Murine Desmoglein-2-Mutanten als Tiermodell zur Untersuchung der arrhythmogenen rechtsventrikulären Kardiomyopathie:
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Giessen
VVB Laufersweiler
2009
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1. INHALTSVERZEICHNIS
1. INHALTSVERZEICHNIS 5
1. EINLEITUNG 1
1.1. PLOETZLICHER HERZTOD - ARRHYTHMOGENE RECHTSVENTRIKULAERE
KARDIOMYOPATHIE
1
1.2. GLANZSTREIFEN 2
1.3. DESMOSOMEN 4
1.4. INTERAKTION DER CADHERINE MIT PLAKOGLOBIN UND PLAKOPHILIN 6
1.5. GENETIK - ARVC 6
1.6. HISTOPATHOLOGIE - ARVC 7
1.7. PATHOGENESE - ARVC 8
1.8. TIERMODELLE ZUR UNTERSUCHUNG VON ARVC 10
1.9. BETEILIGUNG DER DESMOSOMALEN PROTEINE AN DER SIGNALTRANSDUKTION 11
1.10. VORARBEITEN 12
1.11. ZIELE 15
2. MATERIAL UND METHODEN 17
2.1. MATERIAL 17
2.1.1. GERAETE UND GEFAESSE 17
2.1.2. CHEMIKALIEN 19
2.1.3. ENZYME UND REAGENZIENSAETZE (KITS) 21
2.1.4. ANTIKOERPER 22
2.1.5. PUFFER FUER MOLEKULARBIOLOGISCHE ARBEITEN 23
2.1.6. PUFFER FUER DIE PROTEINBIOCHEMIE 24
2.1.7. PUFFER UND LOESUNGEN FUER DIE IMMUNFLUORESZENZ 28
2.1.8. ANSAETZE DER FAERBELOESUNGEN 29
2.1.9. LOESUNGEN FUER DIE ELEKTRONENMIKROSKOPIE 29
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/994761694
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
2.2. METHODEN 31
2.2.1. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 31
2.2.1.1. PRAEPARATION GENOMISCHER DNA AUS SCHWANZBIOPSIEN 31
2.2.1.2. PRAEPARATION GENOMISCHER DNA AUS GEWEBEN (AUSSER SCHWANZBIOPSIEN)
31
2.2.1.3. ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA AUS GEWEBEPROBEN 32
2.2.1.4. POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) 33
2.2.1.5. GELELEKTROPHORESE 34
2.2.1.6. REVERSE TRANSKRIPTASE-POLYMERASE-KETTENREAKTION (RT-PCR) 35
2.2.2. PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN 36
2.2.2.1. GESAMTPROTEINISOLIERUNG AUS TIERISCHEN GEWEBEN 36
2.2.2.2. PROTEINQUANTIFIZIERUNG NACH BRADFORD 36
2.2.2.3. IMMUNOBLOT 36
2.2.3. IMMUNHISTOLOGIE 38
2.2.3.1. AFA-FIXIERUNG 38
2.2.3.2. ISOPENTAN-FIXIERUNG 39
2.2.3.3. IMMUNFLUORESZENZ-FAERBUNG 39
2.2.4. HISTOLOGISCHE METHODEN 40
2.2.4.1. FORMALIN-FIXIERUNG UND PARAFFINEINBETTUNG 40
2.2.4.2. APOPTOSEFAERBUNG (ISOL-FAERBUNG) 43
2.2.5. ELEKTRONENMIKROSKOPIE 45
2.2.6. TIEREXPERIMENTELLE TECHNIKEN 45
2.2.6.1. HALTUNG UND ZUCHT VON LABORMAEUSEN 45
2.2.6.2. INJEKTION VON TAMOXIFEN ZUR INDUKTION DER CRE-REKOMBINASE 46
3. ERGEBNISSE 47
3.1. OPTIMIERUNG DER INDUZIERBARKEIT DER KONDITIONALEN DSG2-MUTANTEN 47
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
3.2. GENERIERUNG UND GENOTYPISIERUNG EINER KONSTITUTIVEN DSG2 DELE4 E6
- MUTANTE 49
3.3. REKOMBINATION DES DESMOGLEIN 2-GENS IM HERZMUSKEL 56
3.4. NACHWEIS DER REKOMBINIERTEN DSG2-MRNA 58
3.5.UNTERSUCHUNG DES REKOMBINIERTEN DSG2-PROTEINS 59
3.6. MAKROSKOPISCHE VERAENDERUNGEN 60
3.7. HISTOLOGIE 63
3.7.1. ALLGEMEINE VERAENDERUNGEN 63
3.7.2. HISTOLOGISCHE VERAENDERUNGEN DER INDUZIERTEN KONDITIONALEN
MUTANTEN 66
3.7.3. HISTOLOGISCHE VERAENDERUNGEN DER KONSTITUTIVEN DSG2 DELE4E6
-MUTANTEN 67
3.8. APOPTOSE 70
3.9. IMMUNFLUORESZENZ 75
3.9.1. NACHWEIS VON DESMOGLEIN 2 IN DEN GLANZSTREIFEN 75
3.9.2. NACHWEIS DER DESMOSOMALEN PROTEINE PLAKOGLOBIN, PLAKOPHILIN 2 UND
DESMOPLAKIN IN DEN GLANZSTREIFEN 76
3.9.3. NACHWEIS VON N-CADHERIN, SS-CATENIN UND CONNEXIN 43 IN DEN
GLANZSTREIFEN 78
3.9.4. KOLOKALISIERUNG VON DESMOGLEIN 2 MIT PLAKOPHILIN 2 UND
DESMOPLAKIN 80
3.9.5. KOLOKALISIERUNG VON DESMOGLEIN 2 MIT N-CADHERIN UND SS-CATENIN 83
3.10. ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG DER DSG2-MUTANTEN 85
3.11. IMMUNOBLOT 87
4. DISKUSSION 91
4.1. PATHOLOGISCHE ASPEKTE 91
4.2. SIGNALWEGE IN DER ENTWICKLUNG VON HERZERKRANKUNGEN 94
4.3. DIE DIREKTE ROLLE VON DESMOGLEIN 2 IN DER APOPTOSE 98
4.4. AUSWIRKUNGEN DER DSG2-MUTATION AUF DIE DESMOSOMALE ADHAESION.... 100
4.5. MURINE DESMOGLEIN 2-MUTANTEN - EIN GEEIGNETES TIERMODELL ZUR
UNTERSUCHUNG VON ARVC 103
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
5. ZUSAMMENFASSUNG 105
6. SUMMARY 107
7. LITERATURVERZEICHNIS 109
8. ABBILDUNGSVERZEICHNIS 112
9. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 121
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| spelling | Hofe, Valérie Verfasser (DE-588)138013446 aut Murine Desmoglein-2-Mutanten als Tiermodell zur Untersuchung der arrhythmogenen rechtsventrikulären Kardiomyopathie eingereicht von Valérie Hofe 1. Aufl. Giessen VVB Laufersweiler 2009 124 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Edition scientifique Zugl.: Gießen, Univ., Diss., 2009 mutations cabt histopathology cabt tissue ultrastructure cabt nucleotide sequences cabt genes cabt animal models cabt gene expression cabt transgenic animals cabt transgenics cabt mice cabt biotechnology cabt recombination cabt myocardium cabt histology cabt apoptosis cabt immunofluorescence cabt scars cabt gap junctions cabt electron microscopy cabt exons cabt Tiermodell (DE-588)4140660-6 gnd rswk-swf Rechte Herzkammer (DE-588)4177184-9 gnd rswk-swf Ventrikuläre Arrhythmie (DE-588)4750459-6 gnd rswk-swf Desmogleine (DE-588)7673936-3 gnd rswk-swf Mutante (DE-588)4256709-9 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Rechte Herzkammer (DE-588)4177184-9 s Ventrikuläre Arrhythmie (DE-588)4750459-6 s Desmogleine (DE-588)7673936-3 s Mutante (DE-588)4256709-9 s Tiermodell (DE-588)4140660-6 s DE-604 http://library.vetmed.fu-berlin.de/ResourceList/details/206550 lizenzfrei Abstract DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=022317393&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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