Analytik von Metabolisierungsprodukten antioxidativ wirksamer Substanzen aus Honeybush (Cyclopia spp.) in vivo:
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Berlin
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2010
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IMAGE 1
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG . . ** * .-*. **** 1
2, THEORETISCHE GRUNDLAGEN 3
2.1. DIE HONEYBUSHPFLANZE (CYCLOPIA SPP.) UND IHRE INHALTSSLOFFE 3
2.2. EIGENSCHAFTEN UND WIRKUNGEN DER UNTERSUCHTEN INHALTSSTOFFE 4
2.3. RESORPTIONSVERHALTEN UND METABOLISMUS 6
2.4. EINFLUSS DER DARMMIKROFLORA 10
2.5. BISHERIGE ANALYTIK DER UNTERSUCHTEN INHALTSSTOFFE 12
2.6. THEORETISCHE GRUNDLAGEN DER VERWENDETEN ANALYSENTECHNIKEN 16
2.6.1. HOCHLEISTUNGSFLUESSIGKEITSCHROMATOGRAPHIE - HPLC 16
2.6.2. GASCHROMATOGRAPHIE - GC 17
2.7. MASSENSPEKTROMETRIE -MS. 18
2.7.1. IONENQUELLE 19
2.7.2. MASSENANALYSALOR 20
2.7.3. DETEKTOR 22
2.8. FESTPHASENEXTRAKTION - SPE 23
3. ENTWICKLUNG VON METHODEN ZUR METABOLITENIDENTIFLZIERUNG UND
QUANTIFIZIERUNG 25
3.1. ENTWICKLUNG EINER HPLC-UV-METHODE 25
3.2. ENTWICKLUNG GEEIGNETER AUFARBEITUNGSMETHODEN FUER DIE MATRICES
BLUTPLASMA UND URIN 26 3.2.1. AUFARBEITUNG DER BLUTPLASMAPROBEN OHNE
ENZYMATISCHE BEHANDLUNG 27 3.2.2. AUFARBEITUNG DER URINPROBEN OHNE
ENZYMATISCHE BEHANDLUNG 28
3.2.3. ENZYMATISCHE BEHANDLUNG DER URIN- UND BLUTPLASMAPROBEN 28
3.3. HPLC-UV-UNTERSUCHUNGEN VON BLUTPLASMA- UND URINPROBEN NACH
VERABREICHUNG VON CYCLOPIA INTERMEDIA (HONEYBUSH) EXTRAKTEN AN EIN
SCHWEIN 29
3.4. ENTWICKLUNG VON HPLC-MS-METHODEN ZUR CHARAKTERISIERUNG UND
QUANTIFIZIERUNG VON MANGIFERIN UNDHESPERIDIN SOWIE IHRER
METABOLISATIONSPRODUKTE 30
3.4.1. IONISIERUNGSMODUS 30
3.4.2. OPTIMIERUNG DER IONISIERUNG UND DER MASSENSPEKTROMETRISCHEN
BEDINGUNGEN 31 3.4.3. ENTWICKLUNG DER HPLC-METHODE 31
3.4.4. HPLC-ES1-MS FUELL SCAN-MESSUNGEN DER VERGLEICHSSUBSTANZEN 32
3.4.5. HPLC-ESI-MS"-FUELL SCAN UNTERSUCHUNGEN DER VERGLEICHSSUBSTANZEN 36
3.4.6. HPLC-ESI-MS DATA DEPENDENT UNTERSUCHUNGEN 37
3.4.7. IDENTIFIZIERUNG VON METABOLITEN DER AUSGANGSSUBSTANZEN MANGIFERIN
UND HESPERIDIN MIT HILFE DER HPLC-ESI-MS DATA DEPENDENT UNTERSUCHUNGEN
38
3.4.8. QUANTIFIZIERUNG UEBER HPLC-ESI-MS FUELL SCAN EXPERIMENTE 40
3.5. ENTWICKLUNG GEEIGNETER AUFARBEITUNGSMETHODEN FUER DIE MATRIX FAEZES
40
3.5.1. AUFARBEITUNG DER FAEZESPROBEN LUR HPLC-ESI-MS UNTERSUCHUNGEN 42
3.6. EIGNUNGSTESTS DER ENTWICKELTEN METHODEN 42
3.6.1. REGRESSIONSANALYSE DER KALIBRIERDATEN VON MANGIFERIN, HESPERETIN,
HESPERIDIN UND ERIODICTYOL - HPLC-ESI-MS FUELL SCAN 42
3.6.2. NACHWEISGRENZEN VON MANGIFERIN, HESPERETIN, HESPERIDIN UND
ERIODICTYOL IN LOESUNGSMITTEL - HPLC-ESI-MS FUELL SCAN 43
3.6.3. NACHWEISGRENZEN VON MANGIFERIN, HESPERETIN, HESPERIDIN UND
ERIODICTYOL IN DEN MATRICES BLUTPLASMA, URIN UND FAEZES- HPLC-ESI-MS FUELL
SCAN 43
3.6.4. WIEDERFINDUNG UND WIEDERHOLPRAEZISION- HPLC-ESI-MS FUELL SCAN 44
3.6.4.1 WIEDERFINDUNG UND WIEDERHOLPRAEZISION VON MANGIFERIN, HESPERETIN
UND HESPERIDIN IN BLUTPLASMA OHNE UND NACH ENZYMATISCHER BEHANDLUNG 44
3.6.4.2 WIEDERFINDUNG UND WIEDERHOLPRAEZISION VON MANGIFERIN, HESPERETIN
UND HESPERIDIN IN URIN OHNE UND NACH ENZYMATISCHER BEHANDLUNG 45
3.6.4.3 WIEDERFINDUNG UND WIEDERHOLPRAEZISION VON MANGIFERIN, HESPERETIN
UND HESPERIDIN IN FAEZES 46
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/1004368577
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
3.7. ERGEBNISZUSAMMENFASSUNG UND-BEWERTUNG 47
4. ERGEBNISSE DER FUETTERUNGSEXPERIMENTE 49
4.1. METABOLITENIDENUEFIZIERUNG IN BLUTPLASMA- UND URINPROBEN NACH
VERABREICHUNG EINES CYCLOPIA GENISTOIDES (HONEYBUSH) EXTRAKTES AN EIN
SCHWEIN - FUETTERUNG UEBER 2 TAGE (VORSTUDIE) 49 4.1.1. IDENTIFIZIERUNG
VON MANGIFERIN- UND HESPERIDINMETABOLITEN IN DEN ENZYMATISCH
UNBEHANDELTEN URINPROBEN 50
4.1.2. CHARAKTERISIERUNG DER MANGIFERIN- UND HESPERIDINMETABOLITEN IN
DEN ENZYMATISCH BEHANDELTEN URINPROBEN 53
4.1.3. IDENTIFIZIERUNG VON MANGIFERIN- UND HESPERIDINMETABOLITEN IN DEN
BLUTPLASMAPROBEN 56 4.1.4. ERGEBNISZUSAMMENFASSUNG UND-BEWERTUNG 56
4.2. METABOLITENIDENUEFIZIERUNG UND -QUANTIFIZIERUNG IN BLUTPLASMA-,
URIN-UND FAEZESPROBEN NACH VERABREICHUNG EINES CYCLOPIA GENISTOIDES
{HONEYBUSH) EXTRAKTES AN DREI SCHWEINE - FUETTERUNG UEBER 11 TAGE 57
4.2.1. ERGEBNISSE DER UNTERSUCHUNGEN DER BLUTPLASMAPROBEN 58
4.2.2. IDENTIFIZIERUNG VON MANGIFERIN- UND HESPERIDINMETABOLITEN IN DEN
URINPROBEN 60 4.2.3. QUANTIFIZIERUNG DER MANGIFERIN- UND
HESPERIDINMETABOLITEN IN DEN URINPROBEN 64 4.2.4. IDENTIFIZIERUNG VON
MANGIFERIN- UND HESPERIDINMETABOLITEN IN DEN FAEZESPROBEN 67 4.2.5.
QUANTIFIZIERUNG DES IDENTIFIZIERTEN MANGIFERINS UND DES AGLYKONS IN DEN
FAEZESPROBEN 69 4.2.6. ERGEBNISZUSAMMENFASSUNG UND -BEWERTUNG 72
4.3. ZUSAMMENFASSUNG UND VERGLEICH DER FUETTERUNGEN - GRENZEN DER
UNTERSUCHUNGEN 74
5. ENTWICKLUNG VON METHODEN ZUR CHARAKTERISIERUNG MOEGLICHER BAKTERIELLER
SPALTPRODUKTE IM 79
5.1. POSTULIERTE SPALTPRODUKTE 79
5.2. AUSWAHL DER ANALYTEN 80
5.3. ENTWICKLUNG EINER GC-MS-METHODE 81
5.4. ENTWICKLUNG GEEIGNETER AUFARBEILUNGSMETHODEN FUER DIE FAEZESPROBEN 84
5.5. EIGNUNGSTESTS DER ENTWICKELTEN GC-MS-METHODE 85
5.5.1. REGRESSIONSANALYSE DER KALIBRIERDATEN VON
3-HYDROXYPHENYLESSIGSAEURE, 4- HYDROXYBENZOESAEURE, PHLOROGLUCIN,
3,4-DIHYDROXYBENZOESAEURE, 3,4- DIHYDROXYPHENYLESSIGSAEURE UND
2,4,6-TRIHYDROXYBENZOESAEURE 85
5.5.2. REPRODUZIERBARKEIT DES GC-MS-SYSTEMS 86
5.5.3. NACHWEISGRENZEN VON 3-HYDROXYPHENYLESSIGSAEURE,
4-HYDROXYBENZOESAEURE, PHLOROGLUCIN, 3,4-DIHYDROXYBENZOESAEURE,
3,4-DIHYDROXYPHENYLESSIGSAEURE UND 2,4,6-TRIHYDROXY- BENZOESAEURE IN
LOESUNGSMITTEL - GC-MS SELECTED ION MONITORING 86
5.5.4. NACHWEISGRENZEN VON 3-HYDROXYPHENYLESSIGSAEURE,
4-HYDROXYBENZOESAEURE, PHLOROGLUCIN, 3,4-DIHYDROXYBENZOESAEURE,
3,4-DIHYDROXYPHENYLESSIGSAEURE UND 2,4,6-TRIHYDROXY- BENZOESAEURE IN DER
MATRIX FAEZES 87
5.5.5. WIEDERFINDUNG UND WIEDERHOLPRAEZISION - GC-MS 87
5.6. ERGEBNISZUSAMMENFASSUNG UND-BEWERTUNG SS
6. ERGEBNISSE DER UNTERSUCHUNGEN DER FAEZESPROBEN 89
6.1. QUALITATIVE ANALYSE DER FAEZESPROBEN 89
6.2. QUANTITATIVE ANALYSE DER FAEZESPROBEN 92
6.3. ERGEBNISZUSAMMENFASSUNG UND - BEWERTUNG - GRENZEN DER
UNTERSUCHUNGEN 94
7. EXPERIMENTELLER TEIL 97
7.1. CHEMIKALIEN UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 97
7.2. GERAETE 98
7.3. HPLC-UV-MESSBEDINGUGEN 99
7.4. HPLC-ESI-MS-MESSBEDINGUNGEN WO
7.5. GC-MS-MESSBEDINGUNGEN 101
IMAGE 3
7. 6. HERSTELLUNG DES CYCLOPIA INTERMEDIA (HONEYBUSH) EXTRAKTES ZUR
FUETTERUNG EINES SCHWEINES
UEBER EINEN ZEITRAUM VON 9 TAGEN (S. KAPITEL 3.3.) 102
7.7. BESTIMMUNG DER MANGIFERIN/LSOMANGIFERIN- UND HESPERIDINGEHALTE IM
CYCLOPIA INTERMEDIA (HONEYBUSH) (S. KAPITEL 7.6.) UND CYCLOPIA
GENISTOIDES (HONEYBUSH) EXTRAKT (S. KAPITEL 4.1.) MITTELS HPLC-UV. 103
7.8. BESTIMMUNG DER MANGIFERIN/LSOMANGIFERIN- UND HESPERIDINGEHALTE IM
CYCLOPIA GENISLOIDES (HONEYBUSH) EXTRAKT (S. KAPITEL 4.2.) MITTELS
HPLC-ESI-MS. 104
7.9. AUFBAU DER FUELLERUNGSEXPERIMENTE UND ORGANISATION DER PROBENAHME
105
7.9.1. FUETTERUNG EINES CYCLOPIA INTERMEDIA (HONEYBUSH) EXTRAKTES UEBER
EINEN ZEITRAUM VON 9 TAGEN AN EIN SCHWEIN (S. KAPITEL 3.3.) 105
7.9.2. FUETTERUNG EINES CYCLOPIA GENISTOIDES (HONEYBUSH) EXTRAKTES UEBER
EINEN ZEITRAUM VON 2 TAGEN AN EIN SCHWEIN (S.KAPITEL 4.1.) 105
7.9.3. FUETTERUNG EINES CYCLOPIA GENISLOIDES (HONEYBUSH) EXTRAKTES UEBER
EINEN ZEITRAUM VON 11 TAGEN AN DREI SCHWEINE (S. KAPITEL 4.2.) 106
7.10. STATISTISCHE KENNGROESSEN 108
7.11. KALIBRIERFUNKTIONEN UND VERFAHRENSKENNDATEN (HPLC-UV UND
HPLC-ESI-MS) 112 7.11.1. BARTLETT-TEST ZUR UEBERPRUEFUNG DER
VARIANZHOMOGENITAET IM ARBEITSBEREICH (MANGIFERIN, HESPERIDIN,
HESPERETIN) 112
7.11.2. UEBERPRUEFUNG DER VARIANZHOMOGENITAET IM ARBEITSBEREICH
(ERIODICTYOL) 115 7.11.3. KENNDATEN DER LINEAREN KALIBRIERFUNKTIONEN -
UNGEWICHTETE LINEARE REGRESSIONSANALYSE MIT VERGLEICHSSUBSTANZEN
(HPLC-ESI-MS FUELL SCAN) 116
7.11.3.1 MANGIFERIN 116
7.11.3.2 HESPERETIN 120
7.11.3.3 HESPERIDIN 121
7.11.3.4 ERIODICTYOL 122
7.11.4. LINEARITAETSTEST NACH MANDEL 123
7.11.5. KENNDATEN DER LINEAREN MATRIXKALIBRIERFUNKTION VON MANGIFERIN -
GEWICHTETE LINEARE REGRESSIONSANALYSE (HPLC-ESI-MS FUELL SCAN) 126
7.12. KALIBRIERFUNKTIONEN UND VERFAHRENSKENNDATEN (GC-MS) 131
7.12.1. BARTLETT-TEST ZUR OBERPRUEFUNG DER VARIANZHOMOGENITAET IM
ARBEITSBEREICH 131 7.12.2. KENNDATEN DER LINEAREN KALIBRIERFUNKTIONEN -
UNGEWICHTETE UND GEWICHTETE LINEARE REGRESSIONSANALYSE MIT
VERGLEICHSSUBSTANZEN (GC-MS) 135
7.12.2.1 3-HYDROXYPHENYLESSIGSAEURE 136
7.12.2.2 4-HYDROXYBENZOESAEURE 137
7.12.2.3 PHLOROGLUCIN (1,3,5-TRIHYDROXYBENZOL) 138
7.12.2.4 2,4,6-TRIHYDROXYBENZOESAEURE 139
7.12.2.5 3,4-DIHYDROXYBENZOESAEURE 140
7.12.2.6 3,4-DIHYDROXYPHENYLESSIGSAEURE 141
7.12.3. LINEARITAETSTEST NACH MANDEL FUER DIE KALIBRIERDATEN VON
3-HYDROXYPHENYLESSIGSAEURE, 4- HYDROXYBENZOESAEURE, PHLOROGLUCIN,
3,4-DIHYDROXYBENZOESAEURE, 3,4- DIHYDROXYPHENYLESSIGSAEURE UND
2,4,6-TRIHYDROXYBENZOESAEURE 142
7.13. BERECHNUNGEN DER METABOLITENKONZENTRATIONEN IM BLUTPLASMA (NACH
ENZYMATISCHER BEHANDLUNG) NACH VERABREICHUNG EINES CYCLOPIA GENISTOIDES
(HONEYBUSH) EXTRAKTES AN DREI SCHWEINE - FUETTERUNG UEBER 11 TAGE 142
7.14. BERECHNUNGEN DER METABOLILENMENGEN IM URIN (NACH ENZYMATISCHER
BEHANDLUNG) NACH VERABREICHUNG EINES CYCLOPIA GENISTOIDES (HONEYBUSH)
EXTRAKTES AN DREI SCHWEINE - FUETTERUNG UEBER 11 TAGE 143
7.15. BERECHNUNGEN DER MELABOLITENMENGEN IM FAEZES NACH VERABREICHUNG
EINES CYCLOPIA GENISTOIDES (HONEYBUSH) EXTRAKIES AN DREI SCHWEINE -
FUETTERUNG UEBER 11 TAGE 144
7.16. BERECHNUNGEN DER PHENOLSAEUREMENGEN IM FAEZES NACH VERABREICHUNG
EINES
CYCLOPIA GENISTOIDES (HONEYBUSH) EXTRAKTES AN DREI SCHWEINE - FUETTERUNG
UEBER 11 TAGE 145
8. ZUSAMMENFASSUNG UND ABSCHLIESSENDE BETRACHTUNGEN 147
ANHANG 1 151
IMAGE 4
ANHANG II 171
ABBILDUNGSVERZEICHNIS * 175
TABELLENVERZEICHNIS 177
LITERATURVERZEICHNIS 180
LEBENSLAUF. 185
BISHERIGE VEROEFFENTLICHUNGEN 186 |
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