Praxis der Hochleistungs-Flüssigchromatographie:
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| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Book |
| Language: | German |
| Published: |
Weinheim
WILEY-VCH Verl.
2009
|
| Edition: | 10., vollst. überarb. und erw. Aufl. |
| Subjects: | |
| Online Access: | Inhaltstext Inhaltsverzeichnis Klappentext |
| Physical Description: | XIV, 382 S. Ill., graph. Darst. |
| ISBN: | 9783527320462 |
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|---|---|
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VII
Inhaltsverzeichnis
Vorwort zur zehnten Auflage XIII
Vorwort zur ersten Auflage XIV
0 Wichtige und nützliche Gleichungen für die HPLC 1
1 Einleitung 5
1.1 HPLC: Eine leistungsfähige Trennmethode 5
1.2 Ein erstes HPLC-Experiment 6
1.3 Die flüssigchromatographischen Trennverfahren 7
1.4 Die HPLC-Appararur 10
1.5 Sicherheit am HPLC-Arbeitsplatz 10
1.6 Vergleich von Hochleistungs-Flüssigchromatographie und
Gaschromatographie 12
1.7 Vergleich von Hochleistungs-Flüssigchromatographie und
Kapillarelektrophorese 13
1.8 Verschiedene Maßeinheiten 14
1.9 Wissenschaftliche Zeitschriften
J
5
1.10 Empfehlenswerte Bücher 16
2 Theoretische Crundlagen 17
2.1 Der chromatographische Prozess 17
2.2 Bandenverbreiterung 19
2.3 Das Chromatogramm und seine Aussage 24
2.4 Graphische Darstellungen von Peakpaaren mit verschiedener
Auflösung 30
2.5 Die Beeinflussung der Auflösung 35
2.6 Totvolumina (extra-column-Volumina) 39
2.7
Tailing
41
2.8 Peakkapazität und statistische Auflösungswahrscheinlichkeit 45
2.9 Temperatureinflüsse in der HPLC 48
2.10 Die Grenzen der HPLC 50
2.11 Wie erreicht man Peakkapazität? 54
Praxis der Hochleistungs-Flüssigchromatographie,
Ì0.
Außage. Veronika R. Meyer
Copyright © 2009 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim
ISBN:
978-3-527-Î2046-2
Vlili
Inhaltsverzeichnis
3 Pumpen 56
3.1 Allgemeines 56
3.2 Die Kurzhub-Kolbenpumpe 57
3.3 Unterhalt und Reparaturen 59
3.4 Andere Pumpentypen
6Î
4 Bereitstellung der Apparatur bis zur Probenaufgabe 62
4.1 Auswahl der mobilen Phase 62
4.2 Vorbereitung der mobilen Phase 64
4.3 Gradientensysteme 66
4.4 Kapillarleitungen 67
4.5
Fittings
70
4.6 Probenaufgabesysteme 71
4.7 Probelösung und Probevolumen 75
5 Lösungsmitteleigenschaften 77
5.1 Tabelle organischer Lösungsmittel 77
5.2 Lösungsmittelselektivität 79
5.3 Mischbarkeit 80
5.4 Puffer 81
5.5 Haltbarkeit von mobilen Phasen 83
5.6 Das Mischungskreuz 84
6 Detektoren 86
6.1 Allgemeines 86
6.2 UV-Detektoren 91
6.3 Brechungsindex-Detektoren 94
6.4 Fluoreszenz-Detektoren 96
6.5 Elektrochemische (amperometrische) Detektoren 97
6.6 Lichtstreuungs-Detektoren 100
6.7 Andere Detektoren 101
6.8 Mehrfachdetektion 102
6.9 Indirekte Detektion 103
6.10 Kopplung mit Spektroskopie 104
7 Säulen und stationäre Phasen 111
7.1 Säulen für die HPLC 111
7.2 Vorsäulen 113
7.3 Allgemeines über stationäre Phasen 314
7.4 Silicagel 119
7.5 Chemisch modifiziertes Silicagel 121
7.6 Styrol-Divinylbenzol 125
7.7 Einige weitere stationäre Phasen 127
7.8 Vorsichtsmaßnahmen und Regeneration 131
Inhaksverzeichnis I
IX
8 Das Testen von HPLC-Säulen 135
8.1 Einfache Tests für HPLC-Säulen 135
8.2 Bestimmung der Korngröße 137
8.3 Bestimmung der Totzeit 138
8.4 Das Testgemisch 140
8.5 Dimensionslose Größen zur Charakterisierung von HPLC-Säulen 141
8.6 Die van Deemter-Gleichung aus reduzierten Größen und ihre
Nützlichkeit für die Säulendiagnose 145
8.7 van Deemier-Kurven und andere Zusammenhänge 147
8.8 Diffusionskoeffizienten 149
9 Adsorptions-Chromatographie 152
9.1 Was heißt Adsorption ? 152
9.2 Die eluotrope Reihe 154
9.3 Selektivitätseigenschaften der mobilen Phase 157
9.4 Wahl und Optimierung der mobilen Phase 158
9.5 Anwendungsbeispiele 160
10 Umkehrphasen-Chromatographie 164
10.1 Prinzip 164
10.2 Mobile Phasen in der Umkehrphasen-Chromatographie 165
10.3 Selektivität und Stärke der mobilen Phase 168
10.4 Stationäre Phasen 170
10.5 Methodenentwicklung in der Umkehrphasen-Chromatographie 177
10.6 Anwendungsbeispiele 178
10.7 Hydrophobic-Interaction-Chromatographie 182
11 Chromatographie mit chemisch gebundenen Phasen 184
11.1 Einführung 184
11.2 Eigenschaften spezieller Phasen 184
11.3 Hydrophilic-Interaction-Chromatographie 187
12 lonenaustausch-Chromatographie 190
12.1 Einführung 190
12.2 Prinzip 190
12.3 Eigenschaften von Ionenaustauschern 191
12.4 Der Einfluss der mobilen Phase 194
12.5 Spezielle Möglichkeiten für den lonenaustausch 195
12.6 Praktische Hinweise 196
12.7 Anwendungsbeispiele 199
13 lonenpaar-Chromatographie 202
13.1 Einführung 202
13.2 Praxis der Ionenpaar-Chromatographie 203
13.3 Anwendungsbeispiele 206
Inhaltsverzeichnis
13.4 Anhang: UV-Detektion mit Hilfe von Ionenpaar-Reagenzien 206
14 lonenchromatographie 209
14.1 Prinzip 209
14.2 Unterdrückungstechniken 210
14.3 Phasensysteme 212
14.4 Anwendungen 213
15 Ausschluss-Chromatographie 225
15.1 Prinzip 215
15.2 Das Kalibrierchromatogramm 218
15.3 Molekülmassenbestimmungen mit Ausschluss-Chromatographie 221
15.4 Hintereinanderschalten von Ausschluss-Säulen 223
15.5 Phasensysteme 225
15.6 Anwendungen 226
16 Affinitäts-Chromatographie 231
16.1 Prinzip 231
16.2 Affinitäts-Chromatographie als Spezialfall der HPLC 232
16.3 Anwendungsbeispiele 234
17 Wahl der Methode 237
17.1 Die verschiedenen Möglichkeiten 237
17.2
Memodentransfer
243
18 Möglichkeiten zur Lösung des Elutionsproblems 244
18.1 Das Elutionsproblem 244
18.2 Lösungsmittelgradienten 245
18.3 Säulen zusammenschalten 249
18.4
Comprehensive zweidimensionale
HPLC 251
18.5 Die Optimierung eines isokratischen Chromatogramms mit vier
Lösungsmitteln 254
18.6 Die Optimierung der übrigen Parameter 258
18.7 Gemischte stationäre Phasen 262
19 Analytische HPLC 264
19.1 Qualitative Analyse 264
19.2 Spurenanalyse 266
19.3 Quantitative Analyse 270
19.4 Wiederfindung 275
19.5 Peakhöhen- und Peakflächenmessung zur quantitativen Analyse 277
19.6 Integrationsfehler 280
19.7 Die Detektionswellenlänge 283
19.8 Derivatisierung 284
19.9 Unerwartete
Peaks
: Geister-und Systempeaks 287
Inhaltsverzeichnis
I XI
20 Qualitätssicherung 289
20.1 Wozu der Aufwand? 289
20.2 Verifizierung mit einer zweiten Methode 290
20.3 Methodenvalidierung 290
20.4 Standard-Arbeitsanweisungen (SOP's) 292
20.5 Messunsicherheit 293
20.6 Qualifikationen, Gerätetest und Systemeignungstest 295
20.7 Qualitätssicherungsmaßnahmen 296
21 Präparative HPLC 299
21.1 Problemstellung 299
21.2 Die Praxis der präparativen HPLC 300
21.3 Überladungseffekte 303
21.4 Proben sammeln 306
21.5 Rezyklieren 307
21.6 Verdrängungs-Chromatographie 308
22 Trennung von Enantiomeren 310
22.1 Problemstellung 320
22.2 Chirale mobile Phasen 312
22.3 Chirale flüssige stationäre Phasen 313
"LIA
Chirale feste stationäre Phasen 314
22.5 Indirekte Enantiomerentrennung 320
23 Spezielle Möglichkeiten 323
23.1
Mikro-,
Kapillar- und Chip-HPLC 323
23.2 Schnelle und superschnelle HPLC 324
23.3 Schnelle Trennungen bei 1000 bar: UPLC 328
23.4 HPLC mit superkritischen mobilen Phasen: SFC 330
23.5 HPLC mit superheißem Wasser 332
23.6 Elektrochromatographie 334
24 Anhang 1: Angewandte
H
PLC-Theorie 336
25 Anhang 2: Durchführung des Gerätetests 345
25.1 Allgemeines 345
25.2 Testablauf 345
25.3 Vorbereitung 346
25.4 Leistungsüberprüfung der Pumpen 350
25.5 Leistungsüberprüfung des UV-Detektors 353
25.6 Leistungsüberprüfung des Autosampiers 354
25.7 Leistungsüberprüfung des Säulenofens 355
25.8 Formeln und Berechnungen 356
25.9 Dokumentation 356
XII
I
Inhaltsverzeichnis
26 Anhang 3: Ursachen und Behebung von Problemen in der HPLC 357
26.1 Druckprobleme 357
26.2 Leck am Pumpensystem 359
26.3 Abweichung von Retentionszeiten 359
26.4 Injektionsprobleme 360
26.5 Basislinienprobleme 361
26.6 Probleme mit der Peakform 363
26.7 Probleme bei Lichtstreuungs-Detektoren (ELSD) 364
26.8 Weitere Ursachen 365
26.9 Leistungsüberprüfung 366
27 Anhang 4: Füllen von HPLC-Säulen 367
Register der Stofftrennungen 371
Sachregister 373
Uie
inzwischen zehnte Auflage dieses bewährten Standard-Lehr¬
buches der HPLC hat eine Verjüngungskur erfahren: die Qualitäts¬
sicherung wird in einem eigenen Kapitel ausführlicher dargestellt und
die Problembehebung ist entsprechend ihrer gewachsenen Bedeutung
gründlich überarbeitet und erweitert worden.
Aktualisiert oder neu hinzugekommen sind: Methodenvergleich
(HPLC / Kapillarelektrophorese), Peakkapazität, Mischungskreuz,
Van Deemter-Kurven, Hydrophilic
Interaction
Chromatographie,
Methodentransfer,
Comprehensive
zweidimensionale HPLC, schnelle
Trennungen bei 1000 bar (UPLC), HPLC mit superheißem Wasser
und viele aktuelle Literaturzitate.
Der Text ist im gewohnten Layout mit Randspalte gesetzt, die die
Kommentare zum Text enthält. Auf diese Weise kann trotz enormer
Informationsdichte die Lesbarkeit und Übersichtlichkeit gewahrt
werden. Auch heute noch benötigen Anwender der HPLC ein breites
theoretisches und praktisches Wissen. Veronika Meyer vermittelt
beides: Theorie und apparative Grundlagen, mit unzähligen Tren¬
nungsbeispielen, mit noch mehr Diagrammen und Schemazeich¬
nungen reichlich bebildert und abgerundet mit Übungsaufgaben,
durch die sich der Stoff vertiefen lässt. |
| adam_txt |
VII
Inhaltsverzeichnis
Vorwort zur zehnten Auflage XIII
Vorwort zur ersten Auflage XIV
0 Wichtige und nützliche Gleichungen für die HPLC 1
1 Einleitung 5
1.1 HPLC: Eine leistungsfähige Trennmethode 5
1.2 Ein erstes HPLC-Experiment 6
1.3 Die flüssigchromatographischen Trennverfahren 7
1.4 Die HPLC-Appararur 10
1.5 Sicherheit am HPLC-Arbeitsplatz 10
1.6 Vergleich von Hochleistungs-Flüssigchromatographie und
Gaschromatographie 12
1.7 Vergleich von Hochleistungs-Flüssigchromatographie und
Kapillarelektrophorese 13
1.8 Verschiedene Maßeinheiten 14
1.9 Wissenschaftliche Zeitschriften
J
5
1.10 Empfehlenswerte Bücher 16
2 Theoretische Crundlagen 17
2.1 Der chromatographische Prozess 17
2.2 Bandenverbreiterung 19
2.3 Das Chromatogramm und seine Aussage 24
2.4 Graphische Darstellungen von Peakpaaren mit verschiedener
Auflösung 30
2.5 Die Beeinflussung der Auflösung 35
2.6 Totvolumina (extra-column-Volumina) 39
2.7
Tailing
41
2.8 Peakkapazität und statistische Auflösungswahrscheinlichkeit 45
2.9 Temperatureinflüsse in der HPLC 48
2.10 Die Grenzen der HPLC 50
2.11 Wie erreicht man Peakkapazität? 54
Praxis der Hochleistungs-Flüssigchromatographie,
Ì0.
Außage. Veronika R. Meyer
Copyright © 2009 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim
ISBN:
978-3-527-Î2046-2
Vlili
Inhaltsverzeichnis
3 Pumpen 56
3.1 Allgemeines 56
3.2 Die Kurzhub-Kolbenpumpe 57
3.3 Unterhalt und Reparaturen 59
3.4 Andere Pumpentypen
6Î
4 Bereitstellung der Apparatur bis zur Probenaufgabe 62
4.1 Auswahl der mobilen Phase 62
4.2 Vorbereitung der mobilen Phase 64
4.3 Gradientensysteme 66
4.4 Kapillarleitungen 67
4.5
Fittings
70
4.6 Probenaufgabesysteme 71
4.7 Probelösung und Probevolumen 75
5 Lösungsmitteleigenschaften 77
5.1 Tabelle organischer Lösungsmittel 77
5.2 Lösungsmittelselektivität 79
5.3 Mischbarkeit 80
5.4 Puffer 81
5.5 Haltbarkeit von mobilen Phasen 83
5.6 Das Mischungskreuz 84
6 Detektoren 86
6.1 Allgemeines 86
6.2 UV-Detektoren 91
6.3 Brechungsindex-Detektoren 94
6.4 Fluoreszenz-Detektoren 96
6.5 Elektrochemische (amperometrische) Detektoren 97
6.6 Lichtstreuungs-Detektoren 100
6.7 Andere Detektoren 101
6.8 Mehrfachdetektion 102
6.9 Indirekte Detektion 103
6.10 Kopplung mit Spektroskopie 104
7 Säulen und stationäre Phasen 111
7.1 Säulen für die HPLC 111
7.2 Vorsäulen 113
7.3 Allgemeines über stationäre Phasen 314
7.4 Silicagel 119
7.5 Chemisch modifiziertes Silicagel 121
7.6 Styrol-Divinylbenzol 125
7.7 Einige weitere stationäre Phasen 127
7.8 Vorsichtsmaßnahmen und Regeneration 131
Inhaksverzeichnis I
IX
8 Das Testen von HPLC-Säulen 135
8.1 Einfache Tests für HPLC-Säulen 135
8.2 Bestimmung der Korngröße 137
8.3 Bestimmung der Totzeit 138
8.4 Das Testgemisch 140
8.5 Dimensionslose Größen zur Charakterisierung von HPLC-Säulen 141
8.6 Die van Deemter-Gleichung aus reduzierten Größen und ihre
Nützlichkeit für die Säulendiagnose 145
8.7 van Deemier-Kurven und andere Zusammenhänge 147
8.8 Diffusionskoeffizienten 149
9 Adsorptions-Chromatographie 152
9.1 Was heißt Adsorption ? 152
9.2 Die eluotrope Reihe 154
9.3 Selektivitätseigenschaften der mobilen Phase 157
9.4 Wahl und Optimierung der mobilen Phase 158
9.5 Anwendungsbeispiele 160
10 Umkehrphasen-Chromatographie 164
10.1 Prinzip 164
10.2 Mobile Phasen in der Umkehrphasen-Chromatographie 165
10.3 Selektivität und Stärke der mobilen Phase 168
10.4 Stationäre Phasen 170
10.5 Methodenentwicklung in der Umkehrphasen-Chromatographie 177
10.6 Anwendungsbeispiele 178
10.7 Hydrophobic-Interaction-Chromatographie 182
11 Chromatographie mit chemisch gebundenen Phasen 184
11.1 Einführung 184
11.2 Eigenschaften spezieller Phasen 184
11.3 Hydrophilic-Interaction-Chromatographie 187
12 lonenaustausch-Chromatographie 190
12.1 Einführung 190
12.2 Prinzip 190
12.3 Eigenschaften von Ionenaustauschern 191
12.4 Der Einfluss der mobilen Phase 194
12.5 Spezielle Möglichkeiten für den lonenaustausch 195
12.6 Praktische Hinweise 196
12.7 Anwendungsbeispiele 199
13 lonenpaar-Chromatographie 202
13.1 Einführung 202
13.2 Praxis der Ionenpaar-Chromatographie 203
13.3 Anwendungsbeispiele 206
Inhaltsverzeichnis
13.4 Anhang: UV-Detektion mit Hilfe von Ionenpaar-Reagenzien 206
14 lonenchromatographie 209
14.1 Prinzip 209
14.2 Unterdrückungstechniken 210
14.3 Phasensysteme 212
14.4 Anwendungen 213
15 Ausschluss-Chromatographie 225
15.1 Prinzip 215
15.2 Das Kalibrierchromatogramm 218
15.3 Molekülmassenbestimmungen mit Ausschluss-Chromatographie 221
15.4 Hintereinanderschalten von Ausschluss-Säulen 223
15.5 Phasensysteme 225
15.6 Anwendungen 226
16 Affinitäts-Chromatographie 231
16.1 Prinzip 231
16.2 Affinitäts-Chromatographie als Spezialfall der HPLC 232
16.3 Anwendungsbeispiele 234
17 Wahl der Methode 237
17.1 Die verschiedenen Möglichkeiten 237
17.2
Memodentransfer
243
18 Möglichkeiten zur Lösung des Elutionsproblems 244
18.1 Das Elutionsproblem 244
18.2 Lösungsmittelgradienten 245
18.3 Säulen zusammenschalten 249
18.4
Comprehensive zweidimensionale
HPLC 251
18.5 Die Optimierung eines isokratischen Chromatogramms mit vier
Lösungsmitteln 254
18.6 Die Optimierung der übrigen Parameter 258
18.7 Gemischte stationäre Phasen 262
19 Analytische HPLC 264
19.1 Qualitative Analyse 264
19.2 Spurenanalyse 266
19.3 Quantitative Analyse 270
19.4 Wiederfindung 275
19.5 Peakhöhen- und Peakflächenmessung zur quantitativen Analyse 277
19.6 Integrationsfehler 280
19.7 Die Detektionswellenlänge 283
19.8 Derivatisierung 284
19.9 Unerwartete
Peaks
: Geister-und Systempeaks 287
Inhaltsverzeichnis
I XI
20 Qualitätssicherung 289
20.1 Wozu der Aufwand? 289
20.2 Verifizierung mit einer zweiten Methode 290
20.3 Methodenvalidierung 290
20.4 Standard-Arbeitsanweisungen (SOP's) 292
20.5 Messunsicherheit 293
20.6 Qualifikationen, Gerätetest und Systemeignungstest 295
20.7 Qualitätssicherungsmaßnahmen 296
21 Präparative HPLC 299
21.1 Problemstellung 299
21.2 Die Praxis der präparativen HPLC 300
21.3 Überladungseffekte 303
21.4 Proben sammeln 306
21.5 Rezyklieren 307
21.6 Verdrängungs-Chromatographie 308
22 Trennung von Enantiomeren 310
22.1 Problemstellung 320
22.2 Chirale mobile Phasen 312
22.3 Chirale flüssige stationäre Phasen 313
"LIA
Chirale feste stationäre Phasen 314
22.5 Indirekte Enantiomerentrennung 320
23 Spezielle Möglichkeiten 323
23.1
Mikro-,
Kapillar- und Chip-HPLC 323
23.2 Schnelle und superschnelle HPLC 324
23.3 Schnelle Trennungen bei 1000 bar: UPLC 328
23.4 HPLC mit superkritischen mobilen Phasen: SFC 330
23.5 HPLC mit superheißem Wasser 332
23.6 Elektrochromatographie 334
24 Anhang 1: Angewandte
H
PLC-Theorie 336
25 Anhang 2: Durchführung des Gerätetests 345
25.1 Allgemeines 345
25.2 Testablauf 345
25.3 Vorbereitung 346
25.4 Leistungsüberprüfung der Pumpen 350
25.5 Leistungsüberprüfung des UV-Detektors 353
25.6 Leistungsüberprüfung des Autosampiers 354
25.7 Leistungsüberprüfung des Säulenofens 355
25.8 Formeln und Berechnungen 356
25.9 Dokumentation 356
XII
I
Inhaltsverzeichnis
26 Anhang 3: Ursachen und Behebung von Problemen in der HPLC 357
26.1 Druckprobleme 357
26.2 Leck am Pumpensystem 359
26.3 Abweichung von Retentionszeiten 359
26.4 Injektionsprobleme 360
26.5 Basislinienprobleme 361
26.6 Probleme mit der Peakform 363
26.7 Probleme bei Lichtstreuungs-Detektoren (ELSD) 364
26.8 Weitere Ursachen 365
26.9 Leistungsüberprüfung 366
27 Anhang 4: Füllen von HPLC-Säulen 367
Register der Stofftrennungen 371
Sachregister 373
Uie
inzwischen zehnte Auflage dieses bewährten Standard-Lehr¬
buches der HPLC hat eine Verjüngungskur erfahren: die Qualitäts¬
sicherung wird in einem eigenen Kapitel ausführlicher dargestellt und
die Problembehebung ist entsprechend ihrer gewachsenen Bedeutung
gründlich überarbeitet und erweitert worden.
Aktualisiert oder neu hinzugekommen sind: Methodenvergleich
(HPLC / Kapillarelektrophorese), Peakkapazität, Mischungskreuz,
Van Deemter-Kurven, Hydrophilic
Interaction
Chromatographie,
Methodentransfer,
Comprehensive
zweidimensionale HPLC, schnelle
Trennungen bei 1000 bar (UPLC), HPLC mit superheißem Wasser
und viele aktuelle Literaturzitate.
Der Text ist im gewohnten Layout mit Randspalte gesetzt, die die
Kommentare zum Text enthält. Auf diese Weise kann trotz enormer
Informationsdichte die Lesbarkeit und Übersichtlichkeit gewahrt
werden. Auch heute noch benötigen Anwender der HPLC ein breites
theoretisches und praktisches Wissen. Veronika Meyer vermittelt
beides: Theorie und apparative Grundlagen, mit unzähligen Tren¬
nungsbeispielen, mit noch mehr Diagrammen und Schemazeich¬
nungen reichlich bebildert und abgerundet mit Übungsaufgaben,
durch die sich der Stoff vertiefen lässt. |
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