Immunologische und hämatologische Effekte einer adoptiven Immuntherapie mit einer natürlichen Killerzelllinie (NK-92):
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 5
1.1 Das Immunsystem 5
1.2 Natürliche Killerzellen 7
1.2.1 Eigenschaften von natürlichen Killerzellen 7
1.2.2 Effektormechanismen natürlicher Killerzellen 8
1.2.3 Regulation der Aktivität von natürlichen Killerzellen 10
1.2.4 NK-Zell-Rezeptoren 11
1.2.5 Ko-stimulatorische Moleküle 22
1.3 Abwehr von maligne entarteten Zellen durch das Immunsystem 22
1.3.1 „Tumor-Escape -Mechanismen 23
1.4 Die immortalisierte NK-Zell-Linie NK-92 25
1.4.1 Eigenschaften von NK-92-Zellen 25
1.4.2 Kultur der NK-92-Zellen 27
1.5 Immunologische Strategien in der Tumortherapie 28
1.5.1 Tumortherapien mit NK-Zellen 28
1.6 Fragestellung 33
2 Material und Methoden 34
2.1 Verwendete Materialien 34
2.1.1 Geräte 34
2.1.2 Verbrauchsmaterial 34
2.1.3 Puffer und Medien 35
2.1.4 Zelllinien 36
2.1.5 Blutproben 36
2.2 Methoden 37
2.2.1 Bestimmung der klinisch-chemischen Parameter und
Differenzialblutbild 37
2.2.2 Durchflusszytometrie 37
2.2.3 Cytometric Bead Array (CBA) 42
2.2.4 Untersuchung der Seren auf Antikörper gegen HLA-Klasse-I-
Antigene mittels Flow-Pra® ....43
3 Ergebnisse 45
3.1 Patientencharakteristika 45
3.1.1 Behandlungsschemata 46
3.2 Einfluss einer i.v. Transfusion von NK-92 auf die Gesamtleukozyten,
Thrombozyten und den Hämatokrit 48
3.2.1 Leukozyten 48
3.2.2 Thrombozyten 51
3.2.3 Hämatokrit 53
3.2.4 Synopsis des Blutbildes 55
3.3 Zytokinkonzentrationen im Plasma von mit NK-92 behandelten
Patienten 57
3.3.1 Dosisgruppe 1 x 10« Zellen/m2 KOF Kinder 57
3.3.2 Dosisgruppe 3 x 10« Zellen/m2 KOF Kinder 60
3.3.3 Dosisgruppe 1 x 10» Zellen/m2 KOF Erwachsene 63
3.3.4 Dosisgruppe 3 x 10» Zellen/m2 KOF Erwachsene 66
3.4 JM-Vifro-Zytokinfreisetzung durch NK-92 69
3.5 Antikörperbildung gegen körpereigene HLA-Antigene 70
3.6 Nebenwirkungen der NK-92-Therapie 71
4 Diskussion 75
4.1 NK-92 75
4.2 Studienteilnehmer 77
4.3 Einfluss der NK-92-Therapie auf Veränderungen des peripheren
Blutbildes 77
4.4 Einfluss der NK-92-Therapie auf Veränderungen der
Serumkonzentration inflammatorischer Zytokine 80
4.5 Antikörperantwort 83
4.6 Klinische Symptome 83
4.7 Fazit 85
5 Zusammenfassung/Summary 87
5.1 Zusammenfassung 87
5.2 Summary 89
6 Danksagung 90
7 Referenzen 91
8 Anhang 102
8.1 Abbildungsverzeichnis 102
8.2 Tabellenverzeichnis 105
8.3 Ehrenwörtliche Erklärung 106
8.4 Lebenslauf 107
Anhang 102
8 Anhang
8.1 Abbildungsverzeichnis
Abb. 1: Kontrolle der NK-Zell-Funktion durch die Balance
aktivierender und inhibitorischer Signale (übernommen
aus Smyth MJ 2002) 12
Abb. 2: Strukturelle Organisation der KIRs (übernommen von
Lanier 1998) 15
Abb. 3: Nomenklatur der KIRs gemäß des „KIR Nomenclature
Comitee 2005 21
Abb. 4: Ein- (A) und Zweiparameterdarstellung (B) gemessener
Daten 41
Abb. 5: Leukozytenkonzentration im peripheren Blut nach NK-
92-Zelltherapie in Abhängigkeit von der verabreichten
Zelldosis.
A) pädiatrische Patienten 1 x 109 Zellen 50
B) Erwachsene lxl(P Zellen 50
C) 3 x 109 Zellen 50
Abb. 6: Thrombozytenkonzentration im peripheren Blut nach
NK-92-Zelltherapie in Abhängigkeit von der verab¬
reichten Zelldosis.
A) pädiatrische Patienten 1 x 109 Zellen 52
B) Erwachsene 1 x 109 Zellen 52
C) 3 x 109 Zellen 52
Abb. 7: Hämatokrit im peripheren Blut nach NK-92-
Zelltherapie in Abhängigkeit von der verabreichten
Zelldosis.
A) pädiatrische Patienten 1 x 109 Zellen 54
B) Erwachsene 1 x 109 Zellen 54
C) 3 x 109 Zellen 54
Anhang
Abb. 8: Synopsis der Veränderungen im peripheren Blutbild
unter NK-92-Therapie.
A) pädiatrische Patienten 1 x 109 Zellen 56
B) Erwachsene 1 x 10» Zellen 56
C) 3 x 10« Zellen 56
Abb. 9: Kinetik der Serum-Zytokinkonzentration bei
pädiatrischen Patienten, die mit 1 x 109 NK-92-
Zellen/m2 KOF behandelt wurden.
A)IL-lß 58
B)IL-6 58
QIL-8 58
D)IL-10 59
E)IL-12p70 59
F)IFN-y 59
Abb. 10: Kinetik der Serum-Zytokinkonzentration bei
pädiatrischen Patienten, die mit 3 x 109 NK-92-
Zellen/m2 KOF behandelt wurden.
A)IL-lß 61
B)IL-6 61
QIL-8 61
D)IL-10 62
E)IL-12p70 62
F)IFN-y 62
G)TNF-a 63
Abb. 11: Kinetik der Serum-Zytokinkonzentration bei er¬
wachsenen Patienten, die mit 1 x 109 NK-92-Zellen/m2
KOF behandelt wurden.
A)IL-lß 64
B)IL-6 64
C)IL-8 64
D)IL-10 65
E)IL-12p70 65
F)IFN-y 65
Anhang 104
Abb. 12: Kinetik der Serum-Zytokinkonzenlration bei er¬
wachsenen Patienten, die mit 3 x KP NK-92-Zellen/m2
KOF behandelt wurden.
A)IL-lß 67
B)IL-6 67
C)IL-8 67
D)IL-10 68
E)IL-12p70 68
F)IFN-y 68
Abb. 13: In-Vitro-Zytokinsekretion von NK-92. Die Abbildung
zeigt die Menge der von NK-92 freigesetzten Zytokine
in pg/ml nach einer 24-stündigen Inkubation in X-
Vivo-Medium mit 500IE IL-2/ml 69
Abb. 14: Beispiel eines negativen (A) und eines positiven (B)
Untersuchungsergebnisses auf Bildung von HLA-
Antikörpern. Histogramm einer
durchflusszytometrischen Bestimmung der HLA-
Antikörper im Serum behandelter Patienten mittels
Flow-Pra®. Bei Beladung der mit Anti-HLA-
Antikörpern beschichteten Beads mit HLA-Antikörpern
kommt es zu einer Zunahme der Fluoreszenz (B) 70
Anhang
8.2 Tabellenverzeichnis
Tab. 1: Killer-immunoglobulinähnliche Rezeptoren (KIR) und
ihre Liganden im HLA-Klasse-I-System (übernommen
von Biassoni et al. 2003 [S7|) 20
Tab. 2: „Tumor-Escape -Mechanismen 25
Tab. 3: Charakteristika von NK-92 27
Tab. 4: Charakteristika der in die Studie eingeschlossenen
Patienten und verabreichte Zelldosen 47
Tab. 5: Immunologische Nebenwirkungen einer NK-92-
Immuntherapie; - Induktion einer Antikörper-Antwort
gegen HLA-Antigene. Angegeben ist das Vorliegen (+)
eines gegen HLA-Antigene gerichteten Antikörpers
bzw. das Nicht-Vorliegen (-) eines HLA-Antikörpers
im Serum der Patienten (Pl-Pll) zum angegebenen
Zeitpunkt. HLA-Antikörper werden
durchflusszytometrisch mittels Flow-Pra® bestimmt 71
Tab. 6: Klinisch erfassbare Nebenwirkungen unter der
Therapie mit NK-92 72
Tab. 7: Serologische Parameter zum Monitoring möglicher
Organschädigungen unter NK-92-Therapie 74
|
| adam_txt |
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 5
1.1 Das Immunsystem 5
1.2 Natürliche Killerzellen 7
1.2.1 Eigenschaften von natürlichen Killerzellen 7
1.2.2 Effektormechanismen natürlicher Killerzellen 8
1.2.3 Regulation der Aktivität von natürlichen Killerzellen 10
1.2.4 NK-Zell-Rezeptoren 11
1.2.5 Ko-stimulatorische Moleküle 22
1.3 Abwehr von maligne entarteten Zellen durch das Immunsystem 22
1.3.1 „Tumor-Escape"-Mechanismen 23
1.4 Die immortalisierte NK-Zell-Linie NK-92 25
1.4.1 Eigenschaften von NK-92-Zellen 25
1.4.2 Kultur der NK-92-Zellen 27
1.5 Immunologische Strategien in der Tumortherapie 28
1.5.1 Tumortherapien mit NK-Zellen 28
1.6 Fragestellung 33
2 Material und Methoden 34
2.1 Verwendete Materialien 34
2.1.1 Geräte 34
2.1.2 Verbrauchsmaterial 34
2.1.3 Puffer und Medien 35
2.1.4 Zelllinien 36
2.1.5 Blutproben 36
2.2 Methoden 37
2.2.1 Bestimmung der klinisch-chemischen Parameter und
Differenzialblutbild 37
2.2.2 Durchflusszytometrie 37
2.2.3 Cytometric Bead Array (CBA) 42
2.2.4 Untersuchung der Seren auf Antikörper gegen HLA-Klasse-I-
Antigene mittels Flow-Pra® .43
3 Ergebnisse 45
3.1 Patientencharakteristika 45
3.1.1 Behandlungsschemata 46
3.2 Einfluss einer i.v. Transfusion von NK-92 auf die Gesamtleukozyten,
Thrombozyten und den Hämatokrit 48
3.2.1 Leukozyten 48
3.2.2 Thrombozyten 51
3.2.3 Hämatokrit 53
3.2.4 Synopsis des Blutbildes 55
3.3 Zytokinkonzentrationen im Plasma von mit NK-92 behandelten
Patienten 57
3.3.1 Dosisgruppe 1 x 10« Zellen/m2 KOF Kinder 57
3.3.2 Dosisgruppe 3 x 10« Zellen/m2 KOF Kinder 60
3.3.3 Dosisgruppe 1 x 10» Zellen/m2 KOF Erwachsene 63
3.3.4 Dosisgruppe 3 x 10» Zellen/m2 KOF Erwachsene 66
3.4 JM-Vifro-Zytokinfreisetzung durch NK-92 69
3.5 Antikörperbildung gegen körpereigene HLA-Antigene 70
3.6 Nebenwirkungen der NK-92-Therapie 71
4 Diskussion 75
4.1 NK-92 75
4.2 Studienteilnehmer 77
4.3 Einfluss der NK-92-Therapie auf Veränderungen des peripheren
Blutbildes 77
4.4 Einfluss der NK-92-Therapie auf Veränderungen der
Serumkonzentration inflammatorischer Zytokine 80
4.5 Antikörperantwort 83
4.6 Klinische Symptome 83
4.7 Fazit 85
5 Zusammenfassung/Summary 87
5.1 Zusammenfassung 87
5.2 Summary 89
6 Danksagung 90
7 Referenzen 91
8 Anhang 102
8.1 Abbildungsverzeichnis 102
8.2 Tabellenverzeichnis 105
8.3 Ehrenwörtliche Erklärung 106
8.4 Lebenslauf 107
Anhang 102
8 Anhang
8.1 Abbildungsverzeichnis
Abb. 1: Kontrolle der NK-Zell-Funktion durch die Balance
aktivierender und inhibitorischer Signale (übernommen
aus Smyth MJ 2002) 12
Abb. 2: Strukturelle Organisation der KIRs (übernommen von
Lanier 1998) 15
Abb. 3: Nomenklatur der KIRs gemäß des „KIR Nomenclature
Comitee"2005 21
Abb. 4: Ein- (A) und Zweiparameterdarstellung (B) gemessener
Daten 41
Abb. 5: Leukozytenkonzentration im peripheren Blut nach NK-
92-Zelltherapie in Abhängigkeit von der verabreichten
Zelldosis.
A) pädiatrische Patienten 1 x 109 Zellen 50
B) Erwachsene lxl(P Zellen 50
C) 3 x 109 Zellen 50
Abb. 6: Thrombozytenkonzentration im peripheren Blut nach
NK-92-Zelltherapie in Abhängigkeit von der verab¬
reichten Zelldosis.
A) pädiatrische Patienten 1 x 109 Zellen 52
B) Erwachsene 1 x 109 Zellen 52
C) 3 x 109 Zellen 52
Abb. 7: Hämatokrit im peripheren Blut nach NK-92-
Zelltherapie in Abhängigkeit von der verabreichten
Zelldosis.
A) pädiatrische Patienten 1 x 109 Zellen 54
B) Erwachsene 1 x 109 Zellen 54
C) 3 x 109 Zellen 54
Anhang
Abb. 8: Synopsis der Veränderungen im peripheren Blutbild
unter NK-92-Therapie.
A) pädiatrische Patienten 1 x 109 Zellen 56
B) Erwachsene 1 x 10» Zellen 56
C) 3 x 10« Zellen 56
Abb. 9: Kinetik der Serum-Zytokinkonzentration bei
pädiatrischen Patienten, die mit 1 x 109 NK-92-
Zellen/m2 KOF behandelt wurden.
A)IL-lß 58
B)IL-6 58
QIL-8 58
D)IL-10 59
E)IL-12p70 59
F)IFN-y 59
Abb. 10: Kinetik der Serum-Zytokinkonzentration bei
pädiatrischen Patienten, die mit 3 x 109 NK-92-
Zellen/m2 KOF behandelt wurden.
A)IL-lß 61
B)IL-6 61
QIL-8 61
D)IL-10 62
E)IL-12p70 62
F)IFN-y 62
G)TNF-a 63
Abb. 11: Kinetik der Serum-Zytokinkonzentration bei er¬
wachsenen Patienten, die mit 1 x 109 NK-92-Zellen/m2
KOF behandelt wurden.
A)IL-lß 64
B)IL-6 64
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D)IL-10 65
E)IL-12p70 65
F)IFN-y 65
Anhang 104
Abb. 12: Kinetik der Serum-Zytokinkonzenlration bei er¬
wachsenen Patienten, die mit 3 x KP NK-92-Zellen/m2
KOF behandelt wurden.
A)IL-lß 67
B)IL-6 67
C)IL-8 67
D)IL-10 68
E)IL-12p70 68
F)IFN-y 68
Abb. 13: In-Vitro-Zytokinsekretion von NK-92. Die Abbildung
zeigt die Menge der von NK-92 freigesetzten Zytokine
in pg/ml nach einer 24-stündigen Inkubation in X-
Vivo-Medium mit 500IE IL-2/ml 69
Abb. 14: Beispiel eines negativen (A) und eines positiven (B)
Untersuchungsergebnisses auf Bildung von HLA-
Antikörpern. Histogramm einer
durchflusszytometrischen Bestimmung der HLA-
Antikörper im Serum behandelter Patienten mittels
Flow-Pra®. Bei Beladung der mit Anti-HLA-
Antikörpern beschichteten Beads mit HLA-Antikörpern
kommt es zu einer Zunahme der Fluoreszenz (B) 70
Anhang
8.2 Tabellenverzeichnis
Tab. 1: Killer-immunoglobulinähnliche Rezeptoren (KIR) und
ihre Liganden im HLA-Klasse-I-System (übernommen
von Biassoni et al. 2003 [S7|) 20
Tab. 2: „Tumor-Escape"-Mechanismen 25
Tab. 3: Charakteristika von NK-92 27
Tab. 4: Charakteristika der in die Studie eingeschlossenen
Patienten und verabreichte Zelldosen 47
Tab. 5: Immunologische Nebenwirkungen einer NK-92-
Immuntherapie; - Induktion einer Antikörper-Antwort
gegen HLA-Antigene. Angegeben ist das Vorliegen (+)
eines gegen HLA-Antigene gerichteten Antikörpers
bzw. das Nicht-Vorliegen (-) eines HLA-Antikörpers
im Serum der Patienten (Pl-Pll) zum angegebenen
Zeitpunkt. HLA-Antikörper werden
durchflusszytometrisch mittels Flow-Pra® bestimmt 71
Tab. 6: Klinisch erfassbare Nebenwirkungen unter der
Therapie mit NK-92 72
Tab. 7: Serologische Parameter zum Monitoring möglicher
Organschädigungen unter NK-92-Therapie 74 |
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| spelling | Lemke, Angela 1978- Verfasser (DE-588)133962601 aut Immunologische und hämatologische Effekte einer adoptiven Immuntherapie mit einer natürlichen Killerzelllinie (NK-92) vorgelegt von Angela Lemke 2006 108 S. graph. Darst. 21 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Frankfurt (Main), Univ., Diss., 2007 (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content HBZ Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=016528733&sequence=000002&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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