TGF-b1-induzierte Deposition extrazellulärer Matrixproteine im Tiermodell transgener eNOS+/--Mäuse:
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Giessen
VVB Laufersweiler
2009
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 1
1. EINLEITUNG 5
1.1 HERZINSUFFIZIENZ: EPIDEMIOLOGIE UND PATHOPHYSIOLOGIE 5
1.1.1 NEUROHORMONALE KOMPENSATIONSMECHANISMEN 7
1.1.2 DAS HERZINSUFFIZIENZ-MODELL IN DIESER ARBEIT 8
1.2 STICKSTOFFMONOXID (NO) UND STICKSTOFFMONOXID-SYNTHASEN (NOS) 9
1.2.1 DIE ENDOTHELIALE NO-SYNTHASE 10
1.2.2 NO IN KARDIOMYOZYTEN 11
1.3 DER TRANSFORMING GROWTH FACTOR 12
1.3.1 WIRKUNGEN VON TGF-SS, 12
1.4 DIE EXTRAZELLULAERE MATRIX 14
1.4.1 DIE EXTRAZELLULAEREN MATRIXPROTEINE 15
1.5 FRAGESTELLUNG DIESER ARBEIT 16
2. MATERIAL 19
2.1 CHEMIKALIEN 19
2.1.1 ANTIKOERPER 21
2.1.2 PRIMER 21
2.2 GERAETE 23
2.3 VERBRAUCHSMATERIALIEN 25
2.4 EDV 25
2.5 VERSUCHSTIERE 25
3. METHODEN 27
3.1 EINSTUFUNG DER TIERE NACH DISTRESS-SCORE SCHEMA 27
3.2 GENOTYPISIERUNG MITTELS SCHWANZBIOPSIE BEI DER MAUS 28
3.3 BLUTDRUCKMESSUNG BEI DER MAUS 31
3.4 REAL-TIME PCR AM CYCLER 32
3.4.1 RNA-ISOLIERUNG AUS MAEUSEHERZEN 32
3.4.1.1 PRAEPARATION DER MAEUSEHERZEN 32
3.4.1.2 GEWINNUNG VON RNAAUS MAEUSEHERZEN 33
3.4.2 BESTIMMUNG DER RNA-KONZENTRATION 33
3.4.3 CDNA-SYNTHESE (REVERSE TRANSKRIPTION) 34
3.4.4 REAL-TIME POLYMERASE KETTENREAKTION (REAL-TIME PCR) 35
3.4.5 AUSWERTUNG 36
3.5 WESTERN BLOT 37
3.5.1 PRAEPARATION DER MAEUSEHERZEN 37
3.5.2 PROTEINGEWINNUNG AUS MAEUSE-KARDIOMYOZYTEN 37
3.5.3 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 38
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/998454958
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
3.5.4 WESTERN BLOT VERFAHREN 40
3.5.5 IMMUNOLOGISCHER PROTEINNACHWEIS 41
3.5.6 AUSWERTUNG 42
3.6 BESTIMMUNG DER CREATININ-KONZENTRATION AUS MAEUSEPLASMA 43
3.7 COMPUTERPROGRAMME UND STATISTIK 45
4. ERGEBNISSE 46
4.1 DARSTELLUNG DER ZUCHTERGEBNISSE 46
4.1.1 NACHKOMMEN DER ZUCHTANSAETZE A UND B 46
4.1.2 UEBERLEBENSRATEN DER NACHKOMMEN UEBER 6 MONATE 47
4.1.3 BEURTEILUNG DES GESUNDHEITSZUSTANDES (NACH DISTRESS SCORE-SCHEMA)
48
4.2 ERGEBNISSE DER BLUTDRUCKMESSUNG 50
4.3 ORGANUNTERSUCHUNG 51
4.3.1 UNTERSUCHUNG VON HERZ, LUNGE UND NIERE 51
4.3.2 ERGEBNISSE DER CREATININ-UNTERSUCHUNG AUS PLASMAPROBEN 53
4.4 PCR UNTERSUCHUNG VON HERZ, LUNGE UND NIERE 54
4.4.1 GENEXPRESSION DER MATRIXPROTEINE IN ENOS* + TGF-SS, NTG TIEREN 55
4.4.2 GENEXPRESSION DER MATRIXPROTEINE IN ENOS* + TGF-SS, TG TIEREN 59
4.4.3 GENEXPRESSION VON MMP-12 BEI MAENNCHEN UND WEIBCHEN IM VERGLEICH 63
4.4.4 GENEXPRESSION VON ANP UND BNP BEI MAENNCHEN UND WEIBCHEN IM
VERGLEICH 64
4.4.5 GENEXPRESSION VON ENOS UND ODC BEI WEIBCHEN UND MAENNCHEN 66
4.4.6 GENEXPRESSION VON BCL-2 UND BAX BEI WEIBCHEN UND MAENNCHEN 67
4.4.7 GENEXPRESSION VON SERCA 2A UND NCX BEI WEIBCHEN UND MAENNCHEN 69
4.4.8 GENEXPRESSION VON PHOSPHOLAMBAN BEI WEIBCHEN UND MAENNCHEN 71
4.5 ERGEBNISSE DER WESTERN BLOT-UNTERSUCHUNG 73
4.5.1 PROTEINEXPRESSION VON ELASTIN UND KOLLAGEN-1 IN ENOS* + TGF-SS,
NTG TIEREN 73
4.5.2 PROTEINEXPRESSION VON ELASTIN UND KOLLAGEN-1 IN ENOS* + TGF-SS, TG
TIEREN.. 75
4.5.3 PROTEINEXPRESSION VON BCL-2 UND BAX IN ENOS+/- + TGF-SS1 NTG TIEREN
76
4.5.4 PROTEINEXPRESSION VON BCL-2 UND BAX IN ENOS+/- + TGF-SS1 TG TIEREN
77
4.5.5 PROTEINEXPRESSION VON SERCA 2A IN ENOS+/- + TGF-SS1 NTG TIEREN 78
4.5.6 PROTEINEXPRESSION VON SERCA 2A IN ENOS+/- + TGF-SS1 TG TIEREN 79
5. DISKUSSION 80
5.1 BEURTEILUNG DER ZUCHTERGEBNISSE UND DES GESUNDHEITSZUSTANDES 80 5.2
BEURTEILUNG DER PCR UND WESTERN BLOT UNTERSUCHUNGEN 82
5.2.1 FIBROSEMARKER 82
5.2.2 HYPERTROPHIEMARKER 84
5.2.3 APOPTOSEMARFCER 87
5.2.4 CALCIUM-HANDLING PROTEINE 88
5.2.5 GEWEBESPEZIFISCHE VERAENDERUNGEN 89
6. ZUSAMMENFASSUNG 91
II
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
7. SUMMARY 93
8. LITERATURVERZEICHNIS 95
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