG
PORCINER
KUMULUS-OOCYTEN-KOMPLEXE
IN
GEGENWART
VON
KONDITIONIERTEM
MEDIUM,
PORCINEN
UND
BOVINEN
GRANULOSAZELLEN,
SUSPENSIONSKULTUR,
EGF
UND/ODER
FSH
31
3.2.1.1.1
GRANULOSAZELL-MONOLAYER,
SUSPENSIONSKULTUR
UND
KONDITIONIERTES
MEDIUM
32
3.2.1.1.2
IN-VITRO-KOKULTUR
VON
KUMULUS-OOCYTEN-KOMPLEXEN
IN
GEGENWART
VON
HOMOLOGEN
UND
HETEROLOGEN
MONOLAYEM
UND
FRISCHER
SUSPENSIONSKULTUR
33
3.2.1.1.3
IN-VITRO-KOKULTUR
VON
KUMULUS-OOCYTEN-KOMPLEXEN
IN
GEGENWART
VON
FSH
UND
EGF
MIT
UND
OHNE
GRANULOSAZELLEN
DER
SUSPENSIONSKULTUR
33
3.2.1.2
EINFLUSS
HOCHGEREINIGTER
GONADOTROPER
HORMONE
AUF
KEMREIFUNG
UND
EXPANSION
DER
KUMULUSZELLEN
34
2
3.2.1.3
EINFLUSS
VON
FOLLIKELFLUESSIGKEIT
AUF
KEMREIFIING
UND
35
BEFRUCHTUNGSPOTENZ
PORCINER
OOCYTEN
3.2.2
EXPERIMENTELLE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
SPERMAKAPAZITATION
UND
IN-
37
VITRO-BEFRUCHTUNG
3.2.2.1
UEBERPRUEFUNG
DER
IN-VITRO-BEFRUCHTUNGSPOTENZ
VON
EBERSPERMA
37
NACH
KAPAZITATION
IM
EXENTERIERTEN
UTERUSHOM
ODER
IM
KAPAZITATIONSMEDIUM
3.2.2.2
IN-VITRO-BEFRUCHTUNG
MIT
UNTERSCHIEDLICHEN
SPERMIEN-
39
KONZENTRATIONEN
3.2.2.3
IN-VITRO-BEFRUCHTUNG
MIT
EBERSPERMA
NACH
KAPAZITATION
IN
39
GEGENWART
VON
KASEIN-PHOSPHOPEPTIDEN
(CPP)
UND
VERSCHIEDENEN
KALZIUMKONZENTRATIONEN
3.2.2.4
IN-VITRO-BEFRUCHTUNG
MIT
FRISCH
GEWONNENEM
ODER
TIEFGEFRORENEM
40
EJAKULIERTEM
BZW.
AUS
DEM
NEBENHODENSCHWANZ
ISOLIERTEM
EBERSPERMA
3.2.2.4.1
FRISCHSPERMAAUFBEREITUNG
ZUR
IN-VITRO-BEFRUCHTUNG
IN
TALP-
41
MEDIUM
3.2.2.4.2
TIEFGEFRIERPROZESS
FUER
EJAKULIERTES
SPERMA
UND
NEBENHODEN
42
SCHWANZSPERMA
3.2.2.5
ZEITLICHER
ABLAUF
DER
FRUEHEN
BEFRUCHTUNGSEREIGNISSE
NACH
IN-VIVO
42
ODER
IN-VITRO-REIFUNG
DER
KOK
3.2.3
VERGLEICHENDE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
IN-VITRO-KULTUR
IN
VIVO
UND
IN
44
VITRO
ERZEUGTER
EMBRYONEN
4
ERGEBNISSE
46
4.1
IN-VITRO-REIFUNG
PORCINER
KUMULUS-OOCYTEN-KOMPLEXE
46
4.1.1
EINFLUSS
VON
HOMOLOGEN
UND
HETEROLOGEN
KOKULTURSYSTEMEN
SOWIE
46
GRANULOSAZELLEN
AUS
FRISCHER
SUSPENSIONKULTUR
AUF
KUMULUSEXPANSION
UND
KEMREIFUNG
4.1.2
EINFLUSS
VON
KONDITIONIERTEM
MEDIUM
AUF
KUMULUSEXPANSION
UND
47
KEMREIFUNGSRATE
4.1.3
EINFLUSS
VON
FSH
UND/ODER
EGF
UND/ODER
GRANULOSAZELLEN
AUF
DIE
48
WIEDERAUFNAHME
DER
MEIOSE
4.1.4
EINFLUSS
HOCHGEREINIGTER
GONADOTROPER
HORMONE
AUF
KEMREIFUNG
49
UND
KUMULUSEXPANSION
4.1.5
EINFLUSS
PORCINER
FOLLIKELFLUESSIGKEIT
AUF
KEMREIFUNG,
52
BEFRUCHTUNGS
UND
ENTWICKLUNGSPOTENZ
4.2
KAPAZITATION
UND
PRAEPARATION
VON
SPERMA
FUER
DIE
IN-VITRO
54
BEFRUCHTUNG
4.2.1
IN-VITRO-BEFRUCHTUNGSPOTENZ
VON
EBERSPERMA
NACH
KAPAZITATION
54
IM
EXENTERIERTEN
UTERUSHOM
UND
IM
KAPAZITATIONSMEDIUM
4.2.2
IN-VITRO-BEFRUCHTUNG
MIT
UNTERSCHIEDLICHEN
SPERMA-
58
KONZENTRATIONEN
4.2.3
IN-VITRO-BEFRUCHTUNG
IN
ANWESENHEIT
VON
CPP
UND
59
UNTERSCHIEDLICHEN
KALZIUMKONZENTRATIONEN
3
4.2.4
BEFRUCHTUNGSERGEBNISSE
NACH
UNTERSCHIEDLICHER
SPERMA
AUFBEREITUNG
60
4.2.5
ENTWICKLUNGSVERHALTEN
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
GEREIFTER
OOCYTEN
IM
ERSTEN
ZELLZYKLUS
NACH
IN-VITRO-BEFRUCHTUNG
63
4.3
IN-VITRO-ENTWICKLUNG
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
ERZEUGTER
EMBRYONEN
68
4.3.1
IN-VITRO-KULTUR
IN
VIVO
ERZEUGTER
ZWEI
BIS
VIERZELLSTADIEN
68
4.3.2
IN-VITRO-KULTUR
IN
VITRO
ERZEUGTER
ZWEI
BIS
VIERZELLSTADIEN
72
4.3.3
BESTIMMUNG
DES
ANTEILS
VON
INNERER
ZELLMASSE
UND
TROPHOBLASTZELLEN
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
ERZEUGTER
EMBRYONEN
74
4.3.4
ENTWICKLUNG
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
ERZEUGTER
EMBRYONEN
NACH
EMBRYOTRANSFER
77
5
DISKUSSION
79
5.1
IN-VITRO-REIFUNG
PORCINER
KUMULUS-OOCYTEN-KOMPLEXE
79
5.2
SPERMAAUFBEREITUNG
UND
IN-VITRO-BEFRUCHTUNG
85
5.3
ERSTER
ZELLZYKLUS
BEI
IN
VIVO
UND
IN
VITRO
GEREIFTEN
OOCYTEN
NACH
IN-VIVO
UND
IN-VITRO-BEFRUCHTUNG
UND
NACHFOLGENDE
ENTWICKLUNGSKOMPETENZ
DER
EMBRYONEN
89
6
ZUSAMMENFASSENDE
BETRACHTUNG
UND
SCHLUSSFOLGERUNGEN
97
7
ZUSAMMENFASSUNG
99
8
SUMMARY
103
9
SCHRIFTTUMVERZEICHNIS
106
10
ANHANG
124 |
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