Bedeutung der Rho-GTPasen für die endotheliale Apoptose und Signaltransduktion:
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Inhaltsverzeichnis |
INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
1.1 Kleine GTP-bindende Proteine der Rho-Familie 2
1.1.1 Kleine GTP-bindende Proteine 2
112 Die Rho-Subfamilie 3
113 Rho-Proteine und Signaltransduktion 4
1.1.4 Klinische Bedeutung der Rho-Proteine 6
1.1.5 Bakterielle Toxine als Werkzeuge zur Rho-Inhibition 7
1.2 Apoptose 10
1.2.1 Apoptosis - leben und sterben lassen ? 10
12.2 Phylogenese des Zelltodes 11
12.3 Transduktion der Apoptose 12
12.4 Biochemie des Programmierten Zelltodes 14
12.5 Apoptose und Mitochondrien 15
12.6 Klinische Bedeutung der Apoptose 17
1.3 TNFa und der Transkriptionsfaktor NF-kB 19
13.7 Struktur und Rezeptor von TNFa 19
13.2 Signaltransduktion von TNFa 19
13.3 Klinische Bedeutung von TNFa 21
13.4 Nuklearer Faktor kB 22
13.5 Mitglieder und Struktur der NF-KB-Familie 22
1.3.6 Stellung von NF-kB in der Signaltransduktion 24
13.7 NF-kB und Apoptose 25
13.8 Klinische Bedeutung des Transkriptionsfaktors NF-kB 26
1.4 Fragestellung 27
2. MATERIAL UND METHODEN 29
2.1 Materialien 29
2.1.1 Chemikalien 29
2.12 Enzyme 31
2.13 Kulturmedien 31
2.14 Puffer und Lösungen 32
2.15 Toxine 37
2.16 Plasmide und DNA-Sonden 37
2.17 Oligonukleotide 37
2.18 Zubehör 38
2.19 Spezielle Geräte 38
2.1fO Antikörper 39
H Inhaltsverzeichnis
2.2 Methoden 40
2.2.1 Isolation und Kultur von humanen Endothelzellen 40
aus der Nabelschnurvene (HUVEC)
2.2.2 Isolation und Kultur von porcinen Endothelzellen 40
aus der Arteria pulmonalis
2.2.3 Messung der Laktatdehydrogenase 41
2.2.4 Quantifizierung derApoptose mittels ELISA 41
2.2.5 Immunhistochemische Apoptosebestimmung 42
2.2.6 Westem-Blot 43
2.2.7 Northern-Blot 46
2.2.8 Gel-Retentionsanalyse 48
2.2.9 Reportergen-Assay für NF-kB 49
2.2.10 Statistische Auswertung 50
3. ERGEBNISSE 51
3.1 Kleine GTP-bindende Proteine und endotheliale Apoptose 51
3.1.1 Lovastatin induziert endotheliale Apoptose 51
3.1.2 Rho-Protein-Inhibition induziert Programmierten Zelltod 51
3.1.3 Erhöhte Caspasenaktivität nach Inhibition kleiner G TPasen 56
3.1.4 Inhibition von RhoA/B/C, nicht von Rad und 57
Cdc42 induziert Apoptose
3.1.5 Hemmung endothelialer Apoptose durch NAC und 59
cAMP, nicht aber cGMP
3.2 Rho-Proteine und die Signaltransduktion von TNFaim Endothel 61
3.2.1 Rho-Protein-Inhibition potenziert die TNFa -induzierte 62
Apoptose
3.2.2 Reduktion TNFa-abhängiger, antiapoptotischer Proteine nach 62
Rho-Protein-Inhibition
3.2.3 Inhibition von Rho-Proteinen hemmt die Aktivierung 64
von NF-kB
3.2.4 Die TNFa-induzierte Degradierung von IkBü und iKBß 68
ist von der Rho-Inhibition nicht betroffen
3.2.5 Die Inhibition von RhoA/B/C verhindert die NF-kB- 69
Translokation nach TNFa-Stimulation
3.2.6 Die Rho-Inhibition vertiindert nicht die NF-KB-Translokation 69
nach IL-1 ß-Stimulation
3.2.7 Die Hemmung der Rho-Kinase vertiindert nicht die 70
NF-KB-Translokation nach TNFa-Stimulation
3.2.8 Die Depolimerisation der Mikmfilamente verhindert nicht die 70
NF-KB-Translokation nach TNFa-Stimulation
Inhaltsverzeichnis IM
4. DISKUSSION UND ZUSAMMENFASSUNG 72
4.1 Diskussion 72
4.1.1 Induktion von endothelialer Apoptose durch Lovastatin 72
4.1.2 RhoA und der Programmierte Zelltod im Endothel 73
4.1.3 Einfluss zyklischer Nukleotide auf den Rho-Signalweg 78
4.1.4 Synergismus von Rho-Inhibition und TNFa 81
4.1.5 RhoA in der Signaltransduktion von NF-kB 83
4.2 Zusammenfassung und Ausblick 90
5. LITERATURVERZEICHNIS 92
6. ANHANG 111
6.1 Publikationsverzeichnis 111
6.1.1 Originalarbeiten 111
6.1.2 Veröffentlichte Vorträge 111
6.1.3 Übersetzungsarbeiten 112
6.2 Danksagung 112
6.3 Curriculum vitae 114
6.4 Erklärung an Eides Statt 115 |
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