Biochemische und zellbiologische Untersuchungen zur Funktion des Surfactant-Proteins A: Bindung an Typ II Pneumocyten und Makrophagen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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| Veröffentlicht: |
Konstanz
Hartung-Gorre
1990
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
| Schriftenreihe: | Konstanzer Dissertationen
289 |
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INHALTSVERZEICHNIS
VORWORT 1
ABKUERZUNGEN 2
I ZUSAMMENFAS SONG 3
II EINLEITUNG 4
1. UEBERBLICK 4
2. KLINISCHE ASPEKTE DES SURFACTANTS 4
3. FUNKTIONEN DES SURFACTANTS 5
4. SURFACTANT-SEKRETION 6
5. BESTANDTEILE DES SURFACTANTS 8
6. SURFACTANT-PROTEINE 9
7. SURFACTANT-PROTEIN A 12
8. AUFGABENSTELLUNG 19
III ERGEBNISSE 20
A: INTERAKTION VON SP-A MIT ZELLMEMBRANEN
VON TYP II PNEUMOCYTEN UND VERGLEICH MIT
ANDEREN CYTOPLASMAMEMBRANEN 20
1. TEST DER BINDUNG VON SP-A AN ZELLMEMBRAN-
BLOTS 20
1.1. BINDUNG VON NATUERLICHEM UND REKOMBINANTEM
SP-A AN MAUS-LUNGENMEMBRANEN 20
1.2. BINDUNG AN ZELLMEMBRANEN VON TYP II ZELLEN
UND VERGLEICH MIT ANDEREN ZELLMEMBRANEN 24
1.3. BINDUNG AN ZELLMEMBRANEN VERSCHIEDENER
ORGANE AUS DER MAUS 27
1.4. ZUSAMMENFASSUNG DER BINDUNG VON SP-A AN
MEMBRAN-BLOTS 29
2. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE MIT SOLUBILI-
SIERTEN MEMBRANPROTEINEN 29
2.1. KALZIUM-ABHAENGIGE BINDUNG VON TYP II-
ZELLMEMBRANPROTEINEN 29
2.2. ELUTION GEBUNDENER MEMBRANPROTEINE VON
TYP II PNEUMOCYTEN MIT FIBRONECTIN-
ZELLADHAESIONSPEPTID 31
2.3. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE MIT ZELLMEMBRAN
PROTEINEN EINER HAMSTER OVAR ZELLINIE 33
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.4. 2D-ELEKTROPHORESE VON 35S-MEMBRANPROTEINEN
VOR UND NACH AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 34
2.5. ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE VON DEN
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIEN MIT VERSCHIE
DENEN MEMBRANPROTEINEN 37
B: CHARAKTERISIERUNG DES BINDUNGSMECHANISMUS
VON SP-A AN TYP II ZELLEN 38
1. KULTUR VON PRIMAEREN TYP II PNEUMOCYTEN 38
2. INTERAKTION VON SP-A MIT TYP II PNEUMOCYTEN
IM VERGLEICH ZUR BINDUNG AN ANDERE ZELLEN 40
3. VERGLEICH DER BINDUNGSEIGENSCHAFTEN VON
SURFACTANT-PROTEIN AUS VERSCHIEDENEN QUELLEN 41
4. CHARAKTERISIERUNG DES BINDUNGSMECHANISMUS 44
4.1. ALLGEMEINE BINDUNGSMERKMALE 44
4.2. BEDEUTUNG DER OLIGOMEREN STRUKTUR VON SP-A
FUER DIE BINDUNG 45
4.3. HEMMUNG DER SP-A-BINDUNG AN TYP II ZELLEN
DURCH MONOKLONALE ANTI-SP-A/C-TERMINUS
FAB-FRAGMENTE 53
4.4. BEDEUTUNG DER GLYKOSYLIERUNG VON SP-A 55
4.5. ZUCKERERKENNUNG ALS MOEGLICHER BINDUNGS
MECHANISMUS 61
4.6. ZUSAMMENFASSUNG DER ZELLBINDUNGSDATEN MIT
TYP II PNEUMOCYTEN 65
5. BINDUNG VON SP-A AN ALVEOLARE MAKROPHAGEN 66
IV DISKUSSION 70
1. BINDUNGSSTUDIEN MIT MEMBRAN-BLOT8 70
2. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIEN MIT SOLUBILI-
SIERTEN MEMBRANPROTEINEN 71
3. ZELLBINDUNGSTESTS MIT TYP II PNEUMOCYTEN 72
4. BINDUNG AN MAKROPHAGEN 76
5. MODELL FUER EINE INTERAKTION VON SP-A MIT
TYP II ZELLEA UND MAKROPHAGEN 77
^ MFTITBRXAII-_*FFTH9DEN
1. MATERIALIEN 81
1.1. CHEMIKALIEN 81
1.2. MEDIEN UND PLATTEN FUER ZELLKULTUR 81
1.3. PROTEINE, LEKTINE UND ENZYME 81
1.4. ANTIKOERPER 82
1.5. FILTER UND MEMBRANEN 82
1.6. RADIOCHEMIKALIEN 82
1.7. FILME FUER AUTORADIOGRAPHIE 82
2. METHODEN 82
2.1. ZELLEN 82
2.1.1. ZELLKULTUR 82
2.1.2. ISOLIERUNG VON ALVEOLAREN TYP II PNEUMOCYTEN 83
2.1.3. IDENTIFIZIERUNG VON TYP II ZELLEN 85
2.1.4. ISOLIERUNG VON ALVEOLAREN MAKROPHAGEN 85
2.1.5. ZELLBINDUNGSTEST 85
2.1.6. IMMUNFLUORESZENZ 86
2.2. PROTEINE 87
2.2.1. KONZENTRATIONSBESTIMMUNG 87
2.2.2. SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) 87
2.2.3. FAERBUNG VON PROTEINGELEN 88
2.2.4. TRANSFER VON PROTEINEN AUF NITROCELLULOSE-
MEMBRANEN (HESTERN BLOT) 88
2.2.5. INKUBATION VON WESTERN BLOTS MIT ANTIKOERPER 88
2.2.6. ENTWICKLUNG DER PEROXIDASE-FAERBUNG VON
HESTERN BLOTS 89
2.2.7. ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG (IEF) 89
2.2.8. ISOLIERUNG UND REINIGUNG VON SP-A 90
2.2.9. RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON SP-A 91
2.2.10. ENZYMATISCHE VERDAUUNG VON SP-A 93
2.2.11. PARTIELLE REDUKTION VON SP-A 94
2.3. MEMBRANEN UND MEMBRANPROTEINE 94
2.3.1. PRAEPARATION VON CYTOPLASMATISCHEN MEMBRANEN 94
2.3.2. BINDUNGSTEST MIT ZELLMEMBRANEN 97
2.3.3. SOLUBILISIERUNG VON MEMBRANPROTEINEN 97
2.3.4. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 98
2.3.5. AUFTRENNUNG VON MEMBRANPROTEINEN AUF
ZWEIDIMENSIONALEN GELEN (2D-GELE) 99
2.4. ANTIKOERPER 100
2.4.1. ELISA 100
2.4.2. ELISA-AEHNLICHER TEST 101
2.4.3. PRAEPARATION VON FAB-FRAGMENTEN 101
VI REFERENZEN 102 |
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