Isolation und Identifikation von Chlamydia (Chlamydophila) psittaci aus einem Pekingentenbestand:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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Gießen
DVG-Service
2006
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Inhaltsverzeichnis
Abkürzungen V
1 Einleitung 1
2 Literaturübersicht 3
2.1 Abstammung und Zucht der Pekingenten 3
2.1.1 Abstammung 3
2.1.2 Aspekte zur Pekingentenzucht und -mast 5
22 Chlamydien 9
2.2.1 Zur Geschichte der Chlamydien 9
2.2.2 Taxonomie und Klassifikation von Bakterien der
Ordnung Chlamydiales 11
2.2.3 Morphologie und Entwicklung der Chlamydien 14
2.2.4 Entwicklungszyklus der Chlamydien 16
2.2.5 Tenazität der Chlamydien 17
2.2.6 Bedeutung der Chlamydien als Krankheitserreger bei
Menschen und bei Enten (Anas ptatyrhynchos f. dorn.) 19
2.2.6.1 Krankheitsbild bei der Chlamydiose des
Menschen 21
23 Chlamydiose der Pekingente 22
2.3.1 Definition der Chlamydiose 22
2.3.2 Pathogenese und Epidemiologie der Chlamydiose 24
2.3.3 Klinische Symptome und Verlaufsformen 26
2.3.4 Pathologisch-anatomische Befunde 28
2.3.5 Histopathologische Befunde 30
2.3.6 Diagnose 31
2.3.6.1 Nachweismethoden 31
2.3.6.2 Diagnose durch Erregernachweis mittels Anziichtung 32
2.3.6.2.1 BGM-Zellkultur 35
2.3.6.2.2 HeLa-Zellkultur 35
Inhaltsverzeichnis
2.3.6.2.3 Sichtbarmachung der angezüchteten Chlamydien 36
2.3.6.3 Diagnose mittels Polymerase-Kettenreaktion 39
2.3.6.4 Diagnose der Chlamydiose bei der Ente
(Anas platyrhynchos f. dorn.) 42
2.3.7 Differentialdiagnosen 43
2.3.8 Bekämpfung 43
2.3.8.1 Zur Entwicklung der Bekämpfungsmaßnahmen
gegen die Psittakose/Omithose 43
2.3.8.2 Zur Zeit in Deutschland geltende veterinärpolizeiliche
Hekampfungsmaßnahmen 45
2.3.8.3 Therapeutische Möglichkeiten 46
2.3.8.4 Möglichkeiten der Prophylaxe in Zucht- und
Mastbeständen 48
2.3.8.5 Möglichkeiten der Prophylaxe in Schlachthäusern 50
2.4 Fragestellungen der eigenen Untersuchungen 51
3 Material und Methoden 53
3.1 Material 53
3.1.1 Herkunft, Art und Umfang des Untersuchungsmaterials 53
3.1.2 Permanente Zellkulturen 58
3.1.2.1 BGM-Zellen 58
3.1.2.2 HeLa-ZeUen 58
3.1.3 Zellkulturmedien, Lösungen und Reagentien 59
3.1.3.1 BME 59
3.1.3.2 Duibecco s MEM mit Zusätzen 60
3.1.3.3 Weitere Mediumzusätze 61
3.1.3.4 Lösungen und Puffer 62
3.1.4 Reagenzien fur die Polymerase-Kettenreaktion 65
3.1.5 Primer 66
3.1.6 Verbrauchsmaterialien und Geräte 67
3.1.6.1 Verbrauchsmaterialien fur die Isolation in Zellkultur 67
3.1.6.2 Verbrauchsmaterialien für die PCR 67
Inhaltsverzeichnis
in
3.1.6.3 Geräte 68
3.1.6.4 Sonstiges 70
32 Methoden 72
3.2.1 Kultivierung von BGM- und HeLa-Zellkulturen 72
3.2.2 Herstellung der Nachweiskulturen 73
3.2.4 Aufbereitung und Verimpfung des Probenmaterials 73
3.2.5 Vergleich der Sensitivität von BGM- und HeLa-Zellen 74
3.2.6 Färbung beimpfter Zellkulturen nach Giménez 75
3.2.7 Immunfluoreszenzfärbung mit dem
IMAGEN™ Chlamydia-Kit (DakoCytomation) 76
3.2.8 Nachweis von Chlamydien mittels
Polymerase-Kettenreaktion (PCR) 77
3.2.8.1 Isolierung der DNA 77
3.2.8.1.1 DNA-Präparation aus infizierten Zellkulturen mit dem
DNeasy Tissue Kit (Quiagen) 77
3.2.8.2 Genus-spezifische PCR (äußere Primer) 77
3.2.8.3 Spezies-spezifische PCR (innere Primer) 80
3.2.8.4 Kontrollansätze zur PCR 82
3.2.8.5 Elektrophorese der Amplifikate im Agarose-Gel 83
3.2.8.5.1 Herstellung des Agarose-Gels 83
3.2.8.5.2 Beladen des Agarose-Gels 83
3.2.8.5.3 Färben und Ablesen des Gels 84
3.2.8.5.4 Ergebnis und Kontrolle 84
4 Ergebnisse 86
4.1 Übersicht zu den Isolierungen in ZeDkuIrnren 86
42 Vergleich der Sensitivität von BGM- and
HeLa-ZeDknlturen 90
4.2.1 Quantitative Darstellung der Chlamydien
mittels direkter Lichtmikroskopie 91
4.22 Quantitative Darstellung der Chlamydien mittels
Giménez-Fàrbung 93
IV Inhaltsverzeichnis
4.2.3 Quantitative Darstellung der Chlamydien mittels
Immunfluoreszenzfärbung 97
43 LsoJationsversuche in ZeUkuIturen 100
4.4 Nachweis von Chlamydien mittels Polymerase-
Ketteiireaktion (PCR) nach Kaltenböck 113
4.5 Sequenzierung des MOMP-Gens ausgewählter Isolate i 16
5 Diskussion 118
5.1 Bewertung der Ergebnisse der Isolierungen in Zellkulturen 119
5.2 Bewertung der angewandten ZeUkuIturen 120
53 Bewertung der Ergebnisse der Potymerase-
Kettenreaktkm (PCR) 121
5.4 Bewertung der Ergebnisse der Sequenzierung 122
5.5 Zur Diagnostik der Chlamydiose beim Menschen 123
5.6 Präventive Maßnahmen in der Entenhaltung und in
Schlachthöfen 124
6 Zusammenfassung 129
7 Summary 131
8 Literaturverzeichnis 133
9 Anhang 167
10 Danksagung
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