Modulierende Einflüsse des Bisphosphonates Clodronat und des Immunsuppressivums Mycophenolat-Mofetil auf die Sekretion neurotoxischer Substanzen, die Morphologie und die Proliferation aktivierter Mikrogliazellen:
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis II
Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis - II
Abkürzungsverzeichnis - VI
1 Einleitung - 1
1.1 Neurogliale Immunkompetenz bedingt ZNS-Immunprivileg - 1
1.1.1 Die Sonderrolle des ZNS im Abwehrsystem - 1
1.1.2 Morphologie und Pathophysiologie von Mikrogliazellen, Astrozyten
und deren Interaktion -2
1.2 Schädigung des ZNS führt zu einer Mikrogliazellaktivierung - 4
1.2.1 Spinale Kompression - Primärschaden - 4
1.2.2 Spinale Kompression - Sekundärschaden - 5
1.2.3 Traumatische Schädigung des Gehirns - 6
1.2.4 Chronisch-entzündliche Erkrankungen des ZNS - 6
1.3 Zerstörung der immunologischen Balance im ZNS - 6
1.3.1 Proinflammatorische Botenstoffe führen zur Mikrogliazellaktivierung - 7
1.3.2 Die Sekretion von IL-1 ß, IL-6, TNF-a und NO führt zur Exazerbation
des neuronalen Schadens - 8
1.4. Pharmakologische Modulation der Aktivität von Mikrogliazellen - 10
1.4.1 Das Bisphosphonat Clodronat - 11
1.4.2 Das Immunsuppressivum Mycophenolat Mofetil - 12
1.5 Arbeitshypothesen - 14
1.5.1 Hypothese 1 - 14
1.5.2 Hypothese 2-14
1.5.3 Hypothese 3-14
2 Materialien und Methoden-15
2.1 Materialien-15
2.1.1 Verwendete Substanzen - 15
2.1.2 Verwendete Verbrauchsmaterialen - 17
2.1.3 Verwendete Geräte und Computerprogramme - 17
2.1.4 Medien zur Präparation und Kultivierung von Einzelzellkulturen und
Mikroglia-Astrozyten-Co-Kulturen -17
2.1.5 Verwendete Puffer und Stammlösungen - 18
2.2 Mikroglia-Einzelzellkulturen -19
2.2.1 Gewinnung von Mikrogliazellen - 19
2.2.2 Kultivierung und Isolation von Mikrogliazellen - 20
2.2.3 Protokolle der Zellbehandlung - 21
III Inhaltsverzeichnis
2.3 Mikroglia-Astrozyten-Co-Kulturen - 22
2.3.1 Gewinnung von Co-Kulturen - 22
2.3.2 Behandlung der Co-Kulturen - 23
2.4 Untersuchung der Sekretion proinflammatorischer Zytokine und NO - 24
2.4.1 Stimulation und Hemmung der Sekretion proinflammatorischer Zytokine
und NO - 24
2.4.2 Messung der Zytokinkonzentrationen durch ELISA - 24
2.4.3 Messung der NO-Konzentrationen mittels Griess-Reaktion - 25
2.5 Untersuchung der Morphologie von Mikrogliazellen unter dem Einfluss
von Clodronat und MMF - 26
2.5.1 Fixierung der Zellen - 26
2.5.2 Färbung der Mikrogliazellen mittels konventioneller Immunzytochemie - 26
2.5.3 Färbung der Mikrogliazellen mittels Hämatoxylin-Eosin-Färbung - 27
2.5.4 Auswertung der immunzytochemischen Färbungen
mittels quantitativer Morphometrie - 27
2.5.5 Auswertung der Hämatoxylin-Eosin-Färbungen - 28
2.6 Untersuchung der Proliferation von Mikrogliazellen in einer astrozytär-mikroglialen Co-
Kultur unter dem Einfluss von Clodronat und MMF - 28
2.6.1 Fixierung der Co-Kulturen - 28
2.6.2 Dreifach-Färbung der Co-Kulturen mittels Fluoreszenz-Immunzytochemie - 28
2.6.3 Auswertung derfluoreszenz-immunzytochemischen Dreifach-Färbungen mittels
Konfokaler Laser Scanning Mikroskopie - 29
2.7 Statistische Methoden - 29
2.7.1 Zellzahlen - 29
2.7.2 Konzentrationen von IL-1ß, IL-6, TNF-a und NO - 30
2.7.3 Index of ramification - 31
2.7.4 Co-Kulturen: Zellzahlen und Proliferationsindices - 31
3 Ergebnisse - 33
3.1 Einflüsse des Bisphosphonates Clodronat auf die Sekretion von proinflammatorischen
Zytokinen und NO, die Morphologie und die Proliferation
von Mikrogliazellen - 33
3.1.1 Sekretion von TNF-a, IL-Iß, IL-6 und NO nach der Behandlung von
Mikrogliazellen mit Clodronat - 33
3.1.2 Untersuchung der Zahl und Morphologie von Mikrogliazellen unter dem
Einfluss von Clodronat - 35
3.1.3 Untersuchung der Proliferation von Mikrogliazellen unter dem Einfluss
von Clodronat - 36
3.2 Einflüsse des Immunsuppressivums MMF auf die Sekretion von
proinflammatorischen Zytokinen und NO, die Morphologie und die
Proliferation von Mikrogliazellen - 38
Inhaltsverzeichnis IV
3.2.1 Sekretion von TNF-a, 11-1 ß, IL-6 und NO nach der Behandlung von
Mikrogliazellen mit dem Immunsuppressivum MMF - 38
3.2.2 Untersuchung der Anzahl und Morphologie von Mikrogliazellen nach
Behandlung mit MMF - 39
3.2.3 Untersuchung der Proliferation von Mikrogliazellen unter dem Einfluss von
MMF-40
3.3 Einflüsse von exogenem Guanosin auf die Wirkung des
Immunsuppressivums MMF -42
3.3.1 Die hemmende Wirkung von MMF auf die TNF-a- und NO-Sekretion
wird durch Guanosin aufgehoben -42
3.3.2 Der antagonistische Effekt des Guanosins auf die Wirkung von MMF
läßt sich auch morphologisch nachweisen - 43
3.3.3 Guanosin antagonisiert den proliferationshemmenden Einfluss von
MMF-43
4 Diskussion - 45
4.1 Zu Hypothese 1: Clodronat führt zu einer Deaktivierung von Mikrogliazellen - 45
4.1.1 Clodronat hemmt die Sekretion neurotoxischer Substanzen nur teilweise - 46
4.1.2 Morphologische Betrachtung mikroglialer Zellen nach der Behandlung
mit Clodronat - 49
4.1.3 Clodronat hemmt die Proliferation von Mikrogliazellen - 51
4.2 Zu Hypothese 2: MMF führt zu einer Deaktivierung von Mikrogliazellen - 53
4.2.1 MMF hemmt die Sekretion neurotoxischer Substanzen - 54
4.2.2 Morphologische Betrachtung von Mikrogliazellen nach Behandlung
mit MMF-56
4.2.3 MMF führt zu einer Reduktion des Proliferationsindex von
Mikrogliazellen und Astrozyten - 57
4.3 Zu Hypothese 3: Guanosin antagonisiert die Effekte von MMF auf Mikrogliazellen - 58
4.3.1 Guanosin antagonisiert die Effekte von MMF auf die Zytokinsekretion
von Mikrogliazellen - 59
4.3.2 Morphologische Betrachtung von Mikrogliazellen nach Behandlung
mit MMF und Guanosin - 60
4.3.3 Guanosin hebt den antiprolrterativen Effekt von MMF auf -60
4.4 Schlussfolgerung und Ausblick - 61
5 Zusammenfassung - 64
6 Summary - 66
7 Literaturverzeichnis - 67
V Inhaltsverzeichnis
8 Anhang - 81
8.1 Abbildungsverzeichnis - 81
8.2 Danksagung -106
8.3 Lebenslauf -107
8.4 Ehrenwörtliche Erklärung - 110
|
| adam_txt |
Inhaltsverzeichnis II
Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis - II
Abkürzungsverzeichnis - VI
1 Einleitung - 1
1.1 Neurogliale Immunkompetenz bedingt ZNS-Immunprivileg - 1
1.1.1 Die Sonderrolle des ZNS im Abwehrsystem - 1
1.1.2 Morphologie und Pathophysiologie von Mikrogliazellen, Astrozyten
und deren Interaktion -2
1.2 Schädigung des ZNS führt zu einer Mikrogliazellaktivierung - 4
1.2.1 Spinale Kompression - Primärschaden - 4
1.2.2 Spinale Kompression - Sekundärschaden - 5
1.2.3 Traumatische Schädigung des Gehirns - 6
1.2.4 Chronisch-entzündliche Erkrankungen des ZNS - 6
1.3 Zerstörung der immunologischen Balance im ZNS - 6
1.3.1 Proinflammatorische Botenstoffe führen zur Mikrogliazellaktivierung - 7
1.3.2 Die Sekretion von IL-1 ß, IL-6, TNF-a und NO führt zur Exazerbation
des neuronalen Schadens - 8
1.4. Pharmakologische Modulation der Aktivität von Mikrogliazellen - 10
1.4.1 Das Bisphosphonat Clodronat - 11
1.4.2 Das Immunsuppressivum Mycophenolat Mofetil - 12
1.5 Arbeitshypothesen - 14
1.5.1 Hypothese 1 - 14
1.5.2 Hypothese 2-14
1.5.3 Hypothese 3-14
2 Materialien und Methoden-15
2.1 Materialien-15
2.1.1 Verwendete Substanzen - 15
2.1.2 Verwendete Verbrauchsmaterialen - 17
2.1.3 Verwendete Geräte und Computerprogramme - 17
2.1.4 Medien zur Präparation und Kultivierung von Einzelzellkulturen und
Mikroglia-Astrozyten-Co-Kulturen -17
2.1.5 Verwendete Puffer und Stammlösungen - 18
2.2 Mikroglia-Einzelzellkulturen -19
2.2.1 Gewinnung von Mikrogliazellen - 19
2.2.2 Kultivierung und Isolation von Mikrogliazellen - 20
2.2.3 Protokolle der Zellbehandlung - 21
III Inhaltsverzeichnis
2.3 Mikroglia-Astrozyten-Co-Kulturen - 22
2.3.1 Gewinnung von Co-Kulturen - 22
2.3.2 Behandlung der Co-Kulturen - 23
2.4 Untersuchung der Sekretion proinflammatorischer Zytokine und NO - 24
2.4.1 Stimulation und Hemmung der Sekretion proinflammatorischer Zytokine
und NO - 24
2.4.2 Messung der Zytokinkonzentrationen durch ELISA - 24
2.4.3 Messung der NO-Konzentrationen mittels Griess-Reaktion - 25
2.5 Untersuchung der Morphologie von Mikrogliazellen unter dem Einfluss
von Clodronat und MMF - 26
2.5.1 Fixierung der Zellen - 26
2.5.2 Färbung der Mikrogliazellen mittels konventioneller Immunzytochemie - 26
2.5.3 Färbung der Mikrogliazellen mittels Hämatoxylin-Eosin-Färbung - 27
2.5.4 Auswertung der immunzytochemischen Färbungen
mittels quantitativer Morphometrie - 27
2.5.5 Auswertung der Hämatoxylin-Eosin-Färbungen - 28
2.6 Untersuchung der Proliferation von Mikrogliazellen in einer astrozytär-mikroglialen Co-
Kultur unter dem Einfluss von Clodronat und MMF - 28
2.6.1 Fixierung der Co-Kulturen - 28
2.6.2 Dreifach-Färbung der Co-Kulturen mittels Fluoreszenz-Immunzytochemie - 28
2.6.3 Auswertung derfluoreszenz-immunzytochemischen Dreifach-Färbungen mittels
Konfokaler Laser Scanning Mikroskopie - 29
2.7 Statistische Methoden - 29
2.7.1 Zellzahlen - 29
2.7.2 Konzentrationen von IL-1ß, IL-6, TNF-a und NO - 30
2.7.3 Index of ramification - 31
2.7.4 Co-Kulturen: Zellzahlen und Proliferationsindices - 31
3 Ergebnisse - 33
3.1 Einflüsse des Bisphosphonates Clodronat auf die Sekretion von proinflammatorischen
Zytokinen und NO, die Morphologie und die Proliferation
von Mikrogliazellen - 33
3.1.1 Sekretion von TNF-a, IL-Iß, IL-6 und NO nach der Behandlung von
Mikrogliazellen mit Clodronat - 33
3.1.2 Untersuchung der Zahl und Morphologie von Mikrogliazellen unter dem
Einfluss von Clodronat - 35
3.1.3 Untersuchung der Proliferation von Mikrogliazellen unter dem Einfluss
von Clodronat - 36
3.2 Einflüsse des Immunsuppressivums MMF auf die Sekretion von
proinflammatorischen Zytokinen und NO, die Morphologie und die
Proliferation von Mikrogliazellen - 38
Inhaltsverzeichnis IV
3.2.1 Sekretion von TNF-a, 11-1 ß, IL-6 und NO nach der Behandlung von
Mikrogliazellen mit dem Immunsuppressivum MMF - 38
3.2.2 Untersuchung der Anzahl und Morphologie von Mikrogliazellen nach
Behandlung mit MMF - 39
3.2.3 Untersuchung der Proliferation von Mikrogliazellen unter dem Einfluss von
MMF-40
3.3 Einflüsse von exogenem Guanosin auf die Wirkung des
Immunsuppressivums MMF -42
3.3.1 Die hemmende Wirkung von MMF auf die TNF-a- und NO-Sekretion
wird durch Guanosin aufgehoben -42
3.3.2 Der antagonistische Effekt des Guanosins auf die Wirkung von MMF
läßt sich auch morphologisch nachweisen - 43
3.3.3 Guanosin antagonisiert den proliferationshemmenden Einfluss von
MMF-43
4 Diskussion - 45
4.1 Zu Hypothese 1: Clodronat führt zu einer Deaktivierung von Mikrogliazellen - 45
4.1.1 Clodronat hemmt die Sekretion neurotoxischer Substanzen nur teilweise - 46
4.1.2 Morphologische Betrachtung mikroglialer Zellen nach der Behandlung
mit Clodronat - 49
4.1.3 Clodronat hemmt die Proliferation von Mikrogliazellen - 51
4.2 Zu Hypothese 2: MMF führt zu einer Deaktivierung von Mikrogliazellen - 53
4.2.1 MMF hemmt die Sekretion neurotoxischer Substanzen - 54
4.2.2 Morphologische Betrachtung von Mikrogliazellen nach Behandlung
mit MMF-56
4.2.3 MMF führt zu einer Reduktion des Proliferationsindex von
Mikrogliazellen und Astrozyten - 57
4.3 Zu Hypothese 3: Guanosin antagonisiert die Effekte von MMF auf Mikrogliazellen - 58
4.3.1 Guanosin antagonisiert die Effekte von MMF auf die Zytokinsekretion
von Mikrogliazellen - 59
4.3.2 Morphologische Betrachtung von Mikrogliazellen nach Behandlung
mit MMF und Guanosin - 60
4.3.3 Guanosin hebt den antiprolrterativen Effekt von MMF auf -60
4.4 Schlussfolgerung und Ausblick - 61
5 Zusammenfassung - 64
6 Summary - 66
7 Literaturverzeichnis - 67
V Inhaltsverzeichnis
8 Anhang - 81
8.1 Abbildungsverzeichnis - 81
8.2 Danksagung -106
8.3 Lebenslauf -107
8.4 Ehrenwörtliche Erklärung - 110 |
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| title_fullStr | Modulierende Einflüsse des Bisphosphonates Clodronat und des Immunsuppressivums Mycophenolat-Mofetil auf die Sekretion neurotoxischer Substanzen, die Morphologie und die Proliferation aktivierter Mikrogliazellen vorgelegt von Ariane Conrad |
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