Grundlagen der enzymatischen Analyse:
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Weinheim [u.a.]
Verl. Chemie
1977
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|---|---|
| adam_text | Titel: Grundlagen der enzymatischen Analyse
Autor: Bergmeyer, Hans Ulrich
Jahr: 1977
Inhaltsverzeichnis
Vorwort ...................................................................... V
Inhaltsverzeichnis.............................................................. VII
Verzeichnis der Autoren......................................................... XI
Verzeichnis der Abkürzungen.................................................... XIII
I. Einführung
1. Begriffe, Bedeutung und Grenzen der enzymatischen Analyse ................... 1
2. Nomenklatur und Einheiten in der Enzymologie .............................. 6
II. Theoretische Grundlagen
1. Reaktionskinetik
1.1. Die Basis der Reaktionskinetik ............................................ 13
1.2. Kinetik Enzym-katalysierter Reaktionen..................................... 18
2. Bestimmung von Michaelis-Konstanten und Inhibitor-Konstanten
2.1. Michaelis-Konstanten................................................... 30
2.2. Inhibitor-Konstanten.................................................... 36
3. Bestimmung der Substanz-Konzentration von Metaboliten (Endwert-Methoden)
3.1. Einfache Endwert-Methoden ............................................. 41
3.2. Messungen mit Hilfe gekoppelter Reaktionen................................. 48
4. Bestimmung der katalytischen Aktivität von Enzymen
4.1. Die katalytische Aktivität beeinflussende Faktoren ............................ 58
4.2. Ermittlung optimaler Substanz-Konzentration der Substrate..................... 62
4.3. Ermittlung optimaler Bedingungen der Hilfs- und Indikator-Reaktion
bei gekoppelten Enzymreaktionen ......................................... 71
4.4. Zur Meßtechnik ....................................................... 78
5. Bestimmung von Substanz-Konzentrationen von Metaboliten (kinetische
Methoden)
5.1. Reaktionskinetische Basis ................................................ 81
5.2. Kinetische Tests ....................................................... 83
5.3. Katalytische Tests ...................................................... 86
5.4. Kinetik des „Enzymatic Cycling ........................................... 89
6. Visualisierung NAD(P)-abhängiger Reaktionen
6.1. Tetrazoliumsalze und ihre Reduktion ....................................... 91
6.2. Anwendung auf enzymatische Reaktionen ................................... 94
VIII Inhaltsverzeichnis
7. Prinzip des Enzym-Immunoassay
7.1. Einführung ........................................................... 96
7.2. Heterogener Enzym-Immunoassay (EIA/ELISA) ............................. 96
7.3. Homogener Enzym-Immunoassay (EMIT) .................................. 99
7.4. Folgerung ............................................................ 100
III. Umgang mit biochemischen Reagentien und Probematerial
1. Reagentien für die enzymatische Analyse
1.1. Nomenklatur, Abkürzungen und Standardisierung............................. 103
1.2. Qualitätsanforderungen.................................................. 104
1.3. Lagerung, Stabilität und Kontrolle der Substanzen und Lösungen................. 111
2. Die Probe
2.1. Probenahme........................................................... 114
2.2. Stabilität von Metaboliten und Enzymen in der Probe.......................... 115
2.3. Vorbereitung der Probe zur Analyse........................................ 119
IV. Meßtechniken und Geräte
1. Volumen-Dosierung
1.1. Einleitung ............................................................ 125
1.2. Pipetten.............................................................. 128
1.3. Mechanische Dosiergeräte ............................................... 138
2. Absorptionsphotometrie
2.1. Meßprinzip und Begriffe................................................. 142
2.2. Meßraum, Meßgefäße, Messung und Auswertung ............................. 150
2.3. Systembedingte Fehler und Kontrollmethoden ............................... 154
3. Andere Meßtechniken
3.1. Konduktometrie ....................................................... 160
3.2. Potentiometrie und Polarometrie .......................................... 163
3.3. Mikrocalorimetrie...................................................... 171
3.4. Meßtechniken mit immobilisierten Enzymen ................................. 176
4. Die Automation der Analyse
4.1. Automaten für die enzymatische Analyse.................................... 184
4.2. Arbeitstechnik mit Analysenautomaten...................................... 191
4.3. Das Schnell-Analysensystem (Fast Analyzer)................................. 203
5. Enzymatische Analyse mit Radiobiochemikalien
5.1. Allgemeines........................................................... 212
5.2. Bestimmung von Substraten mit Radiobiochemikalien.......................... 214
5.3. Bestimmung der katalytischen Aktivität von Enzymen mit Radiobiochemikalien ..... 217
Inhaltsverzeichnis IX
V. Ermittlung und Beurteilung von Meßergebnissen
1. Meßdaten............................................................... 223
2. Meßergebnisse und Bezugsgrößen........................................... 226
3. Beurteilung und Kontrolle der Qualität von Meßergebnissen
3.1. Statistische Verfahren und Begriffe......................................... 229
3.2. Rechnerische Versuchsauswertung.......................................... 234
3.3. Beurteilende Statistik.................................................... 236
3.4. Qualitätskontrolle...................................................... 244
4. Formeln ................................................................ 247
Sachregister................................................................... 251
Anhang
Numerierung und Klassifizierung von Enzymen................................... 262
Atomgewichte............................................................... 267
Bericht über das neue SI-Einheitensystem........................................ 268
|
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