Rhinoviren stimulieren die RANTES- und Eotaxin-Produktion in nasalen Fibroblasten:
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| adam_text | Titel: Rhinoviren stimulieren die RANTES- und Eotaxin-Produktion in nasalen Fibroblasten
Autor: Stangenberg, Stefanie
Jahr: 2006
INHALTSVERZEICHNIS
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 Die chronisch polypöse Sinusitis 1
1.2 Die Rolle des eosinophilen Granulozyten bei der chronisch polypösen Sinusitis 2
1.3 Chemotaxis und Chemokine in der Nasenschleimhaut 4
1.4 Die Rolle von Rhinoviren bei der Cbemotaxis eosinophiler Granulozyten 5
1.5 Fragestellung und Ziele der Arbeit 6
2 METHODEN 8
2.1 Zellkulturen 8
2.1.1 Primäre Kultur nasaler Fibroblasten 8
2.1.2 Subkultivierung der Zellen 8
2.2 Herkunft und Vermehrung der Rhinoviren 9
2.3 Bestimmung der LD50 9
2.4 Inkubation von nasalen Fibroblasten mit humanem Rhinovirus 16 (HRV-16). 10
2.5 Genexpressionsanalysen 10
2.5.1 RNA-Isolation 10
2.5.2 Semiquantitative Reverse Transkription-Polymerase Kettenreaktion (SQRT-PCR) 12
2.5.2.1 Reverse Transkription (RT) 12
2.5.2.2 Polymerase Kettenreaktion (PCR) 13
2.5.3 Gelelektrophorese 14
2.5.4 Densitometrie 14
2.6 Proteinmessungen 15
2.6.1 Doppelsandwich-ELISA 15
2.7 Statistische Methoden 16
3 ERGEBNISSE 17
3.1 LD;o-Bestimmung 17
3.2 Untersuchungen zur CC-Chemokin-Expression 19
3.2.1 Isolierung von RNA aus nasalen Fibroblasten 19
3.2.2 RANTES-Genexpression 20
3.2.3 Eotaxin-Genexpression 21
3.3 ELISA-Untersuchungen zum Proteingehalt in Mediumüberständen 22
3.3.1 RANTES-Sekretion 22
3.3.2 Eotaxin-Sekretion 23
4 DISKUSSION 24
4.1 Kritik der Methode 24
4.2 Die pathogenetische Bedeutung von Rhinovirusinfektionen bei der chronisch
polypösen Sinusitis und verwandten Atemwegserkrankungen 25
4.3 Induktion von RANTES und Eotaxin in der Nasenschleimhaut durch
Rhinoviren 27
4.4 Therapieansätze und Ausblick 30
5 ZUSAMMENFASSUNG 33
6 LITERATURVERZEICHNIS 35
7 DANKSAGUNG 46
8 LEBENSLAUF 47
|
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Titel: Rhinoviren stimulieren die RANTES- und Eotaxin-Produktion in nasalen Fibroblasten
Autor: Stangenberg, Stefanie
Jahr: 2006
INHALTSVERZEICHNIS
ABKÜRZUNGSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
1.1 Die chronisch polypöse Sinusitis 1
1.2 Die Rolle des eosinophilen Granulozyten bei der chronisch polypösen Sinusitis 2
1.3 Chemotaxis und Chemokine in der Nasenschleimhaut 4
1.4 Die Rolle von Rhinoviren bei der Cbemotaxis eosinophiler Granulozyten 5
1.5 Fragestellung und Ziele der Arbeit 6
2 METHODEN 8
2.1 Zellkulturen 8
2.1.1 Primäre Kultur nasaler Fibroblasten 8
2.1.2 Subkultivierung der Zellen 8
2.2 Herkunft und Vermehrung der Rhinoviren 9
2.3 Bestimmung der LD50 9
2.4 Inkubation von nasalen Fibroblasten mit humanem Rhinovirus 16 (HRV-16). 10
2.5 Genexpressionsanalysen 10
2.5.1 RNA-Isolation 10
2.5.2 Semiquantitative Reverse Transkription-Polymerase Kettenreaktion (SQRT-PCR) 12
2.5.2.1 Reverse Transkription (RT) 12
2.5.2.2 Polymerase Kettenreaktion (PCR) 13
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2.5.4 Densitometrie 14
2.6 Proteinmessungen 15
2.6.1 Doppelsandwich-ELISA 15
2.7 Statistische Methoden 16
3 ERGEBNISSE 17
3.1 LD;o-Bestimmung 17
3.2 Untersuchungen zur CC-Chemokin-Expression 19
3.2.1 Isolierung von RNA aus nasalen Fibroblasten 19
3.2.2 RANTES-Genexpression 20
3.2.3 Eotaxin-Genexpression 21
3.3 ELISA-Untersuchungen zum Proteingehalt in Mediumüberständen 22
3.3.1 RANTES-Sekretion 22
3.3.2 Eotaxin-Sekretion 23
4 DISKUSSION 24
4.1 Kritik der Methode 24
4.2 Die pathogenetische Bedeutung von Rhinovirusinfektionen bei der chronisch
polypösen Sinusitis und verwandten Atemwegserkrankungen 25
4.3 Induktion von RANTES und Eotaxin in der Nasenschleimhaut durch
Rhinoviren 27
4.4 Therapieansätze und Ausblick 30
5 ZUSAMMENFASSUNG 33
6 LITERATURVERZEICHNIS 35
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