Die Rolle des Toll-like-Rezeptor 4 bei chronisch reduzierter Koronardurchblutung ("hibernation"): Beobachtungen an einem murinen In-vivo-Modell
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2008
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|---|---|
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1. Einleitung 12
1.1 Epidemiologie und Pathophysiologie von Erkrankungen des 12
Herz-Kreislauf-Systems
1.2 Physiologie und Pathophysiologie der Ischämie/Reperfusion 13
1.3 Die Rolle der myokardialen Präkonditionierung bei der Inßammation und beim
Remodeling des Myokards IS
1.4 Kardiales Hibernation als Sonderform der ischämischen Präkonditionierung 16
1.5 Die angeborene Immunabwehr 17
1.6 DerTLR4/MD-2/CD-14-RezeptorkompleximMyokard 18
1.7 Kardiales Remodeling durch TLR4-Signaltransduktion und Zytokin/Chemokin-
Entzändungsmediatoren 21
1.8 Chemokine 22
1.9 Forschungsziele der Arbeit 23
2. Material und Methoden 2£
2.1 Versuchstiere und Haltungsbedingungen 24
2.2 Gruppeneinteilung und Versuchsprotokoll 24
2.3 In-vivo-Eingriffe Okklusion Reperfusion 25
2.4 Ischämie-und Reperfusionsprotokoll 28
2.5 Versuchsprotokoll Ischämie/Reperfusion und Gruppeneinteilung 28
2.6 Histologische Verfahren 29
2.6.1 Organentnahme und Fixierung des Herzgewebes 29
2.6.2 Paraffin-Einbettung 30
2.6.3 Schnitttechnik und Einteilung der Schnittebenen 30
2.7 Azanfärbung nach Heidenhain 31
2.8 Immunhistologie 32
2.8.1 Spezifikation der Antikörper 32
2.8.2 Generelles Vorgehen der Antikörpermarkierung 34
6
2.8.3 Funktion der Antikörper 34
2.8.4 Immunhistologische Technik 35
2.8.4.1 Immunhistologie der Antikörper CD45R, CD4, CD8, und RANK 35
2.8.4.2 Immunhistologie des Antikörpers F4/80 3 7
2.8.4.3 Immunhistologie des Antikörpers Alpha-Smooth-Muscle Actin 38
2.9 BildbearbeUung 39
2.9.1 Bildbearbeitung der Azanfärbung 39
2.9.2 Planimetrische Auswertung der Azanfirbung 40
2.9.3 Bildbearbeitung und Auswertung der Immunhistologie 40
2.9.3.1 Alpha-Smooth-Muscle Actin Färbung 40
2.9.3.2 F4/80-Makrophagen Färbung 41
2.10 Statistik 42
2.11 Geräte und Chemikalien 43
2.11.1 Geräte 43
2.11.2 Chemikalien und Verbrauchsmaterial 44
3- Ereebnisse £5
3.1 Tierzahlen 45
3.2 Mortalitätsraten 45
3.3 Auswirkungen der Okklusion der LAD und deren Aufzeichnung 46
3.4 Veränderungen des Körpergewichtes der Versuchstiere 50
3.5 Azanfärbung 51
3.5.1 Histologische Veränderungen am Herzen 51
3.6 Immunhistochemie 54
3.6.1 Ergebnisse der Immunhistologie der Antikörper CD45R, CD4, CD8 und RANK 55
3.6.2 Erbebnisse der Immunhistologie des Antikörpers F4/80 56
3.6.3 Ergebnisse der Immunhistologie des Antikörpers Alpha-Smooth-Muscle Actin 59
4. Diskussion 62_
4.1 Mausmodell, „Closed-Chest-Modell undInfarzierungen 62
4.2 Methodik und Ziele des Versuchsmodells 63
4.3 Infarktgrößen 64
i
7
4.4 Bedeutung und Faktoren der Infarktheilung 66
4.5 Expressionsanalyse molekularer Marker 67
4.6 Die Besonderheiten des „ hibernation des Myokards 71
4.7 Schlussfolgerungen und Ausblick 73
4.8 Abschließende Betrachtung und Therapieansätze 74
5. Zusammenfassung 75
6. Literaturverzeichnis 77
7. Veröffentlichungen «9
8. Danksaeune 90
9. Lebenslauf 92
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1. Einleitung 12
1.1 Epidemiologie und Pathophysiologie von Erkrankungen des 12
Herz-Kreislauf-Systems
1.2 Physiologie und Pathophysiologie der Ischämie/Reperfusion 13
1.3 Die Rolle der myokardialen Präkonditionierung bei der Inßammation und beim
Remodeling des Myokards IS
1.4 Kardiales Hibernation als Sonderform der ischämischen Präkonditionierung 16
1.5 Die angeborene Immunabwehr 17
1.6 DerTLR4/MD-2/CD-14-RezeptorkompleximMyokard 18
1.7 Kardiales Remodeling durch TLR4-Signaltransduktion und Zytokin/Chemokin-
Entzändungsmediatoren 21
1.8 Chemokine 22
1.9 Forschungsziele der Arbeit 23
2. Material und Methoden 2£
2.1 Versuchstiere und Haltungsbedingungen 24
2.2 Gruppeneinteilung und Versuchsprotokoll 24
2.3 In-vivo-Eingriffe Okklusion Reperfusion 25
2.4 Ischämie-und Reperfusionsprotokoll 28
2.5 Versuchsprotokoll Ischämie/Reperfusion und Gruppeneinteilung 28
2.6 Histologische Verfahren 29
2.6.1 Organentnahme und Fixierung des Herzgewebes 29
2.6.2 Paraffin-Einbettung 30
2.6.3 Schnitttechnik und Einteilung der Schnittebenen 30
2.7 Azanfärbung nach Heidenhain 31
2.8 Immunhistologie 32
2.8.1 Spezifikation der Antikörper 32
2.8.2 Generelles Vorgehen der Antikörpermarkierung 34
6
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2.8.4.2 Immunhistologie des Antikörpers F4/80 3 7
2.8.4.3 Immunhistologie des Antikörpers Alpha-Smooth-Muscle Actin 38
2.9 BildbearbeUung 39
2.9.1 Bildbearbeitung der Azanfärbung 39
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2.9.3 Bildbearbeitung und Auswertung der Immunhistologie 40
2.9.3.1 Alpha-Smooth-Muscle Actin Färbung 40
2.9.3.2 F4/80-Makrophagen Färbung 41
2.10 Statistik 42
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3- Ereebnisse £5
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3.2 Mortalitätsraten 45
3.3 Auswirkungen der Okklusion der LAD und deren Aufzeichnung 46
3.4 Veränderungen des Körpergewichtes der Versuchstiere 50
3.5 Azanfärbung 51
3.5.1 Histologische Veränderungen am Herzen 51
3.6 Immunhistochemie 54
3.6.1 Ergebnisse der Immunhistologie der Antikörper CD45R, CD4, CD8 und RANK 55
3.6.2 Erbebnisse der Immunhistologie des Antikörpers F4/80 56
3.6.3 Ergebnisse der Immunhistologie des Antikörpers Alpha-Smooth-Muscle Actin 59
4. Diskussion 62_
4.1 Mausmodell, „Closed-Chest-Modell" undInfarzierungen 62
4.2 Methodik und Ziele des Versuchsmodells 63
4.3 Infarktgrößen 64
i
7
4.4 Bedeutung und Faktoren der Infarktheilung 66
4.5 Expressionsanalyse molekularer Marker 67
4.6 Die Besonderheiten des „ hibernation" des Myokards 71
4.7 Schlussfolgerungen und Ausblick 73
4.8 Abschließende Betrachtung und Therapieansätze 74
5. Zusammenfassung 75
6. Literaturverzeichnis 77
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