Untersuchungen zum kulturellen und molekularbiologischen Nachweis von Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis (MAP) aus humanen Darmbioptaten:
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Gießen
VVB Laufersweiler
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INHALTSVERZEICHNIS I
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1 EINLEITUNG 1
2 LITERATURUEBERSICHT 2
2.1 MYKOBAKTERIEN 2
2.2 MYCOBACTERIUM AVIUM SSP. PARATUBERCULOSIS 3
2.2.1 TAXONOMIE 3
2.2.2 VORKOMMEN UND TENAZITAET 5
2.3 PARATUBERKULOSE 7
2.3.1 KLINIK, PATHOLOGIE UND EPIDEMIOLOGIE DER PARATUBERKULOSE 7
2.3.2 OEKONOMISCHE ASPEKTE DER PARATUBERKULOSE 13
2.4 MYCOBACTERIUM AVIUM SSP. PARATUBERCULOSIS IN LEBENSMITTELN 14
2.4.1 MILCH UND MILCHERZEUGNISSE 15
2.4.2 FLEISCH UND FLEISCHERZEUGNISSE 17
2.4.3 WASSER 18
2.4.4 LEBENSMITTEL PFLANZLICHEN URSPRUNGS 19
2.5 NACHWEISMETHODEN FUER MYCOBACTERIUM AVIUM SSP. PARATUBERCULOSIS.. 20
2.5.1 KULTURELLE NACHWEISVERFAHREN 20
2.5.2 POLYMERASE-KETTENREAKTION 23
2.5.2.1 GRUNDLAGEN 23
2.5.2.2 DAS PRINZIP DER REAL TIME-PCR 25
2.5.2.3 NACHWEIS VON MYCOBACTERIUM AVIUM SSP. PARATUBERCULOSIS MIT PCR-
VERFAHREN 28
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/992934656
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
II INHALTSVERZEICHNIS
2.5.2.4 MOLEKULARE IDENTIFIZIERUNG VON MYKOBAKTERIENSPEZIES 31
2.6 CHRONISCH-ENTZUENDLICHE DARMERKRANKUNGEN DES MENSCHEN 32
MORBUS CROHN UND COLITIS ULCEROSA 32
2.6.1 AETIOLOGIE CHRONISCH-ENTZUENDLICHER DARMERKRANKUNGEN 36
2.6.1.1 MYCOBACTERIUM AVIUM SSP. PARATUBERCULOSIS UND MORBUS CROHN 42
2.6.2 EPIDEMIOLOGIE UND OEKONOMISCHE ASPEKTE CHRONISCH-ENTZUENDLICHER
DARMERKRANKUNGEN 52
2.6.3 DIAGNOSTIK CHRONISCH-ENTZUENDLICHER DANNERKRANKUNGEN 56
2.6.3.1 MORBUS CROHN 56
2.6.3.2 COLITIS ULCEROSA 59
2.6.4 THERAPIE CHRONISCH-ENTZUENDLICHER DARMERKRANKUNGEN 60
2.6.4.1 MORBUS CROHN 60
2.6.4.2 COLITIS ULCEROSA 63
3 MATERIAL UND METHODEN 65
3.1 REFERENZ- UND KONTROLLSTAEMME 65
3.2 VERGLEICHENDE UNTERSUCHUNGEN ZUM KULTURELLEN NACHWEIS VON
MYCOBACTERIUM AVIUM SSP. PARATUBERCULOSIS 66
3.3 DEKONTAMINATIONSWIRKUNG VON N-ACETYL-L-CYSTEIN-NAOH AUF
MYCOBACTERIUM AVIUM SSP. PARATUBERCULOSIS 73
3.4 DARMBIOPTATE VON MORBUS CROHN- UND COLITIS ULCEROSA-PATIENTEN SOWIE
KONTROLLPROBANDEN 78
3.4.1 PROBANDEN 78
3.4.2 DARMBIOPTATE 79
3.4.3 CHARAKTERISIERUNG DES PROBANDENKOLLEKTIVS 83
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS M
3.4.4 CHARAKTERISIERUNG DER DARMBIOPTATE 84
3.4.5 WEITERES VORGEHEN NACH FLUORESZENZ ODER 12-WOECHIGER INKUBATION...
86
3.4.6 SEQUENZANALYSE SAEUREFESTER STAEBCHEN 99
3.4.7 ARCHIVIERUNG DER ISOLATE AUS HUMANEN BIOPTATEN UND DER
REFERENZSTAEMME 101
3.5 STATISTISCHE AUSWERTUNG 103
4 ERGEBNISSE 105
4.1 VERGLEICHENDE UNTERSUCHUNGEN ZUM KULTURELLEN NACHWEIS VON
MYCOBACTERIUM AVIUM SSP. PARATUBERCULOSIS 105
4.2 VALIDIERUNG DER WIRKUNG VON N-ACETYL-L-CYSTEIN-NAOH AUF
MYCOBACTERIUM AVIUM SSP. PARATUBERCULOSIS 109
4.3 MIKROBIOLOGISCHE ERGEBNISSE BEI HUMANEN DARMBIOPTATEN 120
4.4 MOLEKULARBIOLOGISCHE ERGEBNISSE DER MIT HUMANEN DARMBIOPTATEN
INOKULIERTEN BBL MYCOBACTERIA INDICATOR TUBES (MGIT) 121
4.5 ERGEBNISSE DER SEQUENZANALYSE 137
4.6 ARCHIVIERUNG HUMANER ISOLATE UND BOVINER REFERENZSTAEMME 142
5 DISKUSSION 143
5.1 MEDIENVERGLEICH 143
5.2 VALIDIERUNG DER DEKONTAMINATIONSWIRKUNG VON N-ACETYI-L-CYSTEIN- NAOH
AUF MYCOBACTERIUM AVIUM SSP. PARATUBERCULOSIS 146
5.3 KULTURELLER UND MOLEKULARBIOLOGISCHER NACHWEIS VON MAP AUS
DARMSCHLEIMHAUT VON MORBUS CROHN- UND COLITIS ULCEROSA-PATIENTEN
SOWIE KONTROLLPROBANDEN 148
IMAGE 4
[V INHALTSVERZEICHNIS
5.3.1 METHODISCHE ASPEKTE 148
5.3.2 VORKOMMEN VON MYCOBACTERIUM AVIUM SSP. PARATUBERCULOSIS IM
DARMGEWEBE VON MORBUS CROHN- UND COLITIS ULCEROSA-PATIENTEN SOWIE
KONTROLLPROBANDEN 155
6 SCHLUSSFOLGERUNGEN 164
7 ZUSAMMENFASSUNG 165
8 SUMMARY 168
9 LITERATURVERZEICHNIS 170
10 ANHANG 259
10.1 PUFFER UND LOESUNGEN 259
10.1.1 PUFFERUND LOESUNGEN FUER DIE DEKONTAMINATION 259
10.1.2 PUFFER UND LOESUNGEN FUER DIE PCR 259
10.1.3 LOESUNGEN FUER DIE DEKONTAMINATIONSVALIDIERUNG 262
10.1.3.1 REFERENZSUSPENSION 262
10.2 NAEHRMEDIEN 263
10.2.1 LOEWENSTEIN-JENSEN-FESTMEDIUM 263
10.2.2 MIDDLEBROOK7H10-AGAR 263
10.2.3 MYCOBACTERIUM AVIUM SSP. PARAFT/OEERCUTOS/S-NACHWEIS BEI MORBUS
CROHN- UND COLITIS ULCEROSA-PATIENTEN SOWIE KONTROLLPROBANDEN 264
DANKSAGUNG 292
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