Molekulare Untersuchungen an mutmaßlichen Virulenzmechanismen und Antibiotikaresistenzen von Bakterien der Gattung Staphylococcus:
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Gießen
VVB Laufersweiler
2009
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INHALTSVERZEICHNIS -1 -
1 EINLEITUNG 1
2 LITERATURUEBERSICHT 2
2.1 EIGENSCHAFTEN VON BAKTERIEN DER GATTUNG STAPHYLOCOCCUS 2
2.2 BEDEUTUNG VON STAPHYLOKOKKEN ALS KRANKHEITSERREGER BEI MENSCH UND
TIER 2 2.3 STAPHYLOCOCCUS AUREUS 4
2.4 STAPHYLOCOCCUS INTERMEDIUS-GNICPE (SIG) 5
2.4.1 STAPHYLOCOCCUS INTERMEDIUS 6
2.4.2 STAPHYLOCOCCUS PSEUDINTERMEDIUS 6
2.4.3 STAPHYLOCOCCUS DELPHINI 7
2.5 STAPHYLOCOCCUS HYICUS 7
2.6 EXFOUEATIVE TOXINE 8
2.6.1 EXFOLIATIVE TOXINE BEI S. AUREUS 8
2.6.2 EXFOLIATIVE TOXINE BEI SIG 10
2.6.3 EXFOLIATIVE TOXINE BEI S. HYICUS UND S. CHROMOGENES 10
2.7 ZIELGENE ZUR MOLEKULAREN IDENTIFIZIERUNG VON STAPHYLOKOKKEN 12
3 MATERIAL UND METHODEN 18
3.1 BAKTERIENKULTUREN 18
3.2 ANZUECHTUNGSMEDIEN 21
3.3 SUBKULTIVIERUNG DER KULTUREN 21
3.4 KONSERVIERUNG DER KULTUREN 21
3.5 IDENTIFIZIERUNG UND WEITERGEHENDE CHARAKTERISIERUNG DER BAKTERIEN
MITTELS KONVENTIONELLER VERFAHREN 22
3.5.1 DIFFERENZIERUNG DER HAEMOLYSEFORMEN 22
3.5.2 NACHWEIS DES ENZYMS KATALASE 22
3.5.3 NACHWEIS DER KOAGULASEREAKTION 23
3.5.4 NACHWEIS DES CLUMPING-FACTORS 23
3.5.5 NACHWEIS DES ENZYMS SS-GALACTOSIDASE 23
3.5.6 NACHWEIS DES ENZYMS HYALURONIDASE 24
3.5.7 VOGES-PROSKAUER-TEST 24
3.5.8 EMPFINDLICHKEIT GEGENUEBER COLISTIN 24
3.6 NACHWEIS VON ANTIBIOTIKAEMPFINDLICHKEITEN 25
3.6.1 AGARDIFFUSIONSTEST 25
3.6.2 WACHSTUM AUF OXACILLINRESISTENZ-SCREENING-AGAR-BASIS (ORSAB) 25
3.7 IDENTIFIZIERUNG UND WEITERGEHENDE CHARAKTERISIERUNG MITTELS
MOLEKULARER VERFAHREN 26 3.7.1 DNA-PRAEPARATION MIT DEM *DNEASY
TISSUE-KIT 26
3.7.2 VEREINFACHTE PRAEPARATION DER BAKTERIELLEN DNA 26
3.7.3 DURCHFUEHRUNG DER POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 27
3.7.4 AGAROSEGELELEKTROPHORESE 27
3.7.5 ETHIDIUMBROMIDFAERBUNG 27
3.7.6 DNA PRAEPARATION AUS AGAROSEGELEN UND SEQUENZIERUNG 28
3.7.7 UNTERSUCHUNG DER 5. AI RA/S-KULTUREN 28
3.7.7.1 IDENTIFIZIERUNG 28
3.7.7.1.1 NACHWEIS DES THERMONUCLEASE-KODIERENDEN GENS NUC 28 3.7.7.1.2
NACHWEIS EINES S. OIIREIII-SPEZIFISCHEN ABSCHNITTS SA442 INNERHALB DER
CHROMOSOMALEN DNA 29
3.7.7.1.3 NACHWEIS DES DIE IGG-BINDENDE REGION-KODIERENDEN TEILS DES
PROTEIN A-GENS SPA 29
3.7.7.2 WEITERGEHENDE CHARAKTERISIERUNG 29
3.7.7.2.1 NACHWEIS DER EXFOLIATIVEN TOXINGENE ETA UND ELB DURCH
MULTIPLEX-PCR 29
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/996010122
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS - H-
3.7.7.2.2 NACHWEIS DES ADENYLSUCCINATLYASE-KODIERENDEN GENS PURSS 30
3.7.7.2.3 NACHWEIS DES CHERNOTAXIS INHIBITING PROTEIN
(CHIPS)-KODIERENDEN GENS CHP 31
3.7.8 UNTERSUCHUNG DER 5. I/IRERMEDIIU-KULTUREN 31
3.7.8.1 IDENTIFIZIERUNG 31
3.7.8.1.1 NACHWEIS DES THERMONUCLEASE-KODIERENDEN GENS NUC DURCH
MULTIPLEX - PCR 31
3.7.8.1.2 NACHWEIS DES DNAI -GENS VON S. INTERMEDIAS 32
3.7.8.2 WEITERGEHENDE CHARAKTERISIERUNG 32
3.7.8.2.1 NACHWEIS DES EXFOLIATIVEN TOXINGENS SIET 32
3.7.8.2.2 NACHWEIS DES ENTEROTOXINGENS SE-INT 33
3.7.8.2.3 NACHWEIS DER LEUKOTOXIN-KODIERENDEN GENE LUKS UND LUKV DURCH
MULTIPLEX-PCR 33
3.7.8.2.4 NACHWEIS DES ADENYLSUCCINATLYASE-KODIERENDEN GENS PURB 34
3.7.8.2.5 NACHWEIS DES CHEMOTAXIS INHIBITING PROTEIN (CHIPS)-KODIERENDEN
GENS CHP 34
3.7.8.2.6 NACHWEIS VON RESISTENZGENEN DURCH MULTIPLEX-PCR 34
3.7.9 UNTERSUCHUNG DER S. /YIAIS-KUITUREN 35
3.7.9.1 IDENTIFIZIERUNG 35
3.7.9.1.1 NACHWEIS EINES 5. /JI CI/I-SPEZIFISCHEN ABSCHNITTS DES
SUPEROXID DISMUTASE A-KODIERENDEN GENS SODA 35
3.7.9.1.2 NACHWEIS EINES 5. * V/.R-SPEZIFISCHEN ABSCHNITTS DER 16S-23S
RDNA. 35 * INTERGENIC SPACER REGION (ISR) 35
3.7.9.2 WEITERGEHENDE CHARAKTERISIERUNG 36
3.7.9.2.1 NACHWEIS DER EXFOLIATIVEN TOXINGENE E.XLIA, EXHB, EXHC UND
EXHD DURCH MULTIPLEX-PCR 36
3.7.9.2.2 NACHWEIS DER EXFOLIATIVEN TOXINGENE SHETA UND SHETB VON S.
HYICUS... 37 3.7.10 MAKRORESTRIKTIONSANALYSE DER CHROMOSOMALEN DNA
MITTELS PULSFELDGELELEKTROPHORESE 37
3.7.10.1 PRAEPARATION UND RESTRIKTIONSVERDAU DER GESAMTZEIL-DNA 37
3.7.10.2 PULSFELDGELELEKTROPHORESE (PFGE) 38
4 ERGEBNISSE 39
4.1 IDENTIFIZIERUNG UND WEITERGEHENDE CHARAKTERISIERUNG DER
STAPHYLOKOKKENKULTUREN MITTELS KONVENTIONELLER VERFAHREN 39
4.1.1 DIFFERENZIERUNG DER HAEMOLYSEFORMEN 39
4.1.2 PHAENOTYPISCHE EIGENSCHAFTEN 40
4.1.3 EMPFINDLICHKEIT GEGENUEBER COLISTIN 41
4.2 NACHWEIS VON ANTIBIOTIKAEMPFINDLICHKEITEN 42
4.2.1 AGARDIFFUSIONSTEST 42
4.2.2 WACHSTUM AUF OXACILLINRESISTENZ-SCREENING-AGAR-BASIS (ORSAB) 42_
4.3 IDENTIFIZIERUNG UND WEITERGEHENDE CHARAKTERISIERUNG MITTELS
MOLEKULARER VERFAHREN 43 4.3.1 UNTERSUCHUNG DER S. MIRAIS-KULIUREN 43
4.3.1.1 IDENTIFIZIERUNG 43
4.3.1.1.1 NACHWEIS DES THERMONUCLEASE-KODIERENDEN GENS NUC 43 4.3.1.1.2
NACHWEIS DES 5. AUREUS-SPEZI FISCHEN ABSCHNITTS SA442 INNERHALB DER
CHROMOSOMALEN DNA 43
4.3.1.1.3 NACHWEIS DES DIE IGG-BINDENDE REGION-KODIERENDEN TEILS DES
PROTEIN A-GENS SPA 44
4.3.1.2 WEITERGEHENDE CHARAKTERISIERUNG 46
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS - III -
4.3.1.2.1 NACHWEIS DER EXFOLIATIVEN TOXINGENE ETA UND ETB DURCH
MULTIPLEX-PCR T. 46
4.3.1.2.2 NACHWEIS DES ADENYLSUCCINATLYASE-KODIERENDEN GENSPURB 47
4.3.1.2.3 NACHWEIS DES CHEMOTAXIS INHIBITING PROTEIN (CHIPS)-KODIERENDEN
GENS CHP 50
4.3.2 UNTERSUCHUNG DER SIG-KULTUREN 54
4.3.2.1 IDENTIFIZIERUNG 54
4.3.2.1.1 NACHWEIS DES THERMONUCLEASE-KODIERENDEN GENS NUC DURCH
MULTIPLEX- PCR 54
4.3.2.1.2 NACHWEIS DES RFNAJ-GENS VON SIG 55
4.3.2.2 WEITERGEHENDE CHARAKTERISIERUNG 56
4.3.2.2.1 NACHWEIS DES EXFOLIATIVEN TOXINGENS SIET 56
4.3.2.2.2 NACHWEIS DES ENTEROTOXINGENS SE-INT 60
4.3.2.2.3 NACHWEIS DER LEUKOTOXIN-KODIERENDEN GENE LUKS UND LUKF DURCH
MULTIPLEX-PCR 62
4.3.2.2.4 NACHWEIS DES ADENYLSUCCINATLYASE-KODIERENDEN GENS PURB 63
4.3.2.2.5 NACHWEIS DES CHEMOTAXIS INHIBITING PROTEIN (CHIPS)-KODIERENDEN
GENS CHP 65
4.3.2.2.6 NACHWEIS VON RESISTENZGENEN DURCH MULTIPLEX-PCR 67 4.3.2.2.7
ERGEBNISSE DER MAKRORESTRIKTIONSANALYSE 69
4.3.3 UNTERSUCHUNG DER S. FTY/CIU-KUITUREN 71
4.3.3.1 IDENTIFIZIERUNG 71
4.3.3.1.1 NACHWEIS EINES S. /RYIAIS-SPEZIFISCHEN ABSCHNITTS DES
SUPEROXID DISMUTASE A-KODIERENDEN GENS SOD A 71
4.3.3.1.2 NACHWEIS EINES S. /RYICIIS-SPEZIFISCHEN ABSCHNITTS DER 16S-23S
RDNA *INTERGENIC SPACER REGION (ISR) 72
4.3.3.2 WEITERGEHENDE CHARAKTERISIERUNG 73
4.3.3.2.1 NACHWEIS DER EXFOLIATIVEN TOXINGENE EJRHA, EXHB, E.XLIC UND
EXHD DURCH MULTIPLEX-PCR 73
4.3.3.2.2 NACHWEIS DER EXFOLIATIVEN TOXINGENE SHETA UND SHETB VON S.
HYICUS. ..81 4.3.4 DENDROGRAMMANALYSE DER EXFOLIATIVEN TOXINGENE 81
5 DISKUSSION 87
5.1 DIFFERENZIERUNG DER HAEMOLYSEFORMEN 87
5.2 PHAENOTYPISCHE EIGENSCHAFTEN 89
5.3 EMPFINDLICHKEIT GEGENUEBER COLISTIN 91
5.4 UNTERSUCHUNG DER S. MIRAIS-KULTUREN 91
5.4.1 IDENTIFIZIERUNG 91
5.4.2 WEITERGEHENDE CHARAKTERISIERUNG 93
5.5 UNTERSUCHUNG DER S. INTERMEDHTS-GMPPE (SIG) 94
5.5.1 IDENTIFIZIERUNG 94
5.5.2 WEITERGEHENDE CHARAKTERISIERUNG 95
5. 6 ANTIBIOTISCHE RESISTENZGENE 97
5.7 UNTERSUCHUNG DER 5. AVICIIS-KULTUREN 99
5.7.1 IDENTIFIZIERUNG 99
5.7.2 WEITERGEHENDE CHARAKTERISIERUNG 99
6 ZUSAMMENFASSUNG 101
7 SUMMARY 102
8 LITERATURVERZEICHNIS 103
9 ANHANG 118
9.1 TABELLENVERZEICHNIS , 118
9.2 ABBILDUNGSVERZEICHNIS 119
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| spelling | Kanbar, Talah Verfasser (DE-588)138664021 aut Molekulare Untersuchungen an mutmaßlichen Virulenzmechanismen und Antibiotikaresistenzen von Bakterien der Gattung Staphylococcus Talah Kanbar 1. Aufl. Gießen VVB Laufersweiler 2009 V, 122 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Edition scientifique Zugl.: Gießen, Univ., Diss., 2009 bacteria cabt staphylococcus cabt staphylococcus hyicus cabt staphylococcus aureus cabt staphylococcus intermedius cabt phenotypes cabt genotypes cabt differentiation cabt genes cabt nucleotide sequences cabt polymerase chain reaction cabt gene expression cabt dna cabt bacterial toxins cabt cell culture cabt proteins cabt identification cabt clones cabt methicillin cabt drug resistance cabt (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content http://library.vetmed.fu-berlin.de/ResourceList/details/207044 lizenzfrei Abstract DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=022332551&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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