Untersuchungen zur Optimierung eines inaktivierten Paramyxovirus-3-Impfstoffes für australische und afrikanische Sittiche und seine Wirkung auf die humorale und zelluläre Immunität des Huhnes:
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| Published: |
Gießen
VVB Laufersweiler
2007
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG
2 LITERATURUBERSICHT
2.1 INFEKTIONEN MIT AVIAREM PARAMYXOVIRUS-3 3
2.1.1 ATIOLOGIE 3
2.1.2 WIRTSSPEKTRUM DES PMV-3 7
2.1.3 GESCHICHTLICHER UBERBLICK DES PMV-3 8
2.1.4 EPIDEMIOLOGIE DES PMV-3 11
2.1.5 PATHOGENESE 12
2.1.6 KLINISCHE SYMPTOMATIK. 12
2.1.7 PATHOLOGIE 16
2.1.8 DLAGNOSTIK 16
2 . 1 .9 DLFFERENTIALDIAGNOSEN 18
2 . 1 . 10 THERAPIE 18
2 . 1 . 11 ISOLIERUNG DES AVIAREN P M V -3 STAMM 1 3 8 8 / 84 19
2 .2 IMMUNISIERUKG 20
2.2.1 AKTIVE IMMUNISIERUNG 20
. 1 LEBENDIMPFSTOFFE 21
.2 INAKTIVATIMPFSTOFFE 23
.2.1 ANTIGENE 25
.2.2 ADJUVANTIEN 25
2 . 2 .2 IMPFSTOFFE GEGEN PMV-3-LNFEKTIONEN 28
2 . 2 .3 IMPFSCHADEN 28
2.3 D IE IMMUNITATSBILDUNG BEIM V O G EL 29
2.3.1 DIE UNSPEZIFISCHE IMMUNITAT 29
2.3.2 DIE SPEZIFISCHE IMMUNITAT 32
2.3.2.1 HUMORALE IMMUNITAT 33
2.3.2.2 ZELLULARE IMMUNITAT 35
2.3.2.2.1 CD8-T-ZELLEN 36
2.3.2.2.2 CD4-T-ZELLEN 37
2.3.2.2.3 ZYTOKINE 37
2.3.2.2.3.1 INTERFERON-Y 38
2.3.2.3 ZUSAMMENSPIEL VON HUMORALER UND ZELLULARER IMMUNITAT 39
2.3.3 IN C/RAO-TESTVERFAHREN ZUR BESTIMMUNG ZELLULARER IMMUNITAT 40
2.3.3.1 LEUKOZYTENTRANSFORMATIONSTEST 40
2.2.
2.2.
2.2.
2.2.
GESCANNT DURCH
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/988006758
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
II INHALTSVERZEICHNIS
2.3.3.2 NITRIC-OXID-ASSAY 41
2.3.3.3 FLOWZYTOMETRIE 42
2.3.3.4 IMMUNHISTOCHEMIE 42
2.3.4 SPEZIFISCHE IMMUNITATSBILDUNG BEI PARAMYXOVIRUSINFEKTIONEN 43
2.3.4.1 DIE ROLLE DER HUMORALEN IMMUNITAT BEI PARAMYXOVIRUSINFEKTIONEN
43 2.3.4.2 DIE ROLLE DER ZELLULAREN IMMUNITAT BEI
PARAMYXOVIRUSINFEKTIONEN 44 2.4 FRAGESTELLUNGEN DER EIGENEN
UNTERSUCHUNGEN 45
3 MATER1AL UND METHODEN 47
MATERIAL 47
.1 EMBRYONIERTE SPF-HUHNEREIER 47
.2 SPF-HUHNER 49
.3 BILDUNGDERHUHNERGRUPPENFORDIEVERSUCHE 49
.4 HUHNER FUR DIE GEWINNUNG DER ERYTHROZYTEN 51
.5 VIRUS 52
.5.1 PARAMYXOVIRUS SEROTYP 3 (PMV-3) 52
.5.2 PARAMYXOVIRUS SEROTYP 1 (PMV-1) 52
.6 MEDIEN, LOSUNGEN UND REAGENZIEN 53
.6.1 VERSUCHSUBERGREIFENDE MEDIEN, LOSUNGEN UND REAGENZIEN 53
.6.2 MEDIEN, LOSUNGEN UND REAGENZIEN F. DEN
LEUKOZYTENTRANSFORMATIONSTEST 54 .6.3 MEDIEN, LOSUNGEN UND REAGENZIEN
FUR DEN NITRIC-OXID-ASSAY 55 3.1.7 GERATE UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 55
3.2 METHODEN 56
3.2.1 ZELLKULTUREN 56
3.2.1.1 HERSTELLUNG DER HUHNER-EMBRYO-LEBERZELLKULTUREN (HELZ) 56
3.2.1.2 ANLEGENEINERHDLL-ZELLKULTURFURDENNITRIC-OXID-ASSAY 57 3.2.2
HERSTELLUNG EINES VIRUS-GRUNDSTAMMES 57
3.2.2.1 VIRUSVERMEHRUNG 58
3.2.2.2 EMTE DER ALLANTOISFLUSSIGKEIT 58
3.2.2.3 VIRUSTITRATION IN DER HELZ-KULTUR 59
3.2.2.4 BAKTERIOLOGISCHE UND MYKOLOGISCHE REINHEITSPRUFUNGEN 60 3.2.3
HERSTELLUNG DER INAKTIVIERTEN VAKZINE 61
3.2.3.1 FORMALININAKTIVIERUNG 61
3.2.4 BLUTPROBENNAHME 61
3.2.5 VLRUS-DOSIS-FLNDUNGSSTUDIE 62
3.2.5.1 HERSTELLUNG DER IMPFSTOFFFORMULIERUNG 62
3.2.5.2 IMPFUNG UND BLUTPROBENENTNAHME 63
3.2.5.3 SEKTION 63
3.2.5.4 SEROLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN 64
3.2.5.4.1 HAMAGGLUTINATIONS-(HA-)TEST MIT PMV-3 UND PMV-1 64
3.2.5.4.2 HAMAGGLUTINATIONSHEMMUNGS-(HAH-)TEST MIT PMV-3 64
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
M
3.2.5.4.3 3.2.6 3.2.6.1 3.2.6.2
3.2.6.3 3.2.7
3.2.7.1 3.2.7.2 3.2.7.3 3.2.8 3.2.8.1 3.2.8.2 3.2.8.2.1 3.2.8.2.2
3.2.8.2.3
3.2.8.2.4 3.2.8.2.5 3.2.9 3.2.9.1
3.2.9.2 3.2.9.3 3.2.9.3.1 3.2.9.3.2 3.2.9.3.3
65 65 65 67
67
67 68 68 68 69 69
70 71 72
HERSTELLUNG DER
MTT-(3-(4,5-DIMETHYLTHIAZOL-2-YL)-2,5-DIPHENYLTETRAZOLIUM BROMIDE)
LOSUNG 72
ZUGABE DER MTT-LOSUNG UND ERMITTLUNG DER OPTISCHEN DICHTE 72
AUSWERTUNGSVERFAHREN 73
NITRIC-OXID-ASSAY 73
HERSTELLUNG DER IMPFSTOFFFORMULIERUNG 74
IMPFUNG UND BLUTPROBENENTNAHME 74
UBERPRIIFUNG DER ZELLULAREN IMMUNITATSBILDUNG 76
VORBEREITUNG DER MIKROTITERPLATTEN 76
HERSTELLUNG DER GRIESS-REAGENZ 76
DURCHFUHRUNG DES NITRIC-OXID-ASSAYS 76
77
HAMAGGLUTINATIONSHEMMUNGS-(HAH-)TEST MIT PMV-1
ADJUVANS-DOSIS-FINDUNGSSTUDIE
HERSTELLUNG DER IMPFSTOFFFORMULIERUNG
IMPFUNG UND BLUTPROBENENTNAHME
SEROLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN
IMMUNISIERUNGSVERGLEICH ZWISCHEN EINEM LEBENDIMPFSTOFF UND EINER
INAKTIVIERTEN VAKZINE
HERSTELLUNG DER IMPFSTOFFFORMULIERUNG
IMPFUNG UND BLUTPROBENENTNAHME
SEROLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN
LEUKOZYTENTRANSFORMATIONSTEST IMPFSTOFF, IMPFUNGEN, BLUTPROBENENTNAHME
UND HAH-TESTE
UNTERSUCHUNGEN ZUM NACHWEIS EINER ZELLULAREN IMMUNITATSBILDUNG
PROBENAUFBEREITUNG
ANLEGEN DER LEUKOZYTENKULTUREN
3.3 STATISTISCHE AUSWERTUNG
3.3.1 AUSWERTUNGEN DER VIRUS-UND ADJUVANS-DOSIS-FINDUNGSSTUD1EN 77
3.3.2 AUSWERTUNGEN DES LEUKOZYTENTRANSFORMATIONSTESTS 78
3.3.3 AUSWERTUNGEN DES NITRIC-OXID-ASSAYS 78
4 ERGEBNISSE 79
4.1 V E R T R A G L I C H K E IT DER I M P F S T O F FE IN VIVO 79
4 .2 A N T I K O R P E R K I N E T IK ALS S P I E G EL DER HLIMORALEN I
M M U N A B W E HR 80
4 . 2 .1 ANTIKORPERKJNETIK BEI DER VLRUS-DOSIS-FLNDUNGSSTUDIE 80
4.2.1.1 KINETIK DER ANTIKORPER GEGEN PMV-3 80
4.2.1.2 ANTIKORPERKINETIK BEI PMV-1 85
4.2.1.3 VERGLEICH DER ANTIKORPERKINETIK BEI PMV-3 UND PMV-1 89
4.2.2 ANTIK.ORPERKJNETIKBEIDERADJUVANS-DOS1S-FINDUNGSSTUDIE 90
4.2.2.1 KINETIK DER ANTIKORPER GEGEN PMV-3 90
4.2.2.2 ANTIKORPERKINETIK BEI PMV-I 95
IMAGE 4
IV INHALTSVERZEICHNIS
4.2.3 VERGLEICH DER ANTIKORPERKINETIK VON PMV-3 NACH IMMUNISIERUNG
MIT EINEM LEBENDIMPFSTOFF UND INAKTIVIERTEN VAKZINE BEI GLEICHER
VLRUS/ADJUVANS-KONZENTRATION 96
4.2.4 ANTIKORPERNACHWEIS NACH OPTIMALER ZUSAMMENSTELLUNG DER
VAKZINE 98
4.2.4.1 ANTIKORPERKINETIK BEI PMV-3 HINSICHTLICH DES BEGINNS DER
MEBBAREN
ANTIKORPERBILDUNG UND EINER BOOSTERUNG 100
4.2.4.2 ANTIKORPERKINETIK BEI PMV-3 IM RAHMEN DES NITRIC-OXID-ASSAYS 101
4.2.4.3 ANTIKORPERKINETIK BEI PMV-1 102
4.3 Z E L L P R O L I F E R A T I ON UND NITRIDBILDUNG ALS S P I E G EL
DER ZELLULAREN I M M U N A B W E HR 1 03
4 . 3 .1 ERGEBNISSE DES LEUKOZYTENTRANSFORMATIONSTESTS 1 03
4.3.1.1 EFFEKT EINER IMPFUNG AUF DIE DURCH ZWEI VERSCHIEDENE MITOGENE
STIMULIERTEN
LEUKOZYTEN 103
4.3.1.2 EFFEKT DER NACHIMPFUNG AUF DIE DURCH ZWEI VERSCHIEDENE MITOGENE
STIMULIERTEN LEUKOZYTEN IN DER IMPFGRUPPE 105
4.3.2 ERGEBNISSE DES NITRIC-OXID-ASSAYS 106
5 DISKUSS1ON 108
5.1 HUMORALE IMMUNITAT 109
5.1.1 VIRUS-DOSIS-FINDUNGSSTUDIE 111
5.1.1.1 ANTIKORPERKINETIK NACH PMV-3 -IMPFUNG 111
5.1.1.2 KREUZREAKTIONEN ZWISCHEN PMV-3 UND PMV-1 111
5.1.2 ADJUVANS-DOSIS-FINDUNGSSTUDIE 113
5.1.2.1 ANTIKORPERKINETIK BEI PMV-3 114
5.1.2.2 VERGLEICH DER ANTIKORPERKINETIK NACH PMV-3-IMMUNISIERUNG MIT
EINER
LEBEND- UND INAKTIVIERTEN VAKZINE BEI GLEICHER VIRUS/ADJUVANS-
KONZENTRATION 115
5.1.2.3 ANTIKORPERKINETIK BEI PMV-1 116
5.1.3 ANTIKORPERKINETIK BEI PMV-3 BEI OPTIMALER ZUSAMMENSTELLUNG DER
VAKZINE 117
5.1.4 D IE ROLLE EINER NACHIMPFUNG HINSICHTLICH DER HUMORALEN IMMUNITAT
BEI PMV-3 118
5.2 Z E L L U L A RE IMMUNITAT 119
5.2.1 EIGENE UNTERSUCHUNGEN MIT DEM LEUKOZYTENTRANSFORMATIONSTEST
120
5.2.1.1 EFFEKT EINER IMPFUNG AUF DIE DURCH ZWEI VERSCHIEDENE MITOGENE
STIMULIERTEN
LEUKOZYTEN 120
5.2.1.2 EFFEKT DER NACHIMPFUNG AUF DIE DURCH ZWEI VERSCHIEDENE MITOGENE
STIMULIERTEN LEUKOZYTEN IN DER IMPFGRUPPE 121
5.2.2 EIGENE UNTERSUCHUNGEN MITTELS NITRIC-OXID-ASSAY 122
IMAGE 5
INHALTSVERZEICHNIS
5.2.3 ERGEBNISSE DES LEUKOZYTENTRANSFORMATIONSTESTS UND DES NLTRIC-
OXID-ASSAYS IM VERGLEICH 123
5.3 SCHLUGFOLGERUNGEN UND AUSBLICK 124
6 ZUSAMIVIENFASSUNG 126
7 SUMMARY 129
8 LITERATURVERZEICHNIS 132
|
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