Expression der Aromatase in Prostata-Stromazellen und die Regulation durch Steroide und Phytotherapeutika:
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| Veröffentlicht: |
Marburg
Görich & Weiershäuser
2007
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| Schriftenreihe: | Wissenschaft in Dissertationen
835 |
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|---|---|
| adam_text | Inhaltsverzeichnis
Inhalt
1. Einleitung 1
1.1. Anatomie und Physiologie der Prostata 1
1.2. Pathologie der Prostata 2
1.3. Die benigne Prostatahyperplasie (BPH) 2
1.3.1. Pathologie der benignen Prostatahyperplasie 2
1.3.2. Epidemiologie der benignen Prostatahyperplasie 3
1.3.3. Ätiologie und Pathogenese der benignen Prostatahyperplasie 4
1.3.4. Konservative Therapie der benignen Prostatahyperplasie 8
1.4. Aromatase als möglicher Angriffspunkt der BPH-Therapie 12
1.5. Fragestellung und Ziel der Arbeit 15
2. Material und Methoden 17
2.1. Material 17
2.1.1. Gewebe 17
2.1.2. Zellen 17
2.1.2.1. Stromale Prostatazellen 17
2.1.2.2. Kompetente Zellen 17
2.1.3. Extractum radicis urticae 17
2.1.4. Chemikalien, Enzyme, Kits und Geräte 18
2.2. Zellkulturmethoden 19
2.2.1. Kultur der hPCPs-Zellen 19
2.2.1.1. Kultivieren der Zellen 19
2.2.1.2. Einfrieren und Auftauen der Zellen 20
2.2.1.3. Proliferationsassay 20
2.2.2. Behandlung der hPCPs-Zellen mit Brennesselwurzelextrakt 21
2.3. Molekularbiologische Methoden 21
2.3.1. RNA-Isolierung 21
2.3.2. DNase-Verdau 22
2.3.3. RNA-Gelelektrophorese 22
2.3.4. Reverse Transkription 23
2.3.5. Polymerasekettenreaktion 24
2.3.6. Nested-PCR 25
2.3.7. Etablierung der optimalen PCR-Bedingungen 25
V
Inhaltsverzeichnis
2.3.8. Quantifizierung von mRNA durch RT-PCR (Reverse-Transkriptase-
Polymerase-Kettenreaktion) 26
2.3.9. DNA-Gelelektrophorese 28
2.3.10. Klonierung des PCR-Produktes 29
2.3.10.1. PCR und Reinigung des Produktes 29
2.3.10.2. Ligation 31
2.3.10.3. Transformation, Übernachtkultur 31
2.3.10.4. Minipräparation, Maxipräparation 33
2.3.11. Restriktionsverdau 34
2.3.12. PCR-Analyse des einklonierten Fragments 34
2.3.13. Detektion und Quantifizierung des PCR-Produkts 36
2.3.13.1. Sondenherstellung 36
2.3.13.2. Southern-Blot 37
2.3.13.3. Dot-Btot 38
2.3.13.4. Hybridisierung 38
2.3.13.5. Chemilumineszenzdetektion 39
2.3.13.6. Densitometrische Auswertung 39
2.4. Puffer und Lösungen 40
3. Ergebnisse 43
3.1. Zellkulturergebnisse 43
3.1.1. Ergebnisse der Wachstumskinetik 43
3.2. Molekularbiologische Ergebnisse 46
3.2.1. Behandlung stromaler Prostatazellen mit ERU zur Bestimmung des
Einflusses von ERU auf die Aromatase-mRNA-Expression 46
3.2.2. Ergebnisse der RT-PCR 46
3.2.2.1. Isolierung der RNA aus Prostatagewebe, Plazentagewebe und
stromalen Prostatazellen 46
3.2.2.2. Reverse Transkription und Optimierung der PCR-Bedingungen 47
3.2.2.3. Ergebnis der nested-PCR . 48
3.2.3. Aromatase in Prostatagewebe und stromalen Prostatazellen 48
3.2.4. Klonierung des PCR-Produktes 49
3.2.5. Herstellung einer Sonde zur Hybridisierung 52
3.2.6. Hybridisierung der PCR-Produkte aus Prostatagewebe und
stromalen Prostata/eilen 52
3.2.7. Quantifizierung der Aromataseexpression im Verhältnis zur
GAPDH-Expression in stromalen Prostatazellen 53
VI
Inhaltsverzeichnis
3.2.7.1. Isolierung der RNA aus den behandelten Prostatazellen 53
3.2.7.2. Exponentielle Amplifikation des PCR-Produktes 54
3.2.7.3. Quantifizierung der PCR-Produkte 54
4. Diskussion 61
4.1. Einfluß des Brennesselwurzelextraktes auf das Wachstum stromaler Zellen 61
4.2. Aromatase im Prostatagewebe 63
4.3. Einfluß von Brennesselwurzelextrakt auf die
Regulation der Aromataseexpression 64
4.4. Einfluß des Steroidentzugs auf die Aromatase-Expression 65
4.5. Gesamtbewertung der Ergebnisse und Ausblick 66
5. Zusammenfassung 69
6. Abkürzungsverzeichnis 71
7. Literaturverzeichnis 73
8. Verzeichnis akademischer Lehrer IX
9. Danksagung XI
VII
|
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Inhaltsverzeichnis
Inhalt
1. Einleitung 1
1.1. Anatomie und Physiologie der Prostata 1
1.2. Pathologie der Prostata 2
1.3. Die benigne Prostatahyperplasie (BPH) 2
1.3.1. Pathologie der benignen Prostatahyperplasie 2
1.3.2. Epidemiologie der benignen Prostatahyperplasie 3
1.3.3. Ätiologie und Pathogenese der benignen Prostatahyperplasie 4
1.3.4. Konservative Therapie der benignen Prostatahyperplasie 8
1.4. Aromatase als möglicher Angriffspunkt der BPH-Therapie 12
1.5. Fragestellung und Ziel der Arbeit 15
2. Material und Methoden 17
2.1. Material 17
2.1.1. Gewebe 17
2.1.2. Zellen 17
2.1.2.1. Stromale Prostatazellen 17
2.1.2.2. Kompetente Zellen 17
2.1.3. Extractum radicis urticae 17
2.1.4. Chemikalien, Enzyme, Kits und Geräte 18
2.2. Zellkulturmethoden 19
2.2.1. Kultur der hPCPs-Zellen 19
2.2.1.1. Kultivieren der Zellen 19
2.2.1.2. Einfrieren und Auftauen der Zellen 20
2.2.1.3. Proliferationsassay 20
2.2.2. Behandlung der hPCPs-Zellen mit Brennesselwurzelextrakt 21
2.3. Molekularbiologische Methoden 21
2.3.1. RNA-Isolierung 21
2.3.2. DNase-Verdau 22
2.3.3. RNA-Gelelektrophorese 22
2.3.4. Reverse Transkription 23
2.3.5. Polymerasekettenreaktion 24
2.3.6. Nested-PCR 25
2.3.7. Etablierung der optimalen PCR-Bedingungen 25
V
Inhaltsverzeichnis
2.3.8. Quantifizierung von mRNA durch RT-PCR (Reverse-Transkriptase-
Polymerase-Kettenreaktion) 26
2.3.9. DNA-Gelelektrophorese 28
2.3.10. Klonierung des PCR-Produktes 29
2.3.10.1. PCR und Reinigung des Produktes 29
2.3.10.2. Ligation 31
2.3.10.3. Transformation, Übernachtkultur 31
2.3.10.4. Minipräparation, Maxipräparation 33
2.3.11. Restriktionsverdau 34
2.3.12. PCR-Analyse des einklonierten Fragments 34
2.3.13. Detektion und Quantifizierung des PCR-Produkts 36
2.3.13.1. Sondenherstellung 36
2.3.13.2. Southern-Blot 37
2.3.13.3. Dot-Btot 38
2.3.13.4. Hybridisierung 38
2.3.13.5. Chemilumineszenzdetektion 39
2.3.13.6. Densitometrische Auswertung 39
2.4. Puffer und Lösungen 40
3. Ergebnisse 43
3.1. Zellkulturergebnisse 43
3.1.1. Ergebnisse der Wachstumskinetik 43
3.2. Molekularbiologische Ergebnisse 46
3.2.1. Behandlung stromaler Prostatazellen mit ERU zur Bestimmung des
Einflusses von ERU auf die Aromatase-mRNA-Expression 46
3.2.2. Ergebnisse der RT-PCR 46
3.2.2.1. Isolierung der RNA aus Prostatagewebe, Plazentagewebe und
stromalen Prostatazellen 46
3.2.2.2. Reverse Transkription und Optimierung der PCR-Bedingungen 47
3.2.2.3. Ergebnis der nested-PCR . 48
3.2.3. Aromatase in Prostatagewebe und stromalen Prostatazellen 48
3.2.4. Klonierung des PCR-Produktes 49
3.2.5. Herstellung einer Sonde zur Hybridisierung 52
3.2.6. Hybridisierung der PCR-Produkte aus Prostatagewebe und
stromalen Prostata/eilen 52
3.2.7. Quantifizierung der Aromataseexpression im Verhältnis zur
GAPDH-Expression in stromalen Prostatazellen 53
VI
Inhaltsverzeichnis
3.2.7.1. Isolierung der RNA aus den behandelten Prostatazellen 53
3.2.7.2. Exponentielle Amplifikation des PCR-Produktes 54
3.2.7.3. Quantifizierung der PCR-Produkte 54
4. Diskussion 61
4.1. Einfluß des Brennesselwurzelextraktes auf das Wachstum stromaler Zellen 61
4.2. Aromatase im Prostatagewebe 63
4.3. Einfluß von Brennesselwurzelextrakt auf die
Regulation der Aromataseexpression 64
4.4. Einfluß des Steroidentzugs auf die Aromatase-Expression 65
4.5. Gesamtbewertung der Ergebnisse und Ausblick 66
5. Zusammenfassung 69
6. Abkürzungsverzeichnis 71
7. Literaturverzeichnis 73
8. Verzeichnis akademischer Lehrer IX
9. Danksagung XI
VII |
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