Untersuchungen zur Verbreitung und Funktion des äußere-Membran-Proteins OmpW von Salmonella spp.:
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| Format: | Thesis Book |
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| Published: |
Gießen
VVB Laufersweiler
2008
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| Edition: | 1. Aufl. |
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INHALTSVERZEICHNIS I
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS IV
1 EINLEITUNG.. * 1
2 SCHRIFTTUM 3
2.1 PORINE BEI GRAM-NEGATIVEN BAKTERIEN 3
2.2 PORINE BEI SALMONELLEN 4
2.3 DAS PUTATIVE PORIN OMPW. 12
2.3.1 LOKALISATION UND ORGANISATION VON OMPWIM GENOM 12
2.3.2 STRUKTUR UND AUFBAU DES PROTEINS OMPW 16
2.3.3 OMPW-HOMOLOGA BEI SALMONELLEN UND ANDEREN BAKTERIEN 19
2.3.4 REGULATION DER EXPRESSION VON OMPW 21
2.3.5 LOKALISATION VON OMPW IN DER BAKTERIENZELLE 25
2.3.6 MILIEUABHAENGIGE EXPRESSION UND MOEGLICHE FUNKTIONEN VON OMPW
UND SEINEN STRUKTURHOMOTOGA 26
2.3.6.1 EIGENSCHAFTEN ALS PORE ODER BESTANDTEIL EINES TRANSPORTSYSTEMS
26
2.3.6.2 BEDEUTUNG VON OMPW FUER DIE STABILISIERUNG DER AEUSSEREN MEMBRAN 30
2.3.6.3 OMPW-VERMITTELTE VTRULENZEIGENSCHAFTEN 31
2.3.7 IMMUNOGENE EIGENSCHAFTEN VON OMPW 33
3 MATERIAL UND METHODEN 34
3.1 BAKTWFENSTAMNW UND ZEWINIAN . 34
X2 GENTECHNJSCH VERAENDERT MIKROORGANISMEN 40
3.3 PUSMKTE 40
3.5 TIER»
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN HTTP://D-NB.INFO/992384079
DIGITALISIERT DURCH
IMAGE 2
II INHALTSVERZEICHNIS
3.6 BAKTERIOLOGISCHE METHODEN 46
3.6.1 ANZUCHT VON BAKTERIEN 46
3.6.2 KEIMZAHLBESTIMMUNG 48
3.6.3 HERSTELLUNG KOMPETENTER ZELLEN FUER DIE TRANSFORMATION MIT DNS 48
3.6.4 PHAENOTYPISCHE CHARAKTERISIERUNG VON SALMONELLA ENTERRCA-STAEMMEN 48
3.7 MOLEKULARGENETISCHE METHODEN. * 51
3.7.1 PRAEPARATION VON DNS 51
3.7.2 AUFREINIGUNG VON DNS 52
3.7.3 BESTIMMUNG VON DNS-KONZENTRATIONEN 53
3.7.4 RESTRIKTION VON DNS 53
3.7.5 POTYMERASE-KETTENREAKAEON (PCR) 55
3.7.6 AGAROSEGELELEKTROPHORESE 60
3.7.7 PULSFEKL-GELELEKTROPHORESE 60
3.7.8 DNS-DNS-HYBRIDISIERUNG 61
3.7.9 KLONIERUNG 63
3.7.9.1 KLONIERUNG DER GENE STM1733 UND OMPWM DEN PET-24B(+)-VEKTOR 63
3.7.9.2 KLONIERUNG DES KATN-GENS IN DEN PET-24B(+)-VEKTOR 63
3.7.9.3 KLONIERUNG VON OMPW IN PBR322 ZUR KOMPLEMENTIERUNG VON
SL1344AOMPLV 64
3.7.10 TRANSFORMATION MIT DNS 65
3.7.11 GENERATION EINER OMPW-DETETONSMUTANTE VON S. TM. SL1344 66
3.7.12 SEQUENZIERUNG 68
3.8 PROTEINANALYTISCH UND -PRAEPANRTFVE METHODEN 68
3.8.1 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION. 68
3.8.2 SDS-PAGE 68
3.8.3 AFFINITASDHT MATERAPHISCHEAUTE^ 68
3.8.4 ENTSALZUNG VON PROTEINFRAKTIONEN * * 69
3.9 SEROLOGISCHE METHODEN * * 70
3.9.1 SEROTYPISIERUNG 70
3.9.2 ANTIKOERPER UND SEREN * 70
3.9.3 SERUMABSORPTION 72
3.9.4 IMMUNO-BLOT 72
3.9.5 ENZYME-UNKED IMMUNOSORBENT ASSAY (EUSA) ....73
3.9.6 FLUOFESCENCE-ASSISTED CEB SORTING (FACS) 73
3.10 IMPFUNGEN UND SERUMGEWLNNUNG 74
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS III
3.11 DATENHALTUNG UND AUSWERTUNG 75
3.11.1 BILDDOKUMENTATION 75
3.11.2 AUSWERTUNG VON DNS- UND AMINOSAEURE-SEQUENZDATEN 75
3.11.3 STATISTISCHE AUSWERTUNG 75
4 ERGEBNISSE 76
4.1 REKOMBINANTE HERSTELLUNG VON OMPW-, STM1733- UND KATN-HISTIDIN-
MARKIERTEN FUSIONSPROTEINEN ZUR HERSTELLUNG PDYKLONALER
HYPERIMMUNSEREN * 76
4.2 VORKOMMEN VON OMPW BEI SALMONELLEN UND ANDEREN BAKTERIEN 84
4.2.1 VORKOMMEN VON OMPW BEI SALMONELLEN 84
4.2.2 VORKOMMEN VON OMPW BEI ANDEREN BAKTERIEN 90
4.3 UNTERSUCHUNGEN ZUR BIOLOGISCHEN FUNKTION VON OMPW
BEI SALMONELLEN 93
4.3.1 VERIFIZIERUNG OMPW-EXPRIMIERENDER UND -DEFIZIENTER
SALMONELLEN-STAEMME. 93
4.3.1.1 CHARAKTERISIERUNG DER NATUERLICHEN OMPW-DETETJONSMUTANTE SARC9 93
4.3.1.2 CHARAKTERISIERUNG DER GENTECHNISCH ERZEUGTEN OMP W-KNOCKOUT-
MUTANTE SL1344AOMPW 97
4.3.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR PHYSIOLOGISCHEN FUNKTION VON OMPW 108
4.3.2.1 BIOCHEMISCHE STOMVECHSEMEISTUNGEN 108
4.3.2.2 FITNESS UNTER VERSCHIEDENEN IN V*O-WACHSTUMSBEDINGUNGEN 110
4.3.2.3 WKJERSTARKISFAEHIGKERT GEO^M CR^RNOTHERAPEUTIKA UND DETERGENTIEN
119
4.3.2.4 MIVASKY^AENO^EIT URXI IR*AZEUULARES UEBERTEBEN VON SALMONELTEN 124
5 DISKUSSION 126
6 ZUSAMMENFASSUNG 149
7 SUMMARY 151
I LITERATURVERZEICHNIS 153
9 ANHANG 175
10 DANKSAGUNG 182
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